基于多指标和多元统计分析的百两金综合质量评价

基于水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、总黄酮、总酚、总皂苷含量共7个检测指标,通过相关性分析、主成分分析、聚类热图分析,以及CRITIC-TOPSIS和CRITIC-灰色关联度评价模型,对7批不同产地的百两金[Ardisia crispa(Thunb.)A.DC.]开展综合质量评价研究。相关性分析结果表明,7个指标关系密切,信息存在一定重叠;主成分分析共提取总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、总皂苷、水分含量5个主要检测指标,累计贡献率达93.293%;CRITIC法对各指标的赋权结果中,浸出物和总皂苷的权重值排名最为靠前,与主成分分析结果基本吻合。2种评价模型均显示了不同产地百两金较大的质量差异,以CRITIC-灰色关联度模型的变异系数较大(42.8899%),更能反映百两金的质量差异,且与主成分和聚类热图分析结果基本一致。在该模型下,样品BLJ3排名最为靠前,BLJ1、BLJ2、BLJ6、BLJ7排名居中,而BLJ4、BLJ5排名较为靠后。综上所述,7个指标中,浸出物、总皂苷、水分、总灰分、酸不溶性灰分含量5个指标可以作为判断不同产地百两金质量的主要因素,尤其是浸出物、总皂苷含量提供的质量信息较多。2种评价模型中,CRITIC-灰色关联度模型更适用于不同产地的百两金综合质量评价。7批样品中,重庆市彭水县的样品(BLJ3)质量最好,可作为百两金优质种源首选;BLJ1、BLJ2、BLJ6、BLJ7质量居中,可作为备选种源;贵州省贵阳市2个样品(BLJ4、BLJ5)质量较差,在种质资源筛选中需尽量避免。

百两金根中的一个新皂苷

利用各种色谱分离技术,从百两金Ardisia Crispa根中分离得到7个化合物,根据理化性质和光谱数据鉴定为(+)-安五脂素(1),内消旋二氢愈疮木酸(2),6-羟基己酸(3),岩白菜素(4),正十四烷(5),β-谷甾醇(6)和百两金皂苷C(7).其中7为新化合物.采用MTT细胞试验研究化合物7对肝癌细胞Bel-7402的抑制活性.

百两金细胞毒活性成分研究

利用色谱技术从百两金Ardisia Crispa根的65%乙醇溶液中分离得到四个黄酮类化合物,根据理化性质和光谱数据分别鉴定为汉黄芩素(wogonin,1),千层纸素(oroxylin A,2),汉黄芩苷(wogonoside,3)和黄芩苷(ba-icalin,4)。四个化合物均为首次从该属植物中得到,其中化合物3对肝癌细胞Bel-7402具有较强的细胞毒活性,IC50为7.64μg/mL。

百两金的化学成分

从百两金（Ardisia crispa（Thunb.）A.DC.）的根及茎乙醇提取物中分离得到了8个化合物,通过MS和NMR等方法鉴定为（7S,7′R）-双（3,4-亚甲二氧苯基）-rel-（8R,8′R）-二甲基四氢呋喃（1）,（-）-襄五脂素（2）,（7S,8S,7′R,8′R）-3,4-亚甲二氧基-3′,4′-二甲氧基-7,7′-环氧脂素（3）,异安五脂素（4）,α-菠甾醇（5）,26-羟基二十六烷酸甘油酸酯（6）,百两金皂苷B（7）,岩白菜素（8）。其中有化合物1~6为首次从该种植物中分离得到。

苗药八爪金龙中生物活性成分的研究(Ⅰ)

采用水蒸气蒸馏法、索氏提取法分别提取苗药八爪金龙（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）中的挥发油和岩白菜素.利用GC/MS法及HPLC/MS法对挥发油及岩白菜素含量进行测定.结果表明,岩白菜素在30.300～912.000 ng/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系（r=-0.999 1）,平均回收率为97.66％（RSD=2.31％）;八爪金龙挥发油主要成分有己醛、（Z）-2-庚烯醛、3-羟基-1-辛烯、石竹烯、龙脑、9,12,15-十八三烯、3-苯基-2-丙烯醛、芳姜黄酮、n-癸酸、十二烷酸、正丁烯基苯酞、棕榈酸等,含量分别为7.72％、1.82％、1.92％、1.85％、2.48％、2.98％、3.06％、5.17％、4.08％、7.36％、3.11％、29.11％.GC/MS法测定出挥发油中的27个成分,占挥发油总量的87.17％.建立的HPLC/MS方法简单、准确、重复性好,可作为八爪金龙根药材质量检测的方法.

紫外-可见分光光度法测定八爪金龙中总皂苷的含量

目的：测定苗药八爪金龙中总皂苷的含量。方法：用紫外-可见分光光度法进行含量测定,采用正交试验优化测定条件。结果：该法测定的最优条件为加入5%香草醛-冰醋酸0.6 ml和高氯酸1.0 ml,于80℃水浴中反应20 min;线性方程为Y=44.87X＋0.365（r=0.998）,百两金皂苷B在0.045 2-3.870 0 mg范围内呈良好线性关系;平均回收率为101.3%（n=9）,RSD为1.67%。结论：该法用于测定八爪金龙中总皂苷的成分,具有简单、易操作、重复性良好的优点,可为进一步研究八爪金龙提供参考。

百两金药学研究概况

在广泛文献检索基础上,对百两金的种属、成分、药理和临床应用的研究进展进行综述,为进一步开发利用提供资料。

百两金光合速率及其生理生态因子日变化研究

为百两金高效栽培提供理论依据,利用光合作用测定系统对百两金的光合速率的日变化进行了研究.结果表明,百两金叶片净光合速率日变化呈双峰曲线,最高峰出现10:00,次高峰出现在16:00,有明显的"午休"现象,气孔因素是导致午休的主要原因.相关分析表明,百两金光合速率的主要影响因子为胞间CO2浓度和空气相对湿度.百两金叶片光能利用率随着光合有效辐射的增强而降低,说明百两金弱光利用的能力较强.

基于HPLC图谱探究苗药八爪金龙3个基原不同药用部位的差异

目的建立苗药八爪金龙3种基原朱砂根、红凉伞、百两金不同药用部位的高效液相色谱(HPLC),并对指标性成分岩白菜素进行含量测定,通过HPLC图谱和岩白菜素含量的异同来区分八爪金龙的3种基原。方法采用HPLC法,YMC-Pack ODS-A(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;以流动相为乙腈-0.1%H3PO4溶液,梯度洗脱;柱温25℃;流速0.5m L·min-1;进样量:5μL;DAD检测波长:214nm的实验条件,并利用相似度软件对八爪金龙不用药用部位进行相似度分析。又以甲醇-水(25∶75)的流动相;柱温为30℃;1.0m L·min-1的流速;进样量大小为5μL;DAD检测波长为214nm的色谱条件对八爪金龙的不同药用部位进行岩白菜素的含量测定。结果朱砂根与红凉伞在根和茎的部分相似度大于0.9,在岩白菜素的含量方面也极为相近,含量介于14.47~20.47mg·g-1之间。朱砂根叶与红凉伞叶的化学成分存在着较大的差异,相似度只有0.348,朱砂根叶中的岩白菜素含量要明显的高于根和茎中,然而红凉伞叶中的岩白菜素含量比较低。百两金与朱砂根和红凉伞之间无论是化学成分还是岩白菜素的含量的差异性都特别明显。结论该研究结果可为八爪金龙3种基原(朱砂根、红凉伞、百两金)的质量控制、临床应用和资源的合理开发利用提供依据。

百两金萜类代谢相关MYB转录因子挖掘及分析

为探究百两金MYB转录因子参与萜类代谢生物途径,文中结合Mega 7.0、ORF、The MEME等软件,利用STRING、plantTFDB、KEGG、Mega 7.0、ORF、The MEME Suite等工具分析百两金MYB转录因子家族蛋白理化性质、系统进化、GO注释、蛋白功能等.结果获得了54条序列,MYB转录因子基因Cluster-20697.17470、Cluster-10301.0、Cluster-20709.0编码蛋白具有抑制肉桂酸4-羟化酶(C4H)的早期合成的作用,间接影响百两金的萜类产物代谢;推测Cluster-10535.0编码蛋白具有响应茉莉酸酯信号的作用.本研究在MYB转录因子家族中获得了参与萜类代谢途径基因Cluster-20709.0、Cluster-20697.17470、Cluster-10301.0和Cluster-10535.0,说明百两金转录因子参与了调节植物的生长以及次级代谢.研究参与萜类代谢生物途径的百两金MYB转录因子,为后续百两金MYB家族基因的挖掘和功能鉴定提供科学依据.

观果植物百两金引种栽培技术研究

通过对野生紫金牛属植物百两金Ardisia crispas的种子育苗方法、幼苗移栽方法、整形修剪方法、成苗催花方法和日常管理方法等引种栽培试验结果进行总结,为规模种植百两金盆栽观果植物提供技术参考。

瑶药竹叶风质量控制方法研究

目的:建立瑶药竹叶风质量控制方法,为该药材质量标准的制订提供实验依据。方法:采用性状、显微和薄层色谱法(TLC)对竹叶风进行定性鉴别,参照《中国药典》(2010年版)方法进行水分、总灰分、酸不溶性灰分检查和浸出物测定,采用高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定岩白菜素和百两金皂苷A含量。结果:上述鉴别方法专属性强,12批样品水分平均为10.8%,总灰分平均为2.5%,酸不溶性灰分平均为0.6%,醇溶性浸出物平均为17.8%,岩白菜素含量平均为0.14%,百两金皂苷A含量平均为0.28%。根据试验结果制订了竹叶风药材质量控制方法。结论:建立的竹叶风质量控制方法简便、准确、重复性好,可有效控制竹叶风药材质量。

苗药八爪金龙转录组测序与次生代谢产物合成相关基因的挖掘

目的对八爪金龙根进行转录组测序,挖掘次生代谢合成相关基因,探索八爪金龙次生代谢产物生物合成的分子基础。方法采用IlluminaHi Seq4000高通量测序技术,对八爪金龙根进行转录组测序。使用Trinity软件对获得的Unigenes数据进行过滤组装,运用KEGG数据库对Unigenes进行注释。结果共获得52249条Unigenes,其中31391条被公共数据库成功注释,1507条Unigenes被注释到次生代谢产物合成。通过对转录组数据深入挖掘发现,参与八爪金龙苯丙素生物合成的Unigenes共有126条,参与萜类化合物骨架生物合成的Unigenes数量为73条,参与黄酮类化合物生物合成Unigenes有58条,参与次生代谢后修饰的Unigenes共有253条。筛选出9条Unigenes编码4个与八爪金龙香豆素生物合成的关键酶,23条Unigenes编码8个与黄酮生物合成的关键酶,39条Unigenes编码19个与萜类生物合成的关键酶,140条CYP450基因和113条UGT基因可能参与次生代谢物的修饰。微卫星识别软件(microsatellite identification tool,MISA)分析发现八爪金龙转录组包含17 400个简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)。结论通过高通量转录组测序,初步揭示了参与八爪金龙次生代谢产物合成相关的基因,为进一步研究八爪金龙次生代谢产物合成途径关键酶的功能及其调控机制奠定了基础。

百两金根的化学成分研究

目的百两金为传统苗药,其化学成分的有关研究报道较少,本研究目的在于研究百两金的化学成分。方法将百两金干燥根体积分数70%乙醇提取物利用硅胶、重结晶、ODS及制备/半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据对所得化合物结构进行鉴定。结果从百两金根中得到了20个化合物。分别为岩白菜素(1)、甲基岩白菜素(2)、11-O-没食子酰岩白菜素(3)、syringin(4)、(+)-syringaresinol-O-β-D-glucopyranoside(5)、(-)-(7R,8S,7'R,8'S)-4,9,4',9'-tetrahydroxy-3,3'-dimethoxy-7,7'-epoxylignan-9-O-β-D-xylopyranoside(6)、saracoside(7)、isolariciresinol-4-O-β-D-glucopyranoside(8)、(7S,8R)-urolignoside(9)、staphylionoside D(10)、蚱蜢酮(11)、l-borneol 6-O-β-D-aiosyl-β-Dglucoside(12)、(+)-angelicoidenol 2-O-β-D-glucopyranoside(13)、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷(14)、根皮苷(15)、phenethyl alcoholβ-D-(2'-O-β-D-glucopyranosyl)glucopyranoside(16)、phenylethyl-β-D-glucopyranoside(17)、菖蒲碱C(18)、己内酰胺(19)、蔗糖(20)。结论其中化合物5~19为首次从紫金牛科植物中分离得到,化合物4为首次从紫金牛属植物中分离得到,化合物2和3为首次从该植物中分离得到。其中化合物6是自国内学者2013年从岭南杜鹃分离得到以来第二次被分离得到。

百两金中一个新的γ-戊内酯衍生物

采用正相硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、HPLC高效液相色谱法对百两金乙醇提取物进行分离纯化,结合理化性质、UV、MS、NMR等波谱学技术鉴定化合物的结构。从百两金提取物乙酸乙酯部位中分离鉴定出4个单体化合物,分别为百两金内酯A (1)、(+)-pinoresinol (2)、3,5-二甲氧基-4羟苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)和(+)-schizandriside (4),其中化合物1为新化合物,化合物2~4为首次从该植物中分离得到。