基于筋之血化现象探讨化腐再生法对糖尿病大鼠溃疡Arg-1、CD206、DECTIN-1表达的影响

目的基于筋之血化现象探讨Arg-1、CD206、DECTIN-1表达与糖尿病大鼠溃疡的关系,并探索化腐再生法对促愈过程中免疫因子Arg-1、CD206、DECTIN-1的调控机制。方法 30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、治疗1组、治疗2组、治疗3组,每组6只,所有组别用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造成糖尿病模型,外科方法加冰醋酸50u滴到创面上造成糖尿病大鼠肌腱变性坏死溃疡模型。对照组水凝胶换药,模型组凡士林油纱换药,治疗1组生肌橡皮膏外涂换药,治疗2组菠萝蛋白酶撒布换药,治疗3组生肌橡皮膏外涂联合菠萝蛋白酶撒布换药,每日1次。分别于治疗3、7、14、21d眼眶采血,每次1.5ml, ELISA检测血清Arg-1、CD206、DECTIN-1表达,并分别于治疗3、7、14d提取大鼠创周组织,行免疫组化平均光密度值(Average Optical, AO)分析方法检测不同时期Arg-1、CD206、DECTIN-1的阳性表达。结果 ELISA检测结果显示治疗期间对照组、治疗1、2、3组Arg-1、CD206、DECTIN-1含量均呈先低后高趋势。治疗早中期(治疗3d、7d、14d)时治疗3组Arg-1、CD206、DECTIN-1含量低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);治疗后期(治疗21d)时,治疗3组Arg-1、CD206、DECTIN-1含量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化AO分析结果显示化腐再生法作用于创周组织Arg-1、CD206在治疗7d时,治疗3组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);作用于创周DECTIN-1在治疗3d和治疗7d时,治疗3组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论应用化腐再生法参与筋之血化过程的早中期时抑制Arg-1、CD206、DECTIN-1表达,在创面修复过程中有效在后期调控Arg-1、CD206、DECTIN-1表达,双向调节从而有效促进筋之血化过程。

非小细胞肺癌患者肿瘤微环境中TAMs及PD-1表达水平及与临床预后的关系

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)及程序性死亡受体1(PD-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤微环境中的表达及其与患者预后的关系。方法选取2019年1月至12月于九江市第一人民医院胸外科初次确诊且择期手术的76例NSCLC患者作为研究对象,均于术中采集癌组织和癌旁组织,通过免疫组化分析TAMs表型和PD-1表达水平,收集患者临床预后因素,观察1年生存率,分析不同临床预后因素下TAMs表型和PD-1表达水平分布特征,采用COX回归分析患者1年内死亡的风险因素。结果NSCLC患者癌组织PD-1、CD206阳性表达高于癌旁组织,CD86阳性表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织PD-1和CD206阳性表达成正相关(P<0.05)。腺癌PD-1阳性表达水平高于鳞癌,差异有统计学意义(P<0.05)。高分化CD86表达水平高于低分化和中分化,差异有统计学意义(P<0.05);高分化和中分化CD206表达水平低于低分化,差异有统计学意义(P<0.05)。临床Ⅲ期和Ⅱ期PD-1阳性表达水平高于Ⅰ期,差异有统计学意义(P<0.05);临床Ⅲ期和Ⅱ期CD86阳性表达水平低于Ⅰ期,差异有统计学意义(P<0.05)。浸润性生长患者的CD206表达水平高于非浸润性生长,差异有统计学意义(P<0.05)。76例NSCLC患者1年生存率为76.32%;PD-1(β=0.031,RR=1.031,95%CI=1.007~1.056)和CD206(β=0.066,RR=1.068,95%CI=1.013~1.127)是NSCLC患者1年生存率的危险因素(P<0.05)。结论NSCLC癌组织及癌旁组织中PD-1、CD86和CD206的表达存在明显差异,PD-1高表达、M2型巨噬细胞的高浸润特性可明显增加患者1年内死亡率。

羟基红花黄色素A对高糖诱导RAW264.7巨噬细胞M1/M2表型转化的影响作用

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对高糖(HG)诱导的RAW264.7巨噬细胞向M1型及M2型表型转化的影响作用。方法:①Griess法测定一氧化氮(NO)代谢产物亚硝酸盐(NO_(2)^(-))含量,以确定可诱导巨噬细胞向M1型转化的HG浓度。②CCK-8法确定HSYA在HG中的安全作用浓度。③Western blot检测M1型极化标志物TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iN⁃OS)及M2型极化标志物CD206、精氨酸酶-1(Arg-1)的蛋白表达。④ELISA检测IL-1β含量。结果:①与11.1 mmol/L葡萄糖对照组相比,33.3 mmol/L HG的NO2-含量显著升高(P<0.05)。②HSYA在200μmol/L以下时,细胞在33.3 mmol/L HG中的存活率均在95.0%以上。③与HG模型组相比,HSYA可抑制HG诱导的TNF-α、iNOS蛋白表达并增加Arg-1、CD206表达,其中对TNF-α、iNOS及Arg-1的作用显著(P<0.05)。④HSYA可显著抑制NO、IL-1β等炎症因子生成(P<0.05)。结论:HSYA通过抑制HG诱导的M1型巨噬细胞极化促进M2型标志分子Arg-1表达,抑制NO、IL-1β等炎症因子生成。

肿瘤微环境中TAMs及PD-1表达水平与非小细胞肺癌患者预后的相关性

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、程序性死亡受体1(PD-1)的表达及其与预后的相关性。方法 选取2019年1月至2020年1月商丘市第一人民医院收治的NSCLC患者80例,取肿瘤组织和癌旁正常组织,用免疫组化染色检测组织中TAMs的特异性分子标志物CD163、CD206和PD-1的表达情况,分析肿瘤组织中CD163、CD206表达与PD-1的相关性;分析不同临床病理特征与CD163、CD206和PD-1的关系;进一步用COX回归分析影响NSCLC患者预后的危险因素。结果 NSCLC患者肿瘤组织CD163、CD206和PD-1阳性表达显著高于癌旁正常组织(χ^(2)=36.764,P<0.001;χ^(2)=39.353,P<0.001;χ^(2)=32.028,P<0.001)。NSCLC患者肿瘤组织中TAMs特异性分子标志物CD163、CD206与PD-1表达之间存在显著的正相关性(r=0.281,P=0.030;r=0.339,P=0.008)。NSCLC肿瘤组织中PD-1、CD163、CD206表达与患者的肿瘤大小(χ^(2)=9.643,P=0.002;χ^(2)=3.958,P=0.047;χ^(2)=4.909,P=0.027)、肿瘤分期(χ^(2)=13.500,P<0.001;χ^(2)=13.518,P<0.001;χ^(2)=116.855,P<0.001)有关。COX回归分析显示:CD163、CD206、PD-1高表达、肿瘤分期晚是NSCLC患者预后的独立危险因素(HR=2.056,P=0.032;HR=1.910,P=0.038;HR=1.799,P=0.042;HR=1.853,P=0.025)。结论 CD163、CD206、PD-1在NSCLC患者肿瘤组织中阳性表达高,且与肿瘤大小、肿瘤分期有关,是影响NSCLC患者预后的危险因素,可以作为NSCLC患者预后评定的潜在指标。

维奈克拉联合胞嘧啶核苷类药物对急性髓系白血病患者巨噬细胞炎症蛋白-1α、CD206^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)及不良反应发生率的影响

目的探讨维奈克拉联合胞嘧啶核苷类药物对急性髓系白血病患者巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM,CD206^(+))、免疫调节指标(CD4^(+)/CD8^(+))及不良反应发生率的影响。方法选取我院2019年5月至2021年3月收拾的86例急性髓系白血病患者作为研究对象。按照随机数字表法分为观察组(n=43例)和对照组(n=43例)。对照组患者给予阿扎胞苷治疗,观察组在对照组的基础上增加维奈克拉治疗。比较两组患者治疗前后MIP-1α、CD206^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)指标水平的变化、缓解情况、不良反应发生情况。结果观察组治疗后MIP-1α、CD206^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)表达水平分别为(161.62±40.43)pg/ml、(2.35±0.98)%、(1.21±0.15)%,对照组治疗后MIP-1α、CD206^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)表达水平分别为(180.15±45.53)pg/ml、(3.57±1.21)%、(1.32±0.18)%,两组患者上述指标水平同治疗前比较表达水平均有所改善,且观察组改善更加明显(P<0.05);观察组患者治疗后完全缓解18例、部分缓解16例、未缓解9例,临床总有效率为79.05%,对照组患者治疗后完全缓解8例、部分缓解13例、未缓解22例,临床总缓解率为48.84%,观察组患者临床总缓解率高于对照组(P<0.05);观察组患者治疗后肝功能异常2例、肺部感染2例、恶心与呕吐3例,不良反应总发生率为16.28%,对照组患者治疗后肝功能异常3例、肺部感染2例、恶心与呕吐4例,不良反应总发生率为20.93%,两组患者临床不良反应发生率比较(P>0.05)。结论奈克拉联合阿扎胞苷治疗急性髓系白血病能有效改善MIP-1α、CD206^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)指标水平的变化,改善免疫功能、具有较好的临床疗效和安全性。

M2型肿瘤相关巨噬细胞浸润与食管鳞癌发生、浸润及转移的关系

目的:探讨M2型肿瘤相关巨噬细胞(M2型TAM)浸润与食管鳞癌发生、浸润、转移的关系及其可能机制。方法:采用免疫组化SP法分别检测50例食管鳞癌和50例正常食管黏膜组织中CD206(M2型TAM特异性标志物)、IL-8、MCP-1蛋白的表达;应用原位杂交方法分别检测上述组织中IL-8、MCP-1 mRNA的表达。结果:食管鳞癌组织中M2型TAM的浸润数量多于正常食管黏膜(P=0.032);食管鳞癌间质中IL-8、MCP-1蛋白及mRNA阳性表达率高于正常食管黏膜组织(P<0.05);M2型TAM浸润数量与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移及患者的TNM分期有关(P<0.05),与患者的年龄、性别无关(P>0.05);食管鳞癌间质中M2型TAM的浸润数量与IL-8、MCP-1蛋白和mRNA的表达呈正关联(蛋白:rP=0.432、0.315;mRNA:rP=0.373、0.332,P均<0.05)。结论:M2型TAM与食管鳞癌的发生、浸润、转移有关,其机制可能与TAM分泌的趋化因子IL-8和MCP-1有关。

骨髓间充质干细胞对大鼠缺血性脑卒中炎症反应中小胶质细胞的分子调控机制

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中炎症反应中小胶质细胞的逆转作用是否由CX3C配体1(CX3CL1)来介导。方法 选择大鼠30只,随机选择1只做2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色。参照改良的Zea Longa线栓法构建大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,最终纳入大鼠20只,随机选取2只模型大鼠做TTC染色检测脑梗死灶。将构建好的MCAO模型随机分为2组,每组9只。TTC染色验证模型的成功率。对照组采用侧脑室定位注射移植骨髓间充质干细胞(BMSC),实验组采用侧脑室定位注射CX3CL1干扰慢病毒感染的BMSC。2组分别于1、3、7 d将大鼠断头取材。将脑组织切片均进行抗Iba和抗CD206/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)双重免疫荧光染色,然后在光扫描共聚焦显微镜下计数双染重合阳性的细胞数并进行比较。采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析。组间比较采用单因素方差分析。结果 成功构建大鼠MCAO模型,TTC染色结果可见MCAO模型组存在大脑中动脉供血区的梗死病灶。免疫荧光染色统计结果提示,与实验组比较,对照组在1、3、7 d缺血区抗炎型小胶质细胞(Iba+CD206+)的数量明显增加[(8.644±1.131)和(3.000±1.206)个/每400×高倍视野,(7.866±1.254)和(3.155±1.205)个/每400×高倍视野,(7.111±1.555)和(2.866±1.272)个/每400×高倍视野,均P<0.001];在3和7 d促炎型小胶质细胞(Iba+TNF-α+)的数量明显减少[(4.222±0.974)和(8.355±1.264)个/每400×高倍视野,(4.267±1.321)和(7.822±1.556)个/每400×高倍视野,均P<0.001]。结论 MCAO模型在移植BMSC后对脑卒中缺血区小胶质细胞的逆转作用可能是由CX3CL1来介导的。

原发性肝癌T淋巴细胞浸润和精氨酸酶-1表达的相关性研究

目的观察原发性肝细胞癌(HCC)和癌旁组织中T淋巴细胞浸润和及其和精氨酸酶-1(Arg-1)之间的关系。方法利用肝癌组织芯片和免疫组化方法,检测原发性肝癌和癌旁组织中CD3、CD4、CD8和Arg-1蛋白的表达。纳入分析的共41例HCC、36例癌旁组织。结果 CD3、CD4、CD8和Arg-1在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织,癌旁组织中CD3的表达和淋巴结转移及血HBsAg阳性相关,未发现Arg-1的表达和T细胞标志物之间有明显的相关性。结论 HCC中T细胞浸润和Arg-1表达减少,癌旁组织中T细胞浸润和Arg-1表达增多可能和肝脏局部炎症反应和抗肿瘤免疫功能下调有关。