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含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究
被引量:
1
1
作者
薛茜
温伟红
+6 位作者
孟艳玲
薛采芳
张勇
张巍
王涛
贾林涛
杨安钢
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期1-6,共6页
目的:构建、表达和纯化带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,并对纯化产物的亲和'活性和内化作用进行研究。方法:将Arg9的编码序列分别重组到ScFv14/EGFP基因的5'端、3'端和二者之间,将它们分别克隆入原核表达载体pE...
目的:构建、表达和纯化带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,并对纯化产物的亲和'活性和内化作用进行研究。方法:将Arg9的编码序列分别重组到ScFv14/EGFP基因的5'端、3'端和二者之间,将它们分别克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS进行诱导表达和纯化,用间接ELISA方法检测表达产物与HBsAg的亲和活性,并用间接免疫荧光检测纯化蛋白的内化活性。结果:经测序及酶切鉴定证实4种融合基因序列完全正确;SDS-PAGE和Western blot证实4种融合基因成功表达和纯化;间接ELISA检测证实4种融合蛋白均具有HBsAg结合活性,间接免疫荧光检测显示N端带有Arg9的融合蛋白有较强的内化作用,而且不内化进入HBsAg非表达的细胞。结论:成功构建、表达和纯化了ScFv14/EGFP融合蛋白和3种带有Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,纯化产物均具有抗原HBsAg亲和活性,N端带有Arg9的融合蛋白与靶细胞作用有较强的内化作用。
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关键词
乙型肝炎
HBSAG
单链抗体
arg9
下载PDF
职称材料
Arg9/人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达及活性分析
2
作者
薛茜
温伟红
+5 位作者
孟艳玲
张勇
张巍
王涛
张瑞
杨安钢
《第四军医大学学报》
北大核心
2006年第12期1060-1063,共4页
目的:构建带有转膜结构域Arg9编码序列的R9/ScFv14/EGFP融合基因,将其转化入大肠杆菌中进行表达,并分析表达产物与HBsAg的结合活性.方法:设计引物,将Arg9的编码序列引入单链抗体基因的5′端,PCR扩增后获得带有Arg9编码序列的ScFv14基因,...
目的:构建带有转膜结构域Arg9编码序列的R9/ScFv14/EGFP融合基因,将其转化入大肠杆菌中进行表达,并分析表达产物与HBsAg的结合活性.方法:设计引物,将Arg9的编码序列引入单链抗体基因的5′端,PCR扩增后获得带有Arg9编码序列的ScFv14基因,将PCR产物连入pMD18-T载体,进行序列测定.将测序正确的ScFv14基因和R9/ScFv14基因分别与EGFP基因连接后转化入原核表达载体pET32a,获得ScFv14/EGFP和R9/ScFv14/EGFP两种融合基因的表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,以IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用间接ELISA方法检测其与HBsAg的亲和活性.结果:经酶切鉴定及测序证实ScFv14/EGFP融合基因和R9/ScFv14/EGFP融合基因序列完全正确.SDS-PAGE分析表明两种融合基因在大肠杆菌BL21中成功获得表达,表达量分别占菌体总蛋白的20%和25%.间接ELISA检测证实所表达的ScFv14/EGFP融合蛋白和R9/ScFv14/EGFP融合蛋白均具有HBsAg结合活性.结论:成功构建了带有转膜结构域Arg9编码序列的R9/ScFv14/EGFP融合基因,并在大肠杆菌BL21中成功表达,表达产物ScFv14/EGFP和R9/ScFv14/EGFP均具有与抗原HBsAg特异性结合的活性.
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关键词
肝炎
乙型
肝炎表面抗原
乙型
SCFV
arg9
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职称材料
题名
含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究
被引量:
1
1
作者
薛茜
温伟红
孟艳玲
薛采芳
张勇
张巍
王涛
贾林涛
杨安钢
机构
第四军医大学基础部免疫学教研室
第四军医大学基础部病原生物学教研室
第四军医大学基础部生物化学和分子生物学教研室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第7期1-6,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30400379)国家"973"计划资助项目(2004CB518805)教育部创新团队资助项目(IRT0459)
文摘
目的:构建、表达和纯化带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,并对纯化产物的亲和'活性和内化作用进行研究。方法:将Arg9的编码序列分别重组到ScFv14/EGFP基因的5'端、3'端和二者之间,将它们分别克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS进行诱导表达和纯化,用间接ELISA方法检测表达产物与HBsAg的亲和活性,并用间接免疫荧光检测纯化蛋白的内化活性。结果:经测序及酶切鉴定证实4种融合基因序列完全正确;SDS-PAGE和Western blot证实4种融合基因成功表达和纯化;间接ELISA检测证实4种融合蛋白均具有HBsAg结合活性,间接免疫荧光检测显示N端带有Arg9的融合蛋白有较强的内化作用,而且不内化进入HBsAg非表达的细胞。结论:成功构建、表达和纯化了ScFv14/EGFP融合蛋白和3种带有Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,纯化产物均具有抗原HBsAg亲和活性,N端带有Arg9的融合蛋白与靶细胞作用有较强的内化作用。
关键词
乙型肝炎
HBSAG
单链抗体
arg9
Keywords
Hepatitis B HBsAg ScFv
arg9
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
Arg9/人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达及活性分析
2
作者
薛茜
温伟红
孟艳玲
张勇
张巍
王涛
张瑞
杨安钢
机构
第四军医大学基础部免疫学教研室
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
出处
《第四军医大学学报》
北大核心
2006年第12期1060-1063,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30400379)
国家"973"计划资助项目(2004CB518805)
教育部创新团队资助项目(IRT0459)
文摘
目的:构建带有转膜结构域Arg9编码序列的R9/ScFv14/EGFP融合基因,将其转化入大肠杆菌中进行表达,并分析表达产物与HBsAg的结合活性.方法:设计引物,将Arg9的编码序列引入单链抗体基因的5′端,PCR扩增后获得带有Arg9编码序列的ScFv14基因,将PCR产物连入pMD18-T载体,进行序列测定.将测序正确的ScFv14基因和R9/ScFv14基因分别与EGFP基因连接后转化入原核表达载体pET32a,获得ScFv14/EGFP和R9/ScFv14/EGFP两种融合基因的表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,以IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用间接ELISA方法检测其与HBsAg的亲和活性.结果:经酶切鉴定及测序证实ScFv14/EGFP融合基因和R9/ScFv14/EGFP融合基因序列完全正确.SDS-PAGE分析表明两种融合基因在大肠杆菌BL21中成功获得表达,表达量分别占菌体总蛋白的20%和25%.间接ELISA检测证实所表达的ScFv14/EGFP融合蛋白和R9/ScFv14/EGFP融合蛋白均具有HBsAg结合活性.结论:成功构建了带有转膜结构域Arg9编码序列的R9/ScFv14/EGFP融合基因,并在大肠杆菌BL21中成功表达,表达产物ScFv14/EGFP和R9/ScFv14/EGFP均具有与抗原HBsAg特异性结合的活性.
关键词
肝炎
乙型
肝炎表面抗原
乙型
SCFV
arg9
Keywords
hepatitis B
hepatitis B surface antigens
ScFv
arg9
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究
薛茜
温伟红
孟艳玲
薛采芳
张勇
张巍
王涛
贾林涛
杨安钢
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
2
Arg9/人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达及活性分析
薛茜
温伟红
孟艳玲
张勇
张巍
王涛
张瑞
杨安钢
《第四军医大学学报》
北大核心
2006
0
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职称材料
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