TNNT2基因Arg92Trp突变导致小鼠肥厚型心肌病的表型研究

目的编码心脏肌钙蛋白T的TNNT2基因是肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)的主要致病基因之一,其Arg92Trp变异是HCM的常见致病突变,但是目前尚未有TNNT2突变的基因敲入小鼠模型。本研究的目的是通过建立基因敲入小鼠模型,研究Arg92Trp突变对心脏结构功能的影响,观察是否能够复制人类HCM表型,为研究TNNT2突变导致HCM的机制以及干预治疗奠定基础。方法使用CRISPR/Cas9技术建立TNNT2基因Arg92Trp突变敲入小鼠,分别于8月龄、12月龄和22月龄通过超声心动图在体检测杂合型(TNNT2^(Arg92Trp/+))与野生型(wild type,WT)小鼠的心脏结构和功能,并于22月龄测量小鼠心重体重比及心肌病理改变。结果与人HCM表型相似,与WT小鼠相比,8月龄、12月龄和22月龄TNNT2^(Arg92Trp/+)小鼠左心室前壁和后壁均显著肥厚,心脏收缩功能增强。22月龄小鼠的Masson染色显示心脏出现纤维化,H-E染色显示肌纤维排列紊乱,WGA染色显示心肌细胞显著增大;但ANP和BNP表达未见显著改变。结论本研究首次建立了TNNT2基因突变的基因敲入小鼠模型。该小鼠模型基本能够模拟人类HCM表型。

单纯肥胖者早期动脉粥样硬化与体脂含量及β3肾上腺素能受体基因Trp64Arg突变

目的:探讨β3-肾上腺素能受体(β3-adrenergicreceptor,β3-AR)基因Trp64Arg突变与单纯肥胖者早期动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的关系。方法:无心血管疾病和代谢性疾病的单纯超重/肥胖者295例,按照腰臀比分成周围性肥胖和中心性肥胖组,172例正常体质量的健康人作为对照组。检测各组β3-AR基因Trp64Arg突变频率和血管内皮依赖性舒张功能(endothelium-dependentdilation,EDD),并测定空腹血糖、胰岛素、内皮素和一氧化氮。按稳态模式评估法公式计算胰岛素敏感性。结果:①周围性肥胖组和中心性肥胖组的EDD均较正常体质量组显著降低犤分别为(9.61±3.45)%,(7.36±3.65)%,(11.97±2.56)%,t=1.82,P<0.05,t=2.76,P<0.01犦,中心性肥胖组的EDD降低更明显(t=1.74,P<0.05)。中心性肥胖组一氧化氮水平较正常体质量组和周围性肥胖组显著下降犤分别为(65.03±19.11),(74.21±20.81),(71.92±17.03)μmol/L,t=2.03,2.15,P<0.05犦。②正常体质量组,周围性肥胖组和中心性肥胖组Trp64Arg突变频率分别为18.89%,17.17%和25.26%,后者与周围性肥胖组和正常体质量组比较差异虽无显著性意义(χ2=2.461,2.140,P>0.05),但有明显升高趋势。③周围性肥胖组EDD降低在β3-AR基因突变与无突变者之间差异无显著性意义。

双重杂合性突变Arg304Gln和Arg304Trp导致的遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症

目的:探讨一例遗传性凝血因子Ⅶ(coagulation factor Ⅶ,FⅦ)缺陷症家系基因突变的类型。方法:检测凝血指标以明确诊断;用DNA直接测序法对先证者及其家庭成员FⅦ基因的全部外显子和其侧翼以及启动子进行分析,寻找基因突变;将含突变序列克隆入pGEM T—easy质粒载体中,对所得两条染色体相应序列分别测序,以确定不同突变在染色体上的分布。应用限制性内切酶MspⅠ对先证者及家系成员相应基因片段进行酶切分析,证实测序所发现的突变。结果:先证者在8号外显子上有两种基因突变:11348位C→T突变和11349位G→A突变。pGEM T—easy质粒克隆测序结果显示上述两种突变位于不同的染色体上。为不同染色体同一编码区Arg(CGG)304Trp(TGG)和Arg(CGG)304Gln(CAG)双重杂合性突变。其父亲、母亲分别为11349位G→A和11348位C→T杂合突变;先证者的弟弟FⅦ基因为正常野生型;其哥哥和3个子女均为杂合性突变。PCR辅助限制性酶切证实了先证者及其家系成员的基因突变。结论:先证者FⅦ基因突变为不同染色体同一编码区Arg304Trp和Arg304Gln双重杂合性突变,此种突变类型的组合尚属首例。

双重杂合性突变Arg304Gln和Arg304Trp导致的遗传性凝血因子缺陷症

目的 探讨 1例遗传性凝血因子 (coagulation factor ,F )缺陷症及其家系基因突变的类型。方法 检测凝血指标以明确诊断 ;用 DNA直接测序法对先证者及其家庭成员 F 基因的全部外显子和其侧翼以及启动子进行分析 ,寻找基因突变 ;将含突变序列克隆入 p GEM T- easy质粒载体中 ,对所得两条染色体相应序列分别测序 ,以确定不同突变在染色体上的分布。应用限制性内切酶 Msp 对先证者及家系成员相应基因片段进行酶切分析 ,证实测序所发现的突变。结果 先证者在第 8外显子上有两种基因突变 :11348位 C→ T突变和 11349位 G→ A突变。 p GEM T- easy质粒克隆测序结果显示上述两种突变位于不同的染色体上。为不同染色体同一编码区 Arg(CGG) 30 4 Trp(TGG)和 Arg(CGG) 30 4 Gln(CAG)双重杂合性突变。其父亲、母亲分别为 11349位 G→ A和 11348位 C→ T杂合突变 ;其弟弟 F 基因为正常野生型 ;其哥哥和先证者的 3个子女均为杂合性突变。聚合酶链反应辅助限制性酶切证实了先证者及其家系成员的基因突变。结论 先证者 F 基因突变为不同染色体同一编码区 Arg30 4 Trp和 Arg30 4 Gln双重杂合性突变 ,此种突变类型的组合尚属首例。

单纯肥胖与代谢综合征患者β_3-肾上腺素能受体基因Trp64Arg突变的比较

目的 研究单纯肥胖和代谢综合征 (MS)患者 β3 肾上腺素能受体 (β3 AR)基因Trp6 4Arg突变的发生率及其性别、体脂含量和分布的差异。方法 选择单纯性肥胖症患者 2 95例和MS患者2 19例 ,并以 172例非肥胖者作为对照 ,进行 β3 AR基因Trp6 4Arg突变检测。并进一步比较基因突变的性别差异和对肥胖者按体重指数 (BMI)及腰围分组后的基因突变率。结果 MS组 β3 AR基因Trp6 4Arg突变频率高于单纯肥胖症组和对照组 ,主要表现在男性 (分别为 32 2 5 % ,2 1 0 1%和 19 91% ,P值均 <0 0 5 ) ,并高于本组女性 (32 2 5 %vs 2 3 4 6 % ,P <0 0 1)。进一步分组后发现 ,MS组中男性轻度肥胖者基因突变频率高于本组女性及单纯肥胖组男性轻度肥胖者 (分别为 32 83%vs 17 35 % ,P <0 0 5和 32 83%vs 2 0 4 1% ,P <0 0 5 )。男性腹部脂肪重度堆积者基因突变频率也以MS组高于单纯肥胖组 (35 71%vs 2 0 16 % ,P <0 0 5 )。结论 β3 AR基因Trp6 4Arg突变频率在体脂向心性分布较明显的MS组男性明显升高 。

中国人群β_3肾上腺素能受体基因Trp64Arg突变与冠心病关系的研究

目的 研究中国人群 β3肾上腺素能受体 (β3AR)基因Trp64Arg突变频率以及该突变对冠心病患者临床特征的影响。方法 应用PCR/RFLP技术检测 2 52例中国人 (健康体检者 1 2 0例 ,冠心病患者 1 32例 )的 β3AR基因Trp64Arg突变基因型 ,并比较两组的临床特征。结果 (1 )冠心病组与对照组 β3AR基因Trp64Arg突变频率分别为 1 5 9%与 1 6 7% ,两者差异无显著性 (P >0 0 5)。β3AR基因Trp64Arg突变者的体重指数显著高于正常基因型 (P <0 0 5)。 (2 )突变与否间的临床特征差异无显著性 (P >0 0 5)。结论 β3AR基因突变杂合子型 (Trp/Arg)可能不是冠心病发生的决定因素。但Trp/Arg杂合子与Trp/Trp纯合子人群间体重指数差异有显著性 。

心肌肌钙蛋白ⅠR146W突变对CaN-NFAT3信号通路的影响

目的探讨心肌肌钙蛋白ⅠArg146Trp(cTnI R146W)基因突变在钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFAT)3信号通路中的作用。方法将大鼠胚胎心肌细胞分为转染含cTnI R146W突变的腺病毒(A)组、转染野生型cTnI基因的腺病毒(B)组、腺病毒空载体对照(C)组和空白对照(D)组,Western blot法分别检测胞浆CaN、胞核NFAT3蛋白表达。结果各组心肌细胞中均有CaN蛋白表达,但组间差异无统计学意义(P>0.05);A组NFAT3蛋白表达显著高于B、C、D组(P<0.05)。结论 CaN-NFAT3信号通路参与cTnⅠ R146W突变导致心肌肥大的过程。