Argalis on the Qinghai-Tibet Plateau

The argali are listed by the State as animals subject tosecond-class protection,and no killing is allowed. The international communitylists argali on the Qinghai-Tibet Plateau as animals that must not be hunted.

盘羊源多杀性巴氏杆菌与溶血性曼氏杆菌的分离与鉴定

为探究导致甘肃省某动物园盘羊死亡的病原菌及其生物学特性,笔者采集1只出现剧烈咳嗽、呼吸困难,经救治无效死亡的盘羊的肺组织进行细菌分离培养,通过细菌形态学观察和16S rRNA基因测序鉴定细菌种类,并对分离菌株进行荚膜血清型鉴定、毒力基因检测、药敏试验以及对小鼠的致病性试验。结果显示,从盘羊肺中分离鉴定出1株强致病性的D型多杀性巴氏杆菌和1株强致病性的A2型溶血性曼氏杆菌。D型多杀性巴氏杆菌分离株携带exbB、exbD、fur、tonB、hgBA、plp B和oma87共7种毒力基因,A2型溶血性曼氏杆菌分离株携带irp、ompA、plpE、tbpA、tbpB、fhaC、lkt、lpsA、nanH和gcp共10种毒力基因。2株分离菌对阿卡米星、妥布霉素、红霉素和诺氟沙星均高度敏感,且均能导致小鼠死亡。结果表明,导致甘肃省某动物园盘羊死亡的病原菌可能为携带多种毒力基因的D型多杀性巴氏杆菌和A2型溶血性曼氏杆菌。本结果为该动物园盘羊呼吸道疾病的预防提供了参考,并为发病动物提供了适合的治疗方案。

新疆盘羊种群结构与资源现状

１９９０～１９９４年，结合国际狩猎场规划，对新疆６个代表区域盘羊Ｏｖｉｓａｍｍｏｎ种群作了专题研究。涉及盘羊准噶尔亚种Ｏ．ａ．ｓｅｉｒｅｓｉｓ、南天山亚种Ｏ．ａ．ｋａｒｅｌｉｎｉ和阿尔金山亚种Ｏ．ａ．ｄａｌａｉｌａｍｏｅ。调查面积８３４６ｋｍ２，约占新疆盘羊分布总面积的１１．１％。共统计到８６６只个体。集群类型中，母子群占总群数３１．９％，混合群占２１．７％，雄性群占４６．４％。根据不同区域统计７５群计算，平均每群８．８９（３．９５～１１．６）头，其中１～１０头群占７３．３％；１１～２０头群占１７．３％；２１～３０头群占２．７％；３１～４０头群占４％；４１～５０头群占２．７％。集群规模与栖息密度呈正相关。不同区域性比组成差异显著，雄雌比从１∶０．５４～１∶３．５４不等，平均为１∶１．７８。栖息密度以若羌阿尔金山最高，达１．６７±０３３头／ｋｍ２，其次为玛依力山、艾尔宾山等，推算考察区共有盘羊３８３２～６３５４头。

成年盘羊血液生理生化指标的测定

为了解和掌握盘羊的血液生理生化指标,利用动物全自动血细胞分析仪和半自动生化分析仪对6只盘羊的血液生理生化指标进行了测定,并与同等条件下饲养的家养绵羊的测定结果进行了比较。结果显示,盘羊的淋巴细胞比率、红细胞总数、血红蛋白、红细胞压积、红细胞平均体积、谷丙转氨酶、钙、钾、钠的含量显著高于家养绵羊,差异极显著(P<0.01);淋巴细胞、红细胞分布宽度SD、血小板分布宽度、血糖高于家养绵羊,差异显著(P<0.05);粒细胞、粒细胞比率、中间细胞、中间细胞比率、直接胆红素、氯的含量显著低于家养绵羊,差异极显著(P<0.01);总胆红素的含量低于家养绵羊,差异显著(P<0.05)。本试验的测定结果反映了盘羊的生理机能特性,初步建立了盘羊的血液生理生化指标的参考值,为今后加强盘羊的饲养管理、疾病诊断及杂交繁育研究提供了参考依据。

天山盘羊秋季集群习性和日活动节律初步观察

对野外观察记录的 76群 46 0余只盘羊在 9、 10、 11月份的集群和日活动数据进行统计分析 ,结果表明 :天山盘羊在发情前后从以独羊群、雄性群、雌性群和母子群为主的集群类型转变为以单一的混合群为主的集群类型。集群大小平均由发情前的 8 3± 4 6只变为发情后的 15 9± 11 1只 ,差异极其显著 (P =0 0 0 3 <0 0 1)。结果还发现 ,由于发情前后集群行为的变化 ,盘羊的日活动节律也随之发生显著改变。

盘羊体内绵羊肺炎支原体的分离和鉴定

为查明某动物园的盘羊发生呼吸道疾病的原因,本研究在发病的盘羊群中无菌采集28份鼻腔棉拭子和1份肺组织病料样品。采用支原体专用培养基从4份鼻腔棉拭子和1份肺组织病料样品中分离出5株支原体,连续3次克隆纯化后,通过形态观察、理化试验、PCR及基因特征鉴定,证明分离到的支原体均为绵羊肺炎支原体(MO)。将支原体分离株气管接种4只60日龄健康绵羊,10 d后2只绵羊陆续出现呼吸症状,其中1只伴有明显的体温变化,峰值达41.2℃,其余3只人工感染羊和对照组的羊体温变化不明显。35 d迫杀剖检,1只人工感染羊的肺脏前叶粉色实变明显,显微病理变化主要呈现间质增生性肺炎,其它羊肺脏病变不明显;经培养鉴定和PCR检测,从4只人工感染羊的肺脏样品中再次分离出MO。结果表明引起盘羊发病的病原为MO,本研究为野生盘羊支原体肺炎的快速诊断和防治提供参考依据。

盘羊供体细胞对异种核移植效率的影响

【目的】利用核移植技术生产异种重构胚,研究供体细胞对异种核移植效率的影响。【方法】以新疆盘羊和绵羊耳皮肤组织建立成纤维细胞系,进行细胞遗传学分析;以来自不同个体、不同代次、不同汇合度和不同保存方式的盘羊成纤维细胞为核供体,当地绵羊卵母细胞为受体,进行异种重构胚的构建。【结果】来自3只盘羊耳皮肤成纤维细胞的异种重构胚的卵裂率与囊胚率均无显著差异;采用10代以内的细胞作为核供体,细胞代次不会影响重构胚的发育率;生长到70%～80%汇合的供体细胞重构胚的囊胚率显著高于刚完全汇合组和汇合2～4d组;将供体细胞4℃保存2d,虽降低了卵裂率,但囊胚率没有受到显著影响;盘羊的染色体数目为2n=56,核型式为4(M)+50(T),XY(T,M);绵羊的染色体数目为2n=54,核型式为6(M)+46(T),XY(T,M)。【结论】利用本试验中的3只盘羊耳成纤维细胞,培养到10代以内、70%～80%汇合后用于构建异种重构胚,能得到较高的早期胚胎发育率。

盘羊肺炎支原体感染PCR检测方法的建立与初步应用

羊支原体性肺炎,是由支原体引起的一类高度接触性传染病,又称羊传染性胸膜肺炎（Infections pleuropneumonia of sheep and goats）,临床症状主要表现为高热、咳嗽、消瘦、

ISG15蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用

为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为对照组;B和C组每天分别肌肉注射盘羊杂交羊和巴什拜羊的rISG15 200μg/只,并采用荧光定量PCR方法检测试验羊不同时间血液中ISG15、IL-12、IFN-γ的表达水平。结果显示,IFN-γ表达水平在感染第14 d,B组显著高于A、D组(p<0.05),第21 d,B、C组显著高于A、D组(p<0.05);ISG15的表达量在第14 d与21 d,B、C、D组的表达水平显著高于A组(p<0.05);而在此期间,A组的IL-12表达水平显著高于其它各组(p<0.05),但仅A组出现50%的死亡率。实验数据表明rISG15对易感的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节效果,为绵羊支原体肺炎防治提供了实验依据。

藏羊EPO基因遗传多样性与高原低氧适应性

为探索高原动物适应低氧环境的特殊机制,采集野生盘羊和欧拉型藏羊颈静脉血液,测定血液指标,并对EPO基因遗传多样性进行分析。通过检测发现藏羊群体部分EPO基因存在6个核苷酸变异。野生盘羊和欧拉型藏羊的核苷酸变异数分别为4个和6个,单倍型变异平均数分别为1.527和1.312,核苷酸多样性分别为0.001 1和0.001 0,说明藏羊EPO基因比较保守。野生盘羊优势单倍型Hap-4具有提高红细胞数和血红蛋白含量,而降低红细胞平均体积的趋势。红细胞数和血红蛋白含量的增加提高了盘羊血液携氧能力,红细胞平均体积的降低减小了血液黏稠度,有利于减轻心脏负担,促进血液循环,提高氧运输效率,对藏羊适应高海拔地区的高原低氧环境具有积极作用。

天山盘羊夏季采食地和卧息地生境选择

2010年7—8月采用样线调查法及直接观察法对天山中部古仁郭楞高山区的盘羊天山亚种采食地和卧息地生境进行了研究。共调查5条沟系的12条样线,测量天山盘羊147个采食地和136个卧息地样方,分析了13类生态因子对天山盘羊采食地和卧息地选择的影响。研究结果表明,天山盘羊夏季采食地与卧息地在坡位、坡向、地貌类型、海拔高度、距最近家畜距离、距道路距离和距居民点距离差异极显著(P<0.01),植被高度差异显著(P<0.05),而其它生态因子差异性不显著(P>0.05);相对卧息地的选择而言,夏季盘羊采食地的选择更偏爱海拔较低,植被高度低,距离道路、居民点和最近家畜距离近的半阴半阳坡,山体中下位的高山草甸缓坡生境。逐步判别分析表明,距道路距离、距居民点距离、植被高度、距家畜距离4个生态因子可以用于判别夏季天山盘羊采食地与卧息地生境,正确区分率达到90.6%。

BPI蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊细胞因子水平的影响

研究重组BPI蛋白(rBPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)的盘羊杂交羊的免疫应答分析。将6只巴什拜羊作为A组,将12只盘羊杂交羊随机分为B、C组,全部人工感染MO,感染第4天开始,C组每天分别注射rBPI,A和B组注射生理盐水。采用ELISA方法检测试验羊不同时间血清中IL-8、IL-10、IFN-γ及TNF-α的含量。在试验结束后宰杀各组6只羊,取肺组织做病理切片,进行治疗效果评价。结果:在感染初期,3个组IL-8、TNF-α及IFN-γ含量都升高,而IL-10有降低趋势。在感染后第7天,C组IL-8浓度显著低于A组(P<0.05);在第14—21天,B组极显著高于A组(P<0.01)。在第5天,C组IL-10显著高于A组(P<0.05),极显著低于B组(P<0.01);在第14天,C组极显著低于A组(P<0.01),显著高于B组(P<0.05);在第21天,C组显著低于A组(P<0.05),极显著高于B组(P<0.01)。在第14天,C组IFN-γ含量显著高于A组(P<0.05);在第21天,C组显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。在感染第14天,C组TNF-α显著低于B组(P<0.05),显著高于A组(P<0.05);在第21天,C组的TNF-α显著低于B组(P<0.05),但极显著高于A组(P<0.01)。组织病理学评分结果:A组平均分为9.4,B组平均分19.9,C组平均分为12.8,B组评分显著高于A、C组(P<0.05、P<0.05)。rBPI对MO感染的杂交羊有治疗作用,对细胞因子有调节作用。

阿尔泰山南部科克森山和卡拉麦里山盘羊冬季卧息地的选择

2007年11月至2008年1月,在阿尔泰山南部科克森山和卡拉麦里山采用样线法研究了盘羊冬季卧息地的选择性。结果表明,两地区的盘羊对冬季卧息地的利用均有选择性,两地区盘羊偏好利用山坡做卧息地,避免选择山沟和平滩卧息;偏好位于半阴和半阳坡的卧息地,避免利用阴坡,对阳坡随机利用;偏好位于上坡位和中坡位的卧息地,对下坡位则为随机利用。通过与对照样方比较,科克森山和卡拉麦里山盘羊冬季卧息地均以植物科数多、植物种数多、植物密度高、灌木株数小、驼绒藜株数少、接近隐蔽物、隐蔽级高和雪覆盖浅为主要特征。在科克森山,盘羊通常选择坡度大、雪覆盖浅的位置作为其卧息地。在卡拉麦里山盘羊通常选择坡度大的地方作为其卧息地。科克森山和卡拉麦里山盘羊卧息地变量前6个特征值的累积贡献率分别达到了80.75%和82.58%,较好地反映了盘羊卧息地的生境特征。科克森山和卡拉麦里山盘羊卧息地第1主成分贡献率分别达到了23.04%和24.33%。在两地区,植物科数、植物种数、灌木种数、雪深和坡度5个因子的载荷系数均为正值,具有较大的作用。其余5个主成分中隐蔽级、海拔、距水源距离和距居民点距离也很重要。

杀菌性/通透性增加蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组杀菌性/通透性增加蛋白(r BPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊的细胞因子变化情况,本研究以6只巴什拜羊为A组,12只盘羊杂交羊随机分为B和C两组,全部人工感染MO(ccu=106),感染4 d后C组每天肌肉注射r BPI 150 mg/只,A和B组注射生理盐水,并采用荧光定量PCR方法及ELISA检测实验羊不同时间外周血中BPI、IL-1β、IL-4及IL-6的表达水平。结果显示,B对照组死亡率为33.3%。BPI的表达水平在感染后第7 d,C组显著低于A和B组(p<0.05),第14 d^21 d C组极显著高于B组(p<0.01),而在第7 d^21 d,A组极显著高于B组(p<0.01)。IL-1β表达水平在感染后第7 d^21 d,C组极显著低于A和B组(p<0.01),第21 d,A组显著低于B组(p<0.05)。IL-4的表达水平在感染后第7 d^21 d,C组极显著高于A和B组(p<0.01),第14 d^21 d,A组显著高于B组(p<0.05)。IL-6表达水平在感染第14 d^21 d,C组极显著低于A和B组(p<0.01),A组显著低于B组(p<0.05)。以上结果表明r BPI对感染MO后的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节作用。

盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对体外绵羊肺炎支原体感染的影响

为研究盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对体外绵羊肺炎支原体感染的影响,首先分离试验羊的淋巴细胞,分别将盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白和绵羊肺炎支原体加入体外培养的淋巴细胞中共同孵育,利用real-time PCR技术检测肺炎支原体16SrRNA的表达水平。结果表明,体外淋巴细胞与绵羊肺炎支原体、重组ISG15蛋白共培养12h到96h,盘羊和巴什拜羊重组ISG15蛋白组的肺炎支原体的16SrRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),而杂交羊重组ISG15蛋白组的肺炎支原体的16SrRNA表达水平与对照组差异不显著(P>0.05)。说明盘羊和巴什拜羊重组ISG15蛋白在体外可对绵羊肺炎支原体起到抑制作用。

新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达

本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni 2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642bp,开放阅读框为474bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33ku,表达的蛋白可用Ni 2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。

荒漠地区野生动物调查方法探讨——一种新的调查方法介绍

本文全面总结了我国野生动物调查的主要方法及应用,分析了已有方法在应用中的问题和缺陷,介绍了国际狩猎场的盘羊资源调查方法——地图样带法,并比较了该方法与样线法得出的调查结果差异和两种方法在实际应用中的区别。地图样带法没有长度和宽度概念,也没有规定样带的既定形状,提供了一种确定调查范围和计算样带面积的便捷方法,解决了过去调查中样带面积计算的难题。该方法完全根据实际调查的区域和地形地貌来确定样带的范围,使调查更具灵活性、机动性,并使密度的计算回归到了其本身的意义。该方法没有技术门槛,对广大基层野生动物保护工作者更具可操作性。

盘羊脐带间充质干细胞的分离培养及诱导分化

试验旨在研究野生盘羊脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的分离、培养及体外多向分化潜能等生物学特性。取盘羊分娩后的新生雄性胎儿脐带,采用组织块培养法分离盘羊UC-MSCs后进行体外培养,并对UC-MSCs进行成骨、成软骨和成脂诱导分化,检测其多向分化潜能。结果显示,应用组织块培养法获得的盘羊UC-MSCs具有UC-MSCs特有的呈簇、成纤维状的特性,细胞呈“S”型曲线生长,细胞的倍增时间平均为33.50 h,且可以向成骨细胞、成软骨细胞和成脂细胞分化。诱导分化特异性染色结果表明,野生盘羊UC-MSCs经诱导后的成骨细胞经茜素红S染色呈现典型的橙红色钙沉积物聚集,成软骨细胞经阿利新蓝染色呈现蓝色的软骨基质,成脂细胞经油红O染色呈现深红色的脂滴。实时荧光定量PCR检测结果发现,随着诱导时间的延长,成骨分化的细胞中骨内γ-羧基谷氨酸蛋白(BGLAP)、骨桥蛋白基因(OPN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)基因的相对表达量极显著升高(P<0.01);成软骨分化的细胞中光蛋白聚糖(LUM)基因的表达量明显增加,而双糖链蛋白多糖(BGN)和Y染色体性别决定区基因盒9(SOX9)基因表达量极显著提高(P<0.01);成脂分化的细胞中脂蛋白酶(LPL)和过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)基因的相对表达量极显著上升(P<0.01)。试验结果表明,用盘羊胎盘附带的脐带组织可以分离到盘羊UC-MSCs,且分离到的UC-MSCs具有分化为成骨细胞、成软骨细胞及成脂细胞等多向分化潜能。

基于红外相机对额仁淖尔苏木盘羊(Ovis ammon)生存现状的研究

自2012年12月~2013年12月,利用红外相机技术及样线法首次对额仁淖尔苏木的盘羊生存现状进行研究。结果表明：该种群由3只成体（2♂1♀）2只亚成体（1♂1♀）和1只幼体（1♂）组成;平均每台红外相机的拍摄率为38%;以拍摄率作为衡量盘羊活动频率的标准,冬季盘羊的活动频率达到高峰,春季和夏季较为稳定,秋季降到最低。盘羊对水源点的利用强度占2%,肉食性野生动物占21%,家畜占77%;盘羊对隐蔽度的要求较高,占总生境的59%。

重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊免疫调节作用,本研究将6只巴什拜羊分为A组,18只盘羊杂交羊随机分为B、C、D组,对实验羊人工感染MO后第5 d,C组气管注射巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白、D组气管注射盘羊杂交羊重组SPLUNC1蛋白,每天150μg/只;A、B组每天气管注射等量的生理盐水作为对照组。采用ELISA方法检测各组羊血清中MO抗体水平以及IL-8、IL-12、IL-13表达水平。结果显示,感染前所有实验羊MO抗体均为阴性,感染后第14 d所有实验羊MO抗体均为阳性;IL-8水平在感染后第14 d^21 d,A、C、D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01)。IL-12水平在感染后第14 d,A、C和D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01),第21 d时,A、C和D组极显著低于B组(p<0.01)。IL-13水平在感染后第5 d,A组显著低于B、C和D组(p<0.05),在第7 d^21 d,A、C、D组显著和极显著低于B组(p<0.05;p<0.01;p<0.01)。实验数据表明重组SPLUNC1蛋白对盘羊杂交羊具有明显的免疫调节作用。本研究为绵羊支原体肺炎的治疗提供了实验依据。