高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定红参中的精氨酸单糖苷(AF)及精氨酸双糖苷(AFG)含量

目的建立一种同时测定人参加工品中精氨酸单糖苷(AF)和精氨酸双糖苷(AFG)含量的方法。[方法]用PrevailTMC18column(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱进行检测。流动相A:色谱乙腈,流动相B:5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟醋酸溶液。色谱条件为[0%A(0 min);0%A(5 min);15%A(8 min);35%A(25 min)];流速0.8 mL/min;漂移管温度为115℃;气体流量3.2 L/min。[结果]AF和AFG的检测限分别为0.015和0.010 mg/mL;线性关系相关系数分别为,AF:0.9997,AFG:0.9999,表明线性关系良好。AF和AFG检测的精密度,重复性,稳定性以及回收率的相对标准偏差分别为0.43%&0.37%,0.43%&0.55%,0.43%&0.49%,0.45%&0.15%。AF和AFG检测的回收率分别为99.5%&100%,表明方法稳定。经检测,高丽红参,中国红参和生晒参中AF含量分别为0.74%,0.91%和1.14%,AFG含量分别为6.69%,5.12%和0.85%。[结论]这种方法成功用于高丽红参,中国红参及生晒参中AF及AFG的检测;且红参中AF和AFG含量明显高于生晒参。该方法测定结果可靠,缩短了测定时间,较少杂质干扰。但因为本研究考察氨基酸种类较少,当衍生物种类较多时,仍需进一步考察其分离度。

红参中新化合物精氨酸苷的生成机理及生成条件的研究

红参加工过程中，鲜人参中的麦芽糖和精氨酸经加热后发生梅拉德反应而生成一种新的化合物，即精氨酸糖苷（ＡＦＧ）．反应必须在酸性（ｐＨ＜３．０）条件下进行，且水分的增加可抑制ＡＦＧ的生成量．

红参中精氨酸双糖苷对小鼠的抗疲劳作用

目的:观察小鼠强迫性游泳诱发的疲劳现象,探讨红参中非皂苷类物质——精氨酸双糖苷(AFG)对小鼠的抗疲劳作用及其初步机制。方法:从红参中分离出AFG提取物,将80只ICR小鼠分为空白对照组,低、中和高剂量(100、200和400mg·kg^(-1))AFG组,每组20只,连续灌胃给药28d后对小鼠进行强迫性游泳实验,检测各组小鼠体质量,脏器指数,强迫性游泳时间,乳酸(LD)、尿素氮(BUN)、肝糖原(Gly)水平及腓肠肌中PGC-1α基因表达水平。结果:与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠的体质量和脏器指数差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠强迫性游泳时间、Gly水平和PGC-1αmRNA基因表达水平均明显增加(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性;与空白对照组比较,低、中和高剂量AFG组小鼠血清中的LD和BUN水平明显降低(P<0.01)。结论:AFG对小鼠有抗疲劳作用,其机制可能与能量代谢有关。

西洋参中精氨酸双糖甙的发现及定量分析

应用日立－８３５型氨基酸分析仪，对西洋参加工样品进行检测，发现经过一定时期贮存的西洋参中含有精氨酸双糖甙，其含量为０．１０５４％，而在新加工的西洋参中未检出；新鲜的西洋参加工为西洋红参，其含量达０．７８６７％。

精氨酸单糖苷(AF)对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的:研究精氨酸单糖苷(Arginyl-fructose,AF)对环磷酰胺(CTX)诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:ICR小鼠100只,随机分成5组,即正常对照组(N),免疫抑制模型组(M),免疫抑制AF低、中、高剂量组(M-L、M-M、MH)。试验组连续给药28 d。免疫抑制组,每周前3天,腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺,形成免疫抑制。末次给药12 h解剖后,测定免疫器官指数,AF对脾淋巴细胞转化及增殖、巨噬细胞吞噬功能、特异性Ig G抗体、血清中TNF-α、IL-2含量的影响。并通过实时荧光定量PCR检测TNF-α、IL-2基因表达的差异。结果:AF能够显著提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数,促进脾淋巴细胞的自然转化与增殖,增强巨噬细胞吞噬功能,显著提高小鼠血清中特异性Ig G抗体含量,可显著提高小鼠血清中TNF-α、IL-2含量,实时荧光定量PCR检测结果显示,TNF-α、IL-2 mRNA能够良好表达。结论:AF能拮抗CTX免疫功能低下小鼠的免疫抑制作用。

精氨酸双糖苷对脂多糖诱导的巨噬细胞分泌炎症因子的影响

为研究精氨酸双糖苷(AFG)体外的抗炎机制,以脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)作为炎症模型,用精氨酸双糖苷(AFG)的低、中、高(5、10、20 mg/L)三个剂量进行干预后,MTT法测定细胞毒性作用,Griess法测定一氧化氮(NO)生成量,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及前列腺素E2(PGE2)的分泌量。结果表明:AFG的三个不同剂量对RAW264.7细胞无抑制作用(P>0.05),各浓度给药组的NO、IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE2含量与LPS刺激模型组相比较都显著降低(P<0.01),推想AFG的抗炎活性可能是通过抑制NO和PGE2等炎症介质释放,降低IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的含量而发挥了作用。

人参中精氨酸双糖苷和单糖苷的研究进展

人参作为我国传统的一种药食同源植物,已被广泛应用于流行性功能性食品和膳食补充剂中。在其加工过程中(蒸制和烘烤等),很容易就会发生美拉德反应。精氨酸双糖苷(arginyl-fructosyl-glucose,AFG)和精氨酸单糖苷(arginyl-fructose,AF)就是通过美拉德反应生成的一类比较典型的化合物,分别是精氨酸和麦芽糖或葡萄糖在美拉德反应早期形成的主要阿马里多(Amadori)重排化合物,既可通过蒸制和烘烤人参进行制备,又可通过精氨酸和糖反应进行人工合成。由于目前关于AFG和AF的研究相对较少,且常规的药理活性尚未综合报道,因此本文通过对人参中AFG和AF的理化性质、制备方法、含量测定以及药理活性进行综述,以期为今后改进制备工艺、研究和产品开发提供理论依据。

精氨酸双糖苷对黑色素瘤B16细胞的作用及其机制初步研究

研究精氨酸双糖苷(Arginyl-Fructosyl-Glucose,AFG)抑制黑色素瘤B16细胞的增殖及诱导凋亡作用,并初步探讨了其Bcl-2、Caspase-3、Bax信号通路的作用机制。培养黑色素瘤B16细胞,配制1,2.5,5,10,25,50,75,100μmol/L的精氨酸双糖苷作用于黑色素瘤B16细胞,48 h后利用CKK-8法检测精氨酸双糖苷对B16细胞增殖影响;采用LDH检测给药后细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)表达水平;用Hoechst33258荧光染色法观察精氨酸双糖苷对B16细胞凋亡形态的影响;采用RT-PCR和Western Blot法分析精氨酸双糖苷对B16细胞Bcl-2、Caspase-3、Bax mRNA和蛋白表达的影响。结果表明:随着给药浓度的增大和培养时间的增加,精氨酸双糖苷对B16细胞的抑制率增加,48 h后抑制率达到平台期。50,75,100μmol/L浓度的精氨酸双糖苷抑制效果最佳,B16细胞存活率显著降低(P<0.05,P<0.01),可明显观察到B16细胞凋亡;RT-PCR和Western Blot试验发现,精氨酸双糖苷75,100μmol/L组B16细胞Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显减少(P<0.01),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01)。精氨酸双糖苷可抑制黑色素瘤B16细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与上调Bcl-2、Caspase-3,下调Bax有关。

精氨酸双糖苷对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的研究精氨酸双糖苷（arginyl-fructosyl-glucose,AFG）对环磷酰胺（CTX）诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法取BALB/C小鼠脾淋巴细胞,以不同浓度AFG（1,2,4,6,8,10μg/ml）刺激淋巴细胞的体外转化。另取ICR小鼠80只,随机分为8组：正常对照组（N）和免疫抑制模型组（M）给予生理盐水,免疫抑制给予AFG组：M＋AFG-H,M＋AFG-M和M＋AFG-L,三组分别给予50,30,10 mg/kg bw AFG,正常给AFG组：N＋AFG-H,N＋AFG-M和N＋AFG-L三组对应给予高中低50,30,10 mg/kg bw AFG。免疫抑制对照组及M＋AFG-H,M＋AFG-M,M＋AFG-L在第1、2、3、9、16、23、30 d小鼠腹腔注射CTX 80mg/kg。测定AFG对BALB/C小鼠淋巴细胞体外转化的影响。30 d后处死ICR小鼠,测定胸腺指数和脾脏指数。AFG对脾淋巴细胞自然转化,T细胞转化,B细胞转化的影响,以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-2（IL-2）含量。结果高中低剂量AFG均能显著提高免疫抑制小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P〈0.01,P〈0.05=。AFG对于体外脾淋巴细胞转化的促进作用随浓度的增大而增大,加药剂量为1-10μg/ml时,转化率呈浓度依赖性。AFG中剂量能显著促进免疫抑制小鼠脾细胞的自然转化（P〈0.05）,而AFG低剂量能极显著促进脾淋巴细胞的自然转化（P〈0.01）;高剂量AFG对于免疫抑制小鼠T淋巴细胞的转化具有显著性（P〈0.05）;高中低剂量AFG均能显著促进免疫抑制小鼠B淋巴细胞的转化（P〈0.01,P〈0.05）。AFG高中低剂量均能显著提高免疫抑制小鼠血清中TNF-α（P〈0.01）,其中高中剂量均能显著增加IL-2含量（P〈0.01,P〈0.05）。结论 AFG具有很强的免疫增强活性并能拮抗CTX的免疫抑制作用。

精氨酸双糖苷对糖尿病肾病小鼠的治疗作用及基因转化生长因子-β1和胶原蛋白Ⅳ相关性研究

目的探究精氨酸双糖苷(AFG)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏的保护作用及转化生长因子(TGF)-β1和胶原蛋白Ⅳ基因表达相关性研究。方法随机选取12只小鼠为空白对照组,其余均用高脂饲料和链脲佐菌素(STZ)诱导DN小鼠模型,分为DN模型组、二甲双胍组、10,20,40 mg·kg-1AFG组,各组分别干预5周,每周检测小鼠血糖浓度,称量小鼠体重,5周末称量小鼠最后体重,计算肾指数,检测24 h尿蛋白总量和血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC); HE染色观察肾脏病理变化情况;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肾脏中TGF-β1、胶原蛋白ⅣmRNA的表达情况。结果 AFG给药组的尿蛋白、TC、TG、HDLC的含量与模型组相比较有显著的下降趋势;经AFG给药组干预后的SOD、GSH、CAT、T-AOC含量与模型组相比较有明显的上升趋势,病理状况减轻; AFG各剂量组小鼠肾脏中TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ基因表达量与模型组相比均显著降低。结论 AFG能降低小鼠24 h尿蛋白总量、减轻肾脏病理损伤、减少肾脏中TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ基因的表达,对糖尿病引起的肾损伤有一定的保护作用。

人参中精氨酸双糖苷的研究进展

精氨酸双糖苷(AFG)是存在于红参中的一种有效成分,它属于一种精氨酸衍生物。综述近年来对精氨酸双糖苷的提取制备、合成、检测方法及药理作用的研究现况。AFG的制备是将红参放入甲醇溶液中超声提取3次,合并上清液得到红参水提物,通过聚丙烯酰胺凝胶柱和阳离子交换树脂达到了AFG的分离和纯化,精氨酸和麦芽糖通过酸性环境在加热情况下实现了人工合成,通过薄层扫描法和氨基酸自动分析仪对AFG的含量进行检测。同时精氨酸双糖苷还具有很强的药理活性,如抗氧化、抗炎和抗糖尿病等。

精氨酸双糖苷检测方法的建立及药动学研究

目的建立快速、灵敏、高效的精氨酸双糖苷的测定方法并研究精氨酸双糖苷在大鼠体内的药动学。方法以乌苯美司作为内标,采用LC-MS/MS检测方法测定血浆中精氨酸双糖苷浓度,利用DAS2.0软件计算药动学相关参数,并分析方法的可靠性。结果空白血浆对检测物质不产生干扰,在20～20 000 ng/mL符合线性关系,方法学中RSD以及RE值均小于15%。结论采用LC-MS/MS方法检测精氨酸双糖苷方法合理可靠,精氨酸双糖苷的绝对生物利用度为(4.50±3.75)%。