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Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响
1
作者
廖芳芳
苑嗣纯
+1 位作者
张中文
吴国娟
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1848-1856,共9页
【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5(亦称UCH37)的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arka...
【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5(亦称UCH37)的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5μL LipofectamineTM2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。
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关键词
arkadia基因
UCH37
基因
转染
表达载体
TGF-β1/Smads信号通路
下载PDF
职称材料
题名
Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响
1
作者
廖芳芳
苑嗣纯
张中文
吴国娟
机构
北京农学院动物科技学院
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1848-1856,共9页
基金
国家自然科学基金项目(31172362
30972215)
+2 种基金
北京市自然科学基金项目(6092004
5102014)
北京市属高校人才强教计划项目(PHR)
文摘
【目的】构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5(亦称UCH37)的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响。【方法】通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率。分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化。【结果】①30 pmol siRNA和1.5μL LipofectamineTM2000为最佳转染条件;②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显;③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降。【结论】成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路。
关键词
arkadia基因
UCH37
基因
转染
表达载体
TGF-β1/Smads信号通路
Keywords
arkadia
gene
UCH37 gene
transfection
expression vector
TGF-β1/Smad7 signal pathway
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响
廖芳芳
苑嗣纯
张中文
吴国娟
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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