ARL4C的生物功能及其与肿瘤的相关性

癌症是目前威胁人类健康的最常见的疾病之一。越来越多的证据表明,癌症是一种人类基因组疾病。因此,探究导致癌症的相关基因及其发病机制成为目前癌症治疗研究的热点。ADP-核糖基化因子4c(ADP-ribosylation factor-like 4c,ARL4C)属于三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate,GTP)结合蛋白家族,在1999年由Jacobs等首次从人膀胱上皮细胞中检测到该分子cDNA的全长编码序列。本文概述了ARL4C分子结构及生物学功能,同时总结了其在肺癌、结直肠癌、胃癌、胰腺癌、原发性人胶质母细胞瘤、卵巢癌、肾癌等肿瘤中的研究进展。希望通过本文的概述,能够为研究ARL4C与癌症的发生、发展的相关性及相关信号通路提供思路,进而为肿瘤的治疗提供新的靶点以及预后标记物。

非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其在EGFR-TKI耐药中的作用

目的探讨非小细胞肺癌中ARL4C的表达及其与临床病理特征的关系以及在EGFR-TKI耐药中的作用。方法收集63例NSCLC患者的癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测ARL4C的表达并分析其与临床病理特征之间的关系。qRTPCR和Western blot法检测ARL4C在各细胞株中的表达,MTS检测细胞活性及IC50的变化,Transwell侵袭实验检测ARL4C表达变化对细胞侵袭能力的影响。结果非小细胞肺癌组织中ARL4C表达水平低于癌旁组织(P<0.05),其表达水平与淋巴结转移、TNM分期和肺膜侵犯密切相关(P<0.05)。TKI耐药细胞株HCC827/ER中ARL4C在mRNA以及蛋白表达水平相较对照细胞株HCC827显著下调(P<0.05);ARL4C过表达细胞株HCC827/ER/ARL4C-OEIC50显著下降(P<0.05),Transwell分析结果显示过表达ARL4C后肺癌细胞的侵袭能力受到抑制(P<0.05)。结论ARL4C异常表达与非小细胞肺癌淋巴结转移、TNM分期和肺膜侵犯密切相关。过表达ARL4C能提高非小细胞肺癌细胞对EGFR-TKI药物的敏感度并抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭能力。

Arl4c在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨ADP-核糖基化样因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C,Arl4c)在结肠癌中的表达以及与临床病理特征的关系。方法收集结肠癌组织标本70例和正常结肠黏膜组织标本70例,采用免疫组织化学方法检测结肠癌组织及正常结肠黏膜中Arl4c的表达情况,并对其表达进行临床病理特征分析。结果 Arl4c在结肠癌组织中阳性表达率为55.7%,而在正常结肠黏膜中为11.4%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Arl4c在结肠癌中的表达在不同病理分化程度间差异有统计学意义(P<0.05),在不同性别、不同年龄、不同临床分期及有无淋巴结转移的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论Arl4c在结肠癌中过表达,可能参与了结肠癌的发生发展,将可能成为结肠癌诊断治疗的新靶点。

RNAi沉默Arl4c对结肠癌细胞株HCT116增殖能力的影响

目的探讨利用RNA干扰技术沉默Arl4c基因对结肠癌HCT116细胞株增殖的影响。方法将Arl4c基因的siRNA稳定转染至HCT116细胞,采用RT-PCR、Western blot鉴定干扰效果,以HCT116细胞沉默Arl4c基因组为实验组,以转染空质粒的HCT116细胞和空白的HCT116细胞为对照组,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞倍增时间、平板克隆形成实验、流式细胞术检测沉默Arl4c基因后,HCT116细胞生长速度、细胞周期、克隆形成能力的改变。结果沉默Arl4c基因后,实验组细胞的生长速度明显下降,G1期细胞增多、S期细胞减少,空白对照、空质粒对照组和实验组细胞平均倍增时间分别为(4.718±0.212)h,(4.981±0.24)h和(6.0±0.137)h;空白对照、空质粒对照组和实验组平均细胞克隆形成数目分别为121±9.00,117±10.00和80±9.00。实验组与空白对照、空质粒对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Arl4c基因的沉默能够抑制结肠癌细胞HCT116的增殖,可能在结肠癌的发生发展中起重要作用。

ARL4C在睾丸生殖细胞肿瘤中的表达及临床意义

目的:探讨ADP-核糖基化因子-4C(ARL4C)在睾丸生殖细胞肿瘤(TGCT)中的表达及其临床意义。方法:收集GEPIA数据库及天津医科大学第二医院2015-2019年睾丸生殖细胞肿瘤病人临床及病理信息,探索ARL4C在睾丸生殖细胞肿瘤中的表达情况及其对预后的影响,免疫组化、RT-qPCR及Western验证,通过STRING数据库寻找其可能的作用机制。结果:与正常组织相比,ARL4C在胆管癌、多形性胶质母细胞瘤、肾透明细胞癌、急性髓系白血病、肺鳞状细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、胰腺癌、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤、胃腺癌、睾丸生殖细胞肿瘤、胸腺瘤、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤中均呈现高表达状态(均P<0.05),在睾丸生殖细胞肿瘤中生存分析显示高表达ARL4C的患者生存时间减少(P<0.05),GEPIA数据库提示ARL4C与DIRAS1有相互作用,相关系数为0.45(P<0.05)。免疫组化验证DIRAS1在睾丸生殖细胞肿瘤中呈现低表达状态。结论:ARL4C在睾丸生殖细胞肿瘤中高表达,且其高表达与预后不良相关。

lncRNA AL158206.1/miR-340-5p/ARL4C轴对食管癌增殖和迁移的调控作用

目的观察长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA)AL158206.1在食管癌细胞系中的表达,探讨其通过调控miR-340-5p/ARL4C轴对食管癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AL158206.1在食管癌细胞系及人食管上皮细胞中的表达水平。分别转染AL158206.1质粒(AL158206.1组)和NC质粒(NC组)至AL158206.1表达最低的食管癌细胞系。采用MTT法和Transwell试验检测食管癌细胞增殖和迁移。生物信息学预测AL158206.1的靶基因。采用qRT-PCR和Western blotting法分别测定AL158206.1靶基因的表达。结果与人食管上皮细胞相比,AL158206.1在食管癌细胞系中表达水平明显降低(P<0.05),AL158206.1在KYSE30细胞中的表达最低(P<0.01)。与NC组相比,AL158206.1组中食管癌KYSE30细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),KYSE30细胞的迁移能力明显降低(P<0.05)。AL158206.1的靶基因可能是miR-340-5p,miR-340-5p的靶基因可能是ADP-核糖基化样因子4C(ARL4C)。与NC组相比,AL158206.1组中KYSE30细胞中miR-340-5p表达水平减少(P<0.01),ARL4C在mRNA和蛋白水平表达增高(P<0.01)。结论AL158206.1在食管癌细胞系中低表达,AL158206.1可能通过调控miR-340-5p/ARL4C轴抑制食管癌KYSE30细胞的增殖和迁移能力。

子痫前期患者胎盘组织中miR-1290及ARL4C的表达及其相关性分析

①目的探讨子痫前期胎盘组织中miR-1290及ADP-核糖基化样因子4c(ARL4C)的表达及相关性。②方法收集健康胎盘组织29例,子痫前期胎盘组织14例,子痫前期重度胎盘组织20例。用荧光定量PCR检测胎盘组织中miR-1290mRNA的表达情况,Western Blotting技术检测ARL4C蛋白表达的差异。③结果miR-1290mRNA在正常组、子痫前期组及子痫前期重度组胎盘组织中相对表达量分别为(1.015±0.030)、(1.256±0.425)及(1.797±0.049),呈升高趋势(F=2307.861,P<0.05),ARL4C蛋白相对表达量分别为(0.769±0.375)、(0.528±0.462)及(0.290±0.312),呈下降趋势(F=959.758,P<0.05),差异均有统计学意义。④结论miR-1290在子痫前期患者胎盘组织中表达量增加,随着病情进展明显升高;ARL4C在子痫前期患者胎盘组织中呈低表达,随着病情进展明显降低,二者呈负相关,miR-1290可能通过靶向调控ARL4C影响子痫前期疾病的发展过程。

Lgr5、Arl4c在结肠癌组织中的表达及其对肿瘤恶性生物学行为的影响

目的探讨Lgr5、Arl4c在结肠癌组织中的表达及其对肿瘤恶性生物学行为的影响。方法收集2014年6月-2017年1月在本院确诊并接受治疗的原发性结肠癌患者80例,肠镜下取结肠癌组织、癌旁组织,采用荧光定量PCR法检测其中Lgr5、Arl4c表达量,并根据肿瘤组织中Lgr5、Arl4c表达量中位数分为高Lgr5基因表达组、低Lgr5表达组,高Arl4c表达组、低Arl4c表达组各40例。对比不同Lgr5、Arl4c表达的肿瘤组织中增殖、侵袭基因表达量的差异。结果结肠癌组织中Lgr5、Arl4c mRNA表达量均显著高于癌旁组织(P<0.05);高Lgr5表达组增殖基因MS4A12 mRNA的表达量低于低Lgr5表达组,h TERT、Sph K1 mRNA的表达量高于低Lgr5表达组,侵袭基因LIMK1、PRDX1、PTTG1mRNA的表达量高于低Lgr5表达组,ZNRD1 mRNA表达量低于低Lgr5表达组(P<0.05);高Arl4c表达组增殖基因MS4A12 mRNA的表达量低于低Arl4c表达组,h TERT、Sph K1 mRNA的表达量高于低Arl4c表达组,侵袭基因LIMK1、PRDX1、PTTG1 mRNA的表达量高于低Arl4c表达组,ZNRD1 mRNA表达量低于低Arl4c表达组(P<0.05)。结论结肠癌组织中存在Lgr5、Arl4c高表达,可直接增加肿瘤细胞的增殖、侵袭活性。

miR-1914-3p介导ARL4C抑制肾癌细胞侵袭和增殖的分子机制

目的探究微小RNA(miR)-1914-3p调控ARL4C表达影响肾癌细胞侵袭和增殖能力的分子机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测53例肾癌患者肿瘤组织及癌旁组织、4种肾癌细胞系(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)和正常近端肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-1914-3p的表达水平。利用脂质体法将无意义序列(NC)和miR-1914-3p mimic分别瞬时转染至miR-1914-3p表达最低的肾癌细胞中,即NC组和miR-1914-3p组。qRT-PCR法检测转染细胞中miR-1914-3p的表达水平。Transwell侵袭实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的侵袭和增殖能力。生物信息学软件和双荧光素酶基因报告实验分别预测和检验miR-1914-3p对靶基因的靶向调控机制。qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞中靶基因的表达水平。结果肾癌组织miR-1914-3p表达低于相应癌旁组织(P<0.01)。肾癌细胞系miR-1914-3p表达低于HK-2细胞(P<0.01),OS-RC-2细胞中miR-1914-3p的表达最低(P<0.01)。NC组和miR-1914-3p组miR-1914-3p的表达分别为(1.04±0.17)和(11.40±0.91),miR-1914-3p组中miR-1914-3p表达水平显著升高(P<0.01),表明转染成功。过表达miR-1914-3p能明显抑制OS-RC-2细胞的侵袭(P<0.01)和增殖能力(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证明,miR-1914-3p的靶基因可能是ADP-核糖基化样因子4C(ARL4C),miR-1914-3p能明显抑制野生型ARL4C-3′UTR的荧光素酶活性(P<0.01)。过表达miR-1914-3p可降低OS-RC-2细胞中ARL4C mRNA和蛋白的表达(P<0.01),降低细胞侵袭表型蛋白(Snail、Slug)及细胞增殖表型蛋白(Mcm2、Mcm7)表达。结论miR-1914-3p在肾癌中低表达,其通过靶向干扰癌基因ARL4C的表达抑制肾癌细胞的侵袭和增殖,参与肾癌的发生、发展。