Arrb2基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

目的 探讨Arrb2基因敲除鼠的繁育和基因型分析,验证聚合酶链式反应(PCR)法对Arrb2基因敲除鼠基因型检测的适用性。方法 将引进的Arrb2纯合♂小鼠和野生型♀鼠进行交配繁殖出子一代,获得的F1代杂合子小鼠继续进行交配,待小鼠2周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。Western blot检测验证获得的Arrb2基因敲除纯合子小鼠的主要脏器中β-arrestin2蛋白的表达情况。结果 Arrb2基因敲除鼠的繁育和鉴定取得了成功,获得了一批基因敲除鼠。F1代杂合子小鼠交配获得的F2代小鼠出现3种基因型:Arrb2+/+、Arrb2+/-、Arrb2-/-,使用PCR法成功鉴别了子代鼠的基因型。Western blot结果表明,Arrb2基因敲除纯合子小鼠肝、肾组织中几乎不表达β-arrestin2蛋白。结论 正确的繁殖和鉴定是得到纯合Arrb2基因敲除鼠的重要途径,PCR法鉴别小鼠基因型具有简便、快捷、可靠的特点。

ARRB2基因在新疆哈萨克族患者食管癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨新疆哈萨克族患者食管鳞状细胞癌中基因ARRB2 mRNA的表达情况及其与临床病理特征之间的关系。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测ARRB2基因在40例哈萨克族食管癌患者组织及其对应的远端无癌组织中的表达。结果 ARRB2基因在癌组织和远端无癌组织中的表达阳性率分别为62.5%,60.0%,差异无统计学意义(P>0.05)。ARRB2的表达与组织分化、TNM分期有关(P<0.05)。T内参/N内参≤0.5阳性表达差异率为42.5%(17例),T内参/N内参≥2阳性表达差异率为25.0%(10例)。结论新疆哈萨克族食管癌患者肿瘤组织ARRB2阳性表达率与组织分化、TNM分期有关。

β-制动蛋白2在炎性痛小鼠脊髓背角的表达及作用

目的:通过建立不同类型的炎性痛模型,观察β-制动蛋白2(Arrb2)在炎性痛小鼠疼痛发展过程中的作用。方法:在WT小鼠和Arrb2^(-/-)小鼠建立由卡拉胶(carrageenan)诱导急性炎性痛模型和弗氏完全佐剂(CFA)诱导慢性炎性痛模型,通过von Frey纤维丝法测定不同时间点的机械缩足反应阈值(PWT);利用Western Blot技术观察Arrb2在急性痛和慢性痛中的表达;在脊髓背角采用鞘内给药的方式,通过von Frey纤维丝法检测小鼠给予μ受体选择性激动剂(DAMGO)后短期和长期的PWT。结果:与WT小鼠相比,Arrb2^(-/-)小鼠在急性痛状态下痛敏恢复程度较慢,而在慢性痛早期表现出显著的抑痛作用。Western Blot结果显示:在急性痛模型下,脊髓背角Arrb2蛋白表达无明显变化,而在慢性痛模型下,Arrb2蛋白表达下降。最后,鞘内注射DAMGO实验表明,在急性痛模型下,敲除Arrb2后鞘内注射DAMGO短期无显著作用,后期可诱发吗啡耐受样痛敏;在慢性痛状态下,敲除Arrb2后鞘内注射DAMGO则在短期和长期均表现出镇痛作用的显著增强。结论:Arrb2在不同类型的炎性痛中表达和作用均有所不同。

β-arrestin2基因多态性与湖南省汉族海洛因成瘾者美沙酮维持治疗反应的关联分析

目的研究β-arrestin2（ARRB2）基因的3个单核苷酸多态性（SNP）位点rs3786047、rs1045280、rs2036657在湖南省汉族海洛因成瘾者中的分布及其与美沙酮维持治疗反应的相关性。方法从湖南省美沙酮维持治疗门诊中随机抽取4个门诊，以汉族美沙酮维持治疗者作为研究对象，收集研究对象的一般社会经济学特征、相关吸毒史和美沙酮治疗史资料，测定ARRB2基因多态性位点的基因型以分析SNP位点与治疗反应的关系。结果ARRB2基因rs3786047、rs1045280、rs2036657SNP位点在不同治疗反应组基因型分布频率符合Hardy—Weinberg遗传平衡。在治疗反应好与差两组间，rs3786047（χ2=0．4862，P=0．784）、rs1045280（χ2=1．5919，P=0．451）、rs2036657（χ2=1．0615，P=0．588）的基因型频率分布和等位基因频率分布差异无统计学意义。结论湖南省汉族美沙酮维持治疗人群中尚未发现ARRB2基因单核苷酸多态位点rs3786047、rs1045280、rs2036657与治疗反应有关联关系。