三氧化二砷对肝癌裸鼠移植瘤模型作用的实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡以及对骨髓抑制等作用。方法 :建立肝癌裸鼠移植瘤模型 ,应用 TU NEL 法观察不同浓度的 As2 O3对裸鼠移植瘤凋亡指数 (AI)的影响 ;应用免疫组化 SABC法检测不同浓度的 As2 O3对增殖细胞核抗原阳性细胞指数 (PI)的影响 ;检测移植瘤裸鼠的 WBC并进行骨髓涂片检查。结果 :经 As2 O3治疗的移植瘤裸鼠的骨髓有核细胞增生活跃 ,粒红比例正常 ,巨核细胞多见 ;低、中浓度 As2 O3治疗裸鼠移植瘤的 AI高于对照组 (P <0 .0 1和 P <0 .0 5 ) ;高浓度组 AI与对照组比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。低、中浓度组 PI低于对照组 (P <0 .0 1) ;高浓度组 PI与对照组比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :As2 O3通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡而达到其抗肝癌的效果 ,As2 O3对移植瘤裸鼠骨髓无抑制作用。

三氧化二砷抑制乳腺癌裸鼠移植瘤的生长及其作用机制的探讨

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞裸鼠背部皮下移植瘤生长的抑制作用及其作用机制。方法建立BALB/C-nu/nu裸鼠MCF-7人乳腺癌皮下移植瘤模型,以不同浓度的As2O3行腹腔内注射,与5-氟脲尿嘧啶(5-FU)治疗进行对比,观察移植瘤的瘤重及瘤重抑制率。通过流式细胞仪检测移植瘤的凋亡情况,免疫组织化学法检测bcl-2,Fas基因表达水平的变化,并进行血常规及骨髓涂片检查。结果5-FU(8mg/kg)组,As2O3(4mg/kg)组,As2O3(8mg/kg)组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,抑瘤率分别为38.33%,51.42%和62.43%;As2O3对移植瘤的生长抑制作用明显强于5-FU,差异有显著性(P<0.01)。两种浓度As2O3组MCF-7细胞凋亡率明显高于5-FU组。各实验组乳腺癌细胞存在G2/M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰。移植瘤组织中bcl-2蛋白阳性细胞数明显减少,Fas蛋白阳性细胞数明显增加。血常规及骨髓涂片计数显示As2O3实验组未见造血系统功能受抑,与5-FU组相比较,差异有显著性(P<0.05)。结论As2O3可明显抑制乳腺癌移植瘤的生长,诱导移植瘤MCF-7细胞凋亡;其作用的机制可能是下调bcl-2基因表达,上调Fas基因表达。

三氧化二砷抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长及促凋亡作用

背景与目的:胆囊癌由于缺乏特异性的临床表现确诊时多属晚期,手术切除率较低,且常规化疗药物对胆囊癌的疗效较差,因此需寻找治疗胆囊癌新的有效药物。三氧化二砷(As2O3)在治疗急性早幼粒细胞白血病中取得了突破性成果,近年来它在实体瘤的研究中颇受关注。本研究旨在观察As2O3对人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的抑制及促凋亡作用。方法:20只皮下接种移植瘤大小相似的BALB/c裸鼠,随机分为生理盐水(NS)组(n=10)和As2O3组(n=10)。尾静脉注射NS0.2ml/只(NS组)或As2O310mg/kg(As2O3组),每日1次,连续7d。21d时处死所有裸鼠,测量肿瘤的重量和体积,同时用原位末端标记法检测凋亡细胞并计数。结果:NS组瘤重(1.0±0.4)g、体积(1.5±0.6)mm3;As2O3组瘤重(0.53±0.27)g、体积(0.8±0.4)mm3,瘤重和体积明显下降;NS组凋亡细胞计数为22±4,As2O3组升高至58±10(P<0.01)。结论:As2O3能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长并促进肿瘤细胞凋亡。

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨不同剂量三氧化二砷(As2O3)对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制。方法体外培养人口腔鳞癌细胞株SCC-4,将处于对数生长期的SCC-4细胞接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为四组,每组6只,分别为对照组(A)、As2O3低剂量组(B组)、中剂量组(C组)和高剂量组(D组)。分别于肿瘤细胞接种第6、9、12、15、18、21天按上述剂量给予裸鼠腹腔注射As2O3,对照组注射生理盐水。停药1周后处死动物,完整取出瘤块,测量肿瘤重量和体积,计算肿瘤抑制率,免疫组织化学法检测各组标本中Ki67、cleaved caspase-3、CD31的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(MVD)并进行统计学分析。结果As2O3低、中、高剂量组均能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,中剂量组移植瘤体积抑制率最大为64.95%,低剂量组为32.99%,高剂量组为44.33%。免疫组化结果显示,用药后As2O3中剂量组Ki67的表达及MVD值明显低于对照组,凋亡蛋白cleaved capase-3的表达显著高于对照组(P<0.01),高剂量组凋亡蛋白cleaved capase-3的表达亦显著高于对照组(P<0.01),MVD值明显低于对照组(P<0.05),低剂量组Ki67、cleaved caspase-3、CD31的表达与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。用药前各组裸鼠体重无差异(P>0.05),用药后高剂量组裸鼠体重显著低于对照组和中、低剂量组(P<0.05)。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用,其可能的机制为抑制肿瘤细胞增殖及血管生成,诱导肿瘤细胞凋亡。As2O3对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用与剂量有关。

人乳腺癌裸鼠移植瘤内淋巴管的形态学特点

目的:观察人乳腺癌裸鼠移植瘤内淋巴管的形态及特点,进而探讨移植瘤内是否存在淋巴管新生。方法:将人乳腺浸润性导管癌组织小块移植于5只BALB/c裸鼠胸部乳垫皮下,建立移植瘤模型,52天时摘取肿瘤。采用HE染色观察移植瘤组织学特征,用VEGFR-3标记淋巴管内皮法光镜下观察毛细淋巴管;应用透射电镜观察移植瘤内毛细淋巴管及内皮细胞超微结构。结果:裸鼠接种部位可见直径约0.6～0.8cm大小的肿块。淋巴管内皮标记法可见肿瘤内有较多染成棕黄色的毛细淋巴管,壁厚、腔细、呈条索样的管状结构,肿瘤周边区似多于中心区。透射电镜下,肿瘤内可见较多形态不规则、壁厚腔细、基底膜常不连续、腔面较多微绒毛、管壁外锚丝甚少的毛细淋巴管,其内皮细胞高尔基复合体及粗面内质网丰富、质膜小泡含量甚少。结论:人乳腺癌裸鼠移植瘤内显示有淋巴管新生。

三氧化二砷联合放疗对口腔癌移植瘤小鼠治疗作用的研究

目的观察三氧化二砷(As2O3)和低剂量放疗联合应用对口腔鳞癌裸鼠移植瘤模型的治疗作用。方法将人口腔鳞癌细胞株Tca8113接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型;随机分为4组:对照(A)组、As2O3(B)组、放疗(C)组和As2O3放疗联合治疗(D)组,每组6只。自肿瘤接种后6d开始:B组和D组腹腔内注射As2O3;C组和D组接受放射治疗;A组腹腔注射生理盐水。停药一周后处死动物,测量瘤块体积,计算肿瘤生长抑制率,采用免疫组织化学法检测各组标本中增殖相关蛋白Ki-67、凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、血管内皮损伤标志物von Willebrand Factor(vWF)的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(microvessel density,MVD)并进行统计学分析。结果 C、D组的移植瘤体积显著低于A组(P<0.05),D组与B、C组相比亦有显著降低(P<0.05)。B、C、D组移植瘤生长抑制率分别为20%、57%、82%。免疫组化结果显示:D组中Ki-67在的表达及MVD值明显低于其他三组,Cleaved Caspase-3的表达显著高于其他三组,统计学均有显著性差异(P<0.01);与A组相比,B、C、D组Ki-67、Cleaved Caspase-3的表达以及MVD值均有显著性差异(P<0.001)。结论 As2O3能够提高放疗对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用,其抗肿瘤作用的可能机制为抑制肿瘤细胞增殖和血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡。

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇(TNP-470)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法:人肝癌转移模型(HCC)-LCI-D20原位移植瘤裸鼠32只,随机分4组(每组8只)给药:As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水(NS)对照组,给药21天后,对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度(MVD)、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果:As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组(P<0.05);计算两药相互作用系数(CDI)值:瘤重CDI(0.95)<1,体积CDI(0.89)<1,两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达;TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达,对移植瘤VEGF的表达无影响;联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达,抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义;各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组(P<0.05)。结论:As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生,能有效抑制移植瘤生长。

亚砷酸对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长及survivin、PTEN表达的影响

目的研究亚砷酸(As2O3)对人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤与survivin、PTEN的作用,探讨该药物的抗肿瘤机制。方法建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,随机分为Na Cl组、As2O3组和DDP组,观察裸鼠移植瘤生长情况;采用免疫组织化学方法检测survivin、PTEN的表达。结果 As2O3组和DDP组瘤体积和瘤重均明显低于Na Cl组,survivin蛋白的表达均低于Na Cl组,PTEN蛋白的表达均高于Na Cl组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论亚砷酸可抑制人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的生长,此作用可能与下调survivin、上调PTEN的表达相关。

As_2O_3对人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管新生的作用及其机制研究

目的:研究三氧化二砷(Arsenict rioxide,As2O3)对人乳腺浸润导管癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的作用及其可能机制。方法:建立人乳腺浸润导管癌裸鼠移植瘤模型,随机分成阴性对照组(NS)、阳性对照组(5-FU30mg/kg)、处理组1(As2O31.5mg/kg)和处理组2(As2O33.0mg/kg)。采用免疫组化法检测移植瘤组织中微淋巴管密度(Microlymphatics density,MLD)及VEGF-C,NF-κBp65和Her2的表达;半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测VEGF-CmRNA的表达。结果:两处理组癌组织中MLD低于阴性和阳性对照组(P<0.01),处理组2癌组织MLD低于处理组1(P<0.05)。对照组中VEGF-C表达高于两处理组(P<0.01),处理组1高于处理组2(P<0.05);VEGF-CmRNA的表达与其蛋白表达一致。各组中p65与Her2的表达与VEGF-CmRNA的表达呈正相关(r=0.782和r=0.848)。结论:As2O3对人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管新生具有抑制作用;通过抑制p65和Her2的表达,从而降低VEGF-CmRNA的转录水平是其可能的作用机制。

亚砷酸联合顺铂对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用及对DAPK的影响

目的:研究亚砷酸(As2O3)联合顺铂(DDP)对人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长抑制作用及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)的影响。方法:建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、As2O3组、DDP组和As2O3加DDP组,比较各组的抑瘤作用;并对标本分别进行光镜、原位末端标记(TUNEL)检测,采用实时荧光定量PCR法与免疫组织化学方法检测DAPK的表达。结果:As2O3和As2O3加DDP均能显著抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,并能上调DAPK的表达。结论:As2O3可抑制人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤的生长,该作用与诱导人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤细胞凋亡、上调DAPK的表达相关。As2O3与DDP联用可起协同作用。

三氧化二砷诱导人乳腺癌MDA—MB-435s细胞雌激素受体α重新表达及联合内分泌治疗裸鼠移植瘤的效果

目的研究三氧化二砷（As2O3）对雌激素受体α（ERα）阴性人乳腺癌细胞MDA-MB-435s的去甲基化作用及可能机制，观察As2O3联合他莫昔芬（TAM）对MDA—MB-435s细胞裸鼠移植瘤的疗效。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法，检测不同浓度As2O3单用或与TAM联用对MDA—MB-435s细胞的增殖抑制作用。以不同浓度As2O3处理MDA—MB-435s细胞，同时建立MDA—MB-435s细胞裸鼠移植瘤模型，以不同剂量的As2O3单用或与TAM联用治疗裸鼠移植瘤。采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP），检测不同处理组MDA—MB-435s细胞和裸鼠移植瘤组织中ERa基因的甲基化状态。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），检测DNA甲基转移酶1（DNMT1）和ERαmRNA的表达变化。采用Westernblot法，检测DNMTl和ERa蛋白的表达变化。治疗过程中，每周测量裸鼠移植瘤的大小，绘制肿瘤生长曲线。结果不同浓度As203单用或与TAM联合处理组MDA—MB-435s细胞的增殖均受到明显抑制，其中4μmol／LAs2O3＋TAM组处理72h时的抑制率最高，达62．6％。1、2和4μmol／LAs2O3对MDA—MB-435s细胞有去甲基化作用，并可使DNMTlmRNA和蛋白的表达受到抑制，ERamRNA和蛋白恢复表达。不同剂量的As2O3单用或与TAM联合处理后，裸鼠移植瘤组织中ERa基因出现不同程度的去甲基化条带，DNMTlmRNA和蛋白的表达受到抑制，而ERamRNA和蛋白则逐渐恢复表达。不同剂量的As2O3单用或与TAM联用均能明显抑制裸鼠移植瘤的生长，以4mg／kgAs2O3＋5mg／kgTAM组的抑制作用最强，肿瘤重量抑制率和肿瘤体积抑制率分别为79．5％和76．4％。结论As2O3可以通过抑制DNMTl的活性使ERa阴性人乳腺癌MDA—MB-435s细胞的ERa基因去甲基化，并恢复其表达；恢复的ERμ可以使MDA—MB-435s细胞对内分泌治疗敏感。As2O3与TAM联用可能成为治疗ERa阴性乳腺癌患者的新途径。

三氧化二砷对裸鼠人乳腺癌移植瘤的作用及机制

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对乳腺癌移植瘤的作用及其机制。方法建立BALB／C—nu／nu裸鼠ER阴性MDA—MB-435s人乳腺癌移植瘤模型，分别以不同浓度的As2O3、顺铂和生理盐水（NS）腹腔内注射，观察移植瘤的瘤重及抑瘤率。并用免疫组化检测乳腺癌石蜡标本中PTEN和Caspase-7的表达。结果As2O3高剂量组、As2O3低剂量组、顺铂组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长，抑瘤率分别为48．68％、32．80％、66．67％。用药后移植瘤组织中PTEN和Caspase-7蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）。结论As2O3能明显抑制乳腺癌移植瘤的生长，其作用机制可能是通过上调PTEN和Caspase-7的表达，促进细胞的凋亡来抑制人乳腺癌细胞的生长。