生存素基因在三氧化二砷诱导腺样囊性癌-2细胞凋亡中的作用

目的体外观察三氧化二砷(As2O3)诱导人类腺样囊性癌(ACC)-2细胞凋亡的作用,同时检测此过程中ACC-2内生存素(Survivin)表达水平的变化。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测As2O3不同处理条件下对ACC-2细胞生长的抑制效应,流式细胞术观察As2O3诱导的各组ACC-2细胞的凋亡率。使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Survivin mRNA的表达,蛋白印迹(Western blot)检测蛋白水平的表达差异。结果 As2O3作用下ACC-2细胞生长明显受抑制,其抑制率呈浓度和时间依赖关系,细胞凋亡率也呈相同的趋势。RT-PCR和Western blot检测显示,As2O3作用下ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达明显受抑制,抑制程度也具有时间和剂量依赖性。结论 As2O3可通过促进细胞凋亡使体外培养的ACC-2细胞生长受抑制,受抑制的ACC-2细胞内Survivin mRNA和蛋白表达下降。推测Survivin基因在As2O3诱导的ACC-2细胞凋亡中起重要作用。

△ψm和Caspase3在As_2O_3诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡过程中的作用

目的:探讨线粒体膜电位(△ψm)、Caspase 3在As2O3诱导ACC-2细胞凋亡中的作用。方法:进行ACC-2细胞培养,将As2O3建立不同药物浓度梯度(0,1.0,2.0,4.0,8.0μmol/L)分别作用于ACC-2细胞,用Rh123染色,流式细胞仪检测8.0μmol/L As2O3作用前、后(24h),ACC-2细胞的线粒体膜电位(△ψm)变化;用多功能酶标仪进行Caspase 3活性检测。结果:空白对照组ACC-2细胞内Rh123荧光强度最强,8.0μmol/L As2O3处理组ACC-2细胞内Rh123荧光强度减弱,其差异有显著性(P<0.05);随着As2O3药物浓度的增高(0,1,2,4,8μmol/L),ACC-2细胞的Caspase 3酶活力单位逐渐增加。结论:As2O3作用于ACC-2细胞,可通过降低线粒体膜电位从而引起细胞凋亡。随着As2O3药物浓度的增高,ACC-2细胞的Caspase 3酶活力单位逐渐增加,Caspase 3被激活,细胞可发生不可逆转的凋亡过程。

吴茱萸碱抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖的实验研究

目的:研究吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响。方法:用终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/ml的吴茱萸碱处理ACC-M 24、48、72 h后,应用MTT比色试验、倒置显微镜、Giemsa染色、Annexin-V-FITC和流式细胞仪检测和观察ACC-M的生长抑制率和凋亡情况。结果:吴茱萸碱(1μg/ml以上)对ACC-M细胞具有时间-浓度依赖性生长抑制作用,最大生长抑制率可达89%。吴茱萸碱可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异。吴茱萸碱同时可引起ACC-M细胞坏死。结论:吴茱萸碱可以诱导细胞凋亡和/或坏死,从而抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖。

姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响

目的体外研究姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响。方法用终浓度为2.5、5、10、15、20mg/L的姜黄素处理SACC-83。应用MTT比色试验,倒置显微镜,Giemsa染色,Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞后流式细胞仪和透射电镜检测和观察SACC-83的生长抑制率和细胞凋亡情况。结果姜黄素对SACC-83的生长抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性(P<0.01)。用药组细胞明显凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异(P<0.01)。结论姜黄素具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。

Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响。方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinⅤ/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析。结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/LGenistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P<0.01)。结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用。

莱菔硫烷对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)对涎腺腺样囊性ACC-M癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别用终浓度为5、10、20、30、40、60、80、100μmol/L的SFN处理ACC-M细胞24、48、72 h。用MTT比色试验和台盼蓝拒染实验检测细胞的增殖和存活情况;倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin-V-FITC和PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:SFN对ACC-M有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达89.2%,作用24、48、72 h时的IC50(μmol/L)分别是75.6、21.3、16.5,增殖抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性。SFN可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升(P<0.01)。结论:SFN具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。

眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶诱导NACC细胞凋亡作用的研究

目的:研究眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)诱导人类腭部小涎腺腺样囊性癌细胞系(NACC)细胞凋亡的作用。方法:采用倒置相差显微镜、H·E染色及透射电镜定性的方法,观察LAAO引起NACC细胞凋亡形态学改变,采用TUNEL半定量计算凋亡指数(AI)方法观察NACC细胞经不同浓度LAAO处理后引起细胞凋亡的情况。结果:倒置相差显微镜及H·E染色光镜观察、透射电镜观察可见典型细胞凋亡形态学改变,并可见凋亡小体形成。TUNEL半定量计算AI值,LAAO处理组与对照组比较差异有统计学意义(P<0·01),且AI值高低与LAAO浓度高低有关。结论:眼镜王蛇毒LAAO能诱导NACC细胞发生凋亡。

Genistein对涎腺腺样囊性癌细胞生长及Survivin表达的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC-83细胞不同时间后,用MTT法分析细胞的生长增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,用Western印迹分析及电泳凝胶成像分析软件定量检测Survivin的表达。结果Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;SACC-83细胞经220μmol/L Genistein作用3 d其生长明显受到抑制,并显著诱导细胞凋亡(P<0.01),同时伴有抗凋亡蛋白Survivin的表达下调。结论Genistein能明显抑制人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞生长并诱导凋亡;Survivin的表达减少可能是Genistein诱导凋亡的机制之一。

苦参碱对唾液腺ACC-M细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨中药提取物苦参碱(Matrine)对人唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞系ACC-M的凋亡诱导作用及其发生的机制。方法:体外培养ACC-M细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的ACC-M细胞进行干预。分别采用MTT、免疫细胞化学染色、间接免疫荧光联合流式细胞仪定量检测等方法,观察其对ACC-M细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;并对凋亡相关Bcl-2与Bax蛋白表达的变化进行定性与定量检测。计量资料采用x±s表示,采用SPSS10.0统计软件包对数据进行t检验。结果:经不同浓度的苦参碱处理后的ACC-M细胞,其生长受到明显的抑制,细胞凋亡指数随药物浓度增加而明显增加(从4.21%到27.47%);0.75mg/ml的苦参碱作用48h后,其Bcl-2表达明显下降。定量结果显示,平均荧光强度从570.6降至512.4;而Bax表达则明显上升,定量结果显示,平均荧光强度从197.5升至313.7,P<0.05,有显著性差异。结论:一定浓度的苦参碱能抑制ACC-M细胞的增殖,促进其凋亡;其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。

单次不同X线剂量照射对SACC-83细胞的放射生物学效应

目的 了解体外培养的SACC-83细胞对不同剂量X线照射的反应。方法 采用SACC-83细胞系,于体外分别给予 2Gy、5Gy、lOGy、15Gy、20Gy、25Gy和 30Gy的X线照射,进行集落细胞数、集落形成率、凋亡DNA电泳梯状图谱、流式细胞仪凋亡率的检测和细胞形态学观察。结果 对照组细胞倍增迅速,2Gy、5Gy、l0Gy细胞增殖缓慢, 15Gy以上的其余各组细胞未见增殖;集落形成率检测显示, 15Gy以上剂量照射各组均为 0. 2~15Gy照射能检测到凋亡带, 15Gy以上为明显的坏死带。15Gy已达体外SACC-83细胞的致死剂量。在形态学上 20~30Gy为坏死,在 10Gy^15Gy为凋亡与坏死的过渡区,在l0Gy剂量时表现为单纯的细胞凋亡, 2~5Gy表现为凋亡细胞与活细胞同时并存。经 2, 5Gy剂量照射细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2 /M期细胞的比例增多,经 10、15、2OGy剂量照射细胞主要表现为S期细胞和G2 /M期细胞的比例均减少。结论 通过SACC-83建立的射线细胞模型,提示在单次连续低剂量的放射线作用下表现为凋亡和活细胞共存,随着放射剂量的增加为凋亡,进而为凋亡和坏死并存,大剂量时,为细胞的坏死,这说明放射线对腺样囊性癌的作用为致细胞凋亡和直接细胞毒作用。照射剂量不同可能引起不同时相的细胞发生凋亡。

Genistein对腺样囊性癌细胞SACC-83中细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein诱导人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞凋亡的分子机制。方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用Western印迹技术检测bax、bcl-2和survivin蛋白的表达,并利用电泳凝胶成像分析软件,对其结果进行量化分析,采用SPSS11.5软件包对结果进行方差分析。结果:随着Genistein作用时间的延长和浓度的增加,bax蛋白的表达明显增加,bcl-2和survivin蛋白的表达明显减少。SACC-83细胞经220μmol/LGenistein作用3d,其bax蛋白的表达量是对照组的3.43倍(P<0.01),而bcl-2和survivin蛋白的表达量分别是对照组的85%(P<0.05)和35%(P<0.01)。结论:Genistein诱导SACC-83细胞凋亡,与其上调bax蛋白的表达,以及下调bcl-2和survivin蛋白的表达有关。

survivin反义寡核苷酸对人涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的影响

目的:探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人腺样囊性癌细胞(ACC-M)凋亡及survivin基因表达的影响。方法:设计合成针对survivin基因的反义寡核苷酸片段,脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染SACC-M细胞,通过RT-PCR,Western-blotting检测survivin表达的改变,MTT测定细胞增殖抑制,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:转染ASODN组survivin表达下降,细胞凋亡率明显提高,细胞增殖明显受抑制,且与浓度有一定依赖性;SODN组、空白组与对照组无明显差异。结论:survivin ASODN能下调SACC-M细胞系中survivin的表达,在促进凋亡,抑制增殖中发挥重要作用。

涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的动物实验

目的 检测不同剂量的重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF -α)对涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的体内诱导。方法 利用人涎腺腺样囊性癌细胞株 (SACC - 83)建立裸鼠移植瘤动物模型 ,局部肿瘤内直接注射rhTNF -α,选用两个不同剂量 (1 0 0× 1 0 4 IU/kg和 1 0× 1 0 4 IU/kg) ,观察对肿瘤的抑制作用 ,并采用流式细胞术定量检测体内细胞凋亡及细胞周期的变化情况。结果 ①A实验组的抑瘤率为 52 .1 6 % ,B实验组的抑瘤率为 73 .0 1 %。②用药后三组瘤体体积的变化有显著性差异。③三组流式细胞周期的变化及凋亡率有显著性差异。结论 ①rhTNF -α可抑制裸鼠SACC移植瘤生长 ,使细胞增殖在G1 期发生阻滞。这种抑制主要通过细胞凋亡来实现的。②本文低剂量的rhTNF -α诱导凋亡的效果优于高剂量的rhTNF -α 。

Survivin基因在三氧化二砷诱导腺样囊性癌-M细胞凋亡中的作用

目的:体外观察三氧化二砷(As2O3)诱导人类腺样囊性癌高转移株(ACC-M)细胞凋亡过程中的作用,同时检测此过程中ACC-M内凋亡抑制基因Survivin表达水平的变化。方法:MTT法检测不同浓度As2O3作用不同时间对ACC-M细胞的抑制效应;流式细胞术观察As2O3诱导各组ACC-M细胞的凋亡率。RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达变化;Western blot检测判定Survivin蛋白水平的表达差异。结果:As2O3可明显抑制ACC-M细胞的生长,其抑制率呈浓度和时间依赖关系,细胞凋亡率也呈相同的趋势。RT-PCR和Western blot检测显示As2O3作用下,ACC-M内Survivin mRNA和蛋白表达明显受抑制,抑制程度也具有时间和剂量依赖性。结论:As2O3可通过促进细胞凋亡的方式使体外培养的ACC-M细胞生长受抑制,而受抑制的ACC-M内Survivin mRNA和蛋白表达均下降,推测Survivin基因在As2O3诱导的ACC-M细胞凋过程中起着重要作用。

紫杉醇抗涎腺腺样囊性癌远处转移的实验研究

目的 观察紫杉醇对涎腺腺样囊性癌细胞远处转移的作用及其对转移灶肿瘤细胞凋亡的影响。方法 用ACC -M裸鼠肺转移模型观察紫杉醇体内抗转移效果 ,原位杂交法检测转移灶肿瘤细胞凋亡。结果 对照组与紫杉醇治疗组相比 ,二者之间转移率 (90 %和 4 0 % )及瘤结节数均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;对照组与治疗组凋亡指数分别为 6 .0 3± 3.36与 2 5 .4 7± 4 .78,二者对比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 紫杉醇对涎腺腺样囊性癌肺转移有较好的抑制效果 ,诱导凋亡可能是其抗ACC -M裸鼠肺转移的作用机制之一。

siRNA干扰Mcl-1对唾液腺腺样囊性癌SACC-2细胞生物活性的影响

目的:探讨siRNA干扰髓样细胞白血病-1分子(Mcl-1)对唾液腺腺样囊性癌细胞生物活性的影响。方法:构建Mcl-1-siRNA,转染入SACC-2细胞。应用real-time PCR法检测Mcl-1 mRNA表达水平及Western blotting检测Mcl-1蛋白表达水平。分别采用MTT法、Transwell小室法、流式细胞法观察Mcl-1对SACC-2细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。结果:与空白对照组、脂质体组和NC-siRNA组相比,Mcl-1-siRNA组SACC-2细胞的增殖速度明显减缓;转染48 h后,Mcl-1-siRNA组SACC-2细胞迁移数为(39±9.0)个,明显低于对照组(69±6.0)个;Mcl-1-siRNA组SACC-2细胞凋亡细胞百分率为8.6%(对照组为1.9%)。结论:沉默Mcl-1显著抑制唾液腺腺样囊性癌SACC-2细胞增殖和迁移能力,促进其凋亡。

LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响

目的:研究LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:用LY294002处理体外培养的SACC-83细胞,采用透射电镜技术进行细胞形态观察,MTT法计算细胞存活率,流式细胞术测定各细胞周期细胞分布比例和细胞凋亡情况。实验数据采用SAS8.2软件包进行单因素方差分析和两因素方差分析。结果:SACC-83细胞经LY294002(50μmol/L)处理96h,细胞存活率显著降低(P<0.01);LY294002(50μmol/L)处理SACC-83细胞72h,G0/G1期细胞逐渐增加,而S期和G2/M期细胞逐渐减少,凋亡的细胞逐渐增加(P<0.01)。结论:LY294002能显著抑制体外培养的SACC-83细胞增殖,使SACC-83细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导SACC-83细胞凋亡。

Bax促凋蛋白在抗DDP的人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的:探讨Bax促调蛋白与人涎腺腺样囊性癌细胞(SACC)化疗耐受的关系。方法:用浓度为1.0mg/L的顺铂作用于腺样囊性癌细胞,每次作用时间48h,经6个月后形成在该药物浓度下生长良好的耐顺铂细胞(SACC/DDP)。用AO荧光染色检测四种化疗药物甲氨喋呤(MTX)、平阳霉素(PYM)、长春新碱(VCR)、丝裂霉素(MMC)对两种细胞凋亡率的影响,用免疫组化SP法检测Bax促凋蛋白表达的变化。结果:经过6个月的诱导,形成了在顺铂作用环境下生长稳定的细胞株SACC/DDP,较之母本细胞SACC,对四种化疗药物均产生了不同程度的抗性,凋亡率明显下降,Bax促凋蛋白阳性表达率为20.7%(P<0.01),明显弱于母本细胞。结论:经顺铂周期性诱导,人涎腺腺样囊性癌细胞的凋亡率下降,Bax促凋蛋白表达降低。

三氧化二砷诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞的作用机制,寻找治疗SACC的新途径。方法应用As2O3对SACC细胞株作用,以MTT、软琼脂集落形成和形态学分析法观察细胞的变化。结果三氧化二砷作用后,癌细胞异形性逐渐消失,细胞凋亡现象明显,可见凋亡小体。结论As2O3对SACC细胞株具有显著的抑制增殖、诱导分化和促进凋亡作用。

埃克替尼通过p38-MAPK信号通路对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的凋亡诱导作用

目的:探讨埃克替尼对人涎腺腺样囊性癌细胞ACC-M凋亡的影响,阐明埃克替尼对涎腺腺样囊性癌的治疗作用机制。方法:ACC-M细胞随机分为对照组,2、4、8μmo1·L-1埃克替尼组,促分裂原活化蛋白激酶(APK)抑制剂SB203580(20μmol·L-1)组,SB203580(20μmol·L-1)+埃克替尼(4μmol·L-1)组。4h后收集细胞,采用MTT法检测各组ACC-M细胞的生长抑制率,用caspase-3活力检测试剂盒检测ACC-M细胞的凋亡情况(即caspase-3活力),采用Western blotting法检测p-p38-MAPK蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,埃克替尼组ACC-M细胞生长抑制率明显升高(P<0.05),caspase-3活力显著增强(P<0.05),p-p38-MAPK蛋白表达水平增加(P<0.05)。与4μmol·L-1埃克替尼组比较,SB203580+埃克替尼组p-p38-MAPK蛋白表达水平明显降低(P<0.05),caspase-3活力显著降低(P<0.05)。结论:埃克替尼可通过上调p-p38-MAPK信号的表达诱导ACC-M细胞凋亡。