复方黄黛片诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的研究

为探讨复方黄黛片治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL)的作用机制 ,观察了 2 1例经复方黄黛片治疗的APL患者 ,取不同治疗阶段的患者骨髓细胞 ,用流式细胞仪检测APL骨髓细胞分化抗原 (CD33和CD1 1b)、细胞周期 ,以及与细胞凋亡相关的Fas和Apo2 .7蛋白的表达。结果显示 ,服用复方黄黛片治疗后 ,患者骨髓的APL细胞CD33表达明显下降 ,CD1 1b表达升高 ,对细胞周期的影响主要表现为G2 /M期的阻滞 ,服药后Fas蛋白及Apo2 .7蛋白表达增加。提示复方黄黛片对APL细胞有凋亡和分化的双重作用 ,且细胞凋亡可能与Fas和Apo2 .

As_2O_3通过下调AnnexinⅡ抑制NB4细胞侵袭能力的研究

目的:旨在探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)通过下调钙依赖性磷脂结合蛋白AnnexinⅡ(AnxA2)抑制人急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞NB4侵袭力的作用。方法:体外培养NB4细胞,FCM检测不同浓度As2O3对NB4细胞膜表面AnxA2蛋白表达的影响;Transwell法检测As2O3和AnxA2抗体对NB4细胞侵袭力的影响。结果:As2O3在0.31、0.63和1.25μg/mL质量浓度条件下均能诱导NB4细胞膜表面AnxA2蛋白水平表达下降(P<0.05),呈剂量依赖性;AnxA2抗体质量浓度为0.01、0.02和0.04μg/mL以及AS2O3质量浓度为0.31、0.63和1.25μg/mL条件下均能使NB4细胞的侵袭力下降(P<0.05),并呈剂量依赖关系。结论:AnxA2抗体可抑制NB4细胞的侵袭力,As2O3可通过下调AnxA2蛋白在细胞膜表面的表达,从而抑制NB4细胞的侵袭能力。

三氧化二砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞株的双重效应研究

观察不同浓度的三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞的影响。方法不同浓度的三氧化二砷（０．１～２μｍｏｌ／Ｌ）与ＡＰＬ细胞株ＮＢ４细胞共同孵育一定时间后，观察ＮＢ４细胞的存活，细胞形态学，免疫表型（ＣＤ１１ｂ，ＣＤ３３），细胞ＤＮＡ含量分布及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在细胞内定位的改变。结果经１～２μｍｏｌ／Ｌ氧化砷处理的ＮＢ４细胞呈现凋亡的特征性改变。在细胞形态学上表现为胞膜完整，染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示与三氧化二砷作用浓度及时间相关的亚Ｇ１期细胞。经０．１～０．２５μｍｏｌ／Ｌ三氧化二砷处理１０天的ＮＢ４细胞呈现某些与分化相关的形态学改变和分化相关抗原（ＣＤ１１ｂ和ＣＤ３３）的调变，而０．１～２μｍｏｌ／Ｌ的三氧化二砷均能快速调变和减少ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白的表达。结论氧化砷对ＮＢ４细胞具有诱导凋亡和不完全分化双重作用，并能快速调变及降解ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白的表达。

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡的体外研究

目的：阐明氧化砷治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以原代ＡＰＬ细胞为模型，将不同浓度的氧化砷作用于ＡＰＬ细胞，并对其作用机制进行研究。结果：高浓度氧化砷选择性诱导ＡＰＬ细胞凋亡，低浓度氧化砷诱导新鲜ＡＰＬ细胞部分分化。进一步研究发现，不同浓度的氧化砷均能快速调变和降解ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白。结论：氧化砷对ＡＰＬ细胞存在双重效应，即诱导凋亡和部分分化。

氧化砷对白血病细胞内 PML/PML-RARα 蛋白的影响

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病细胞的分子标志ＰＭＬ－ＲＡＲα在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡中的可能作用。方法：观察Ａｓ２Ｏ３对ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在亚细胞定位的影响。结果：①在１μｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３作用下，ＨＬ－６０细胞核内ＰＭＬ抗血清染色明显减少，而在胞浆的近核膜区出现弥散分布的荧光染色；②Ａｓ２Ｏ３诱导ＮＢ４细胞内散在分布的ＰＭＬ抗血清染色颗粒明显减少；③通常情况下，少数ＮＢ４细胞的胞浆中存在ＰＭＬ抗血清染色颗粒的聚集，这类细胞在Ａｓ２Ｏ３作用后明显增多，凋亡细胞中ＰＭＬ抗血清染色聚集现象也存在；④全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）预处理２４或４８小时并不改变Ａｓ２Ｏ３对ＮＢ４细胞的凋亡诱导效应。结论：Ａｓ２Ｏ３诱导细胞凋亡的过程不依赖维甲酸信号途径，可能通过ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα及其它相关基因或蛋白的调控来实现。

三氧化二砷对转染表达两种早幼粒细胞性白血病融合蛋白的K562细胞的影响

目的 探讨急性早幼粒细胞性白血病的特异融合蛋白PML RARα和PLZF RARα在三氧化二砷 (As2 O3 )效应中的可能作用。方法 应用逆病毒载体转染技术建立稳定表达PML RARα(KPML)、PLZF RARα(ΚPLZF)和空载体 (KV)的K5 6 2细胞克隆。通过活细胞计数、形态学观察、流式细胞仪检测细胞DNA含量和分化抗原。应用免疫荧光分析PML RARα蛋白的亚细胞分布。结果 1 0μmol/LAs2 O3 不诱导KV 细胞凋亡和分化 ,但明显抑制其生长。在KPML和KPLZF细胞 ,As2 O3 也产生相似的生长抑制效应 ,但其效应强度明显增加。经 1 0 μmol/LAs2 O3 处理 3d时 ,KV、KPML和KPLZF的生长抑制率分别为 32 %± 3%、5 7%± 4%和 5 4%± 6 %。 1 0 μmol/L的全反式维甲酸也显示对KV 细胞克隆的生长抑制 ,但其效应明显低于As2 O3 。同时 ,全反式维甲酸的生长抑制效应在KPML的表现较KV 明显(P <0 .0 5 ) ,但在KV 和KPLZF之间差异无显著意义。此外 ,在 1 0 μmol/LAs2 O3 作用 2d时 ,KV 和KPML细胞内PML/PML RARα蛋白颗粒明显减少甚至消失。结论 PML RARα和PLZF RARα蛋白明显加强As2 O3 对K5 6 2细胞的生长抑制效应。