青蒿琥酯对日本血吸虫童虫超微结构影响的电镜观察

小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第7d开始，灌服青蒿琥酯300mg／kg·次，每wk1次，连续4次。在首次给药和第2次给药后的不同时间收集童虫作电镜观察。结果：首次给药后4h，扫描电镜见虫体表皮肿胀；8－12h后表皮褶嵴消失、糜烂；第1d即发现死亡虫体。以后几次给药，病变加重，虫体大部分死亡。透射电镜见皮层细胞肿胀、肌层坏死及溶解、肠腔上皮破坏和脱落。实验表明该药对日本血吸虫童虫有直接损害作用。

日本血吸虫童虫培养细胞SOD和MDA动态变化的研究

目的：观察日本血吸虫童虫细胞在体外培养过程中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和丙二醛（ＭＤＡ）含量的动态变化，探讨培养细胞的退化过程。方法：应用邻苯三酚自氧化法及硫代巴比妥酸法分别测定童虫细胞在培养０－５４ｄ过程中ＳＯＤ和ＭＤＡ含量的变化。结果：在培养第１２ｄＳＯＤ出现一个高峰，以后一直处于低平状态。ＭＤＡ在培养第１８ｄ和第４８ｄ分别各有一个高峰，其后均逐渐降低。结论：日本血吸虫童虫培养细胞呈逐步退化过程。

苏云金芽胞杆菌晶体毒素对体外培养的日本血吸虫童虫的作用

将感染日本血吸虫的钉螺常规逸蚴，经注射器推压机械断尾获得的童虫，加入内含１０％兔血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液后，置于单克隆培养板内，以苏云金芽胞杆菌（菌株ＹＢＴ－１９５５）制得的伴胞晶体毒素，以不同的浓度加入以上各孔中于３７℃，５％ＣＯ２培养箱内培养。培养１２ｈ后发现童虫活动力减弱，有些已经死亡；２４ｈ后，随着加入伴胞晶体毒素浓度的增加，童虫死亡率也相应增加，呈正相关（ｒ＝０．８９７）。经毒素蛋白含量为４０ｍｇ／Ｌ处理的童虫，２４ｈ后死亡率为１００％，ＬＤ５０为１５．９５μｇ（１ｍＬ）。

日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构观察

本文报道日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构。透射电镜下，日本血吸虫童虫的培养细胞可分为圆颗粒形、鞭毛形、三角扇形、多角形和不规则形等，其中以圆颗粒形为主；它们一般呈高核质比例，核多呈圆形或椭圆形，异染色质常聚集成块状；胞质中含有丰富的游离核糖体、散在的线粒体，还有内质网、糖原颗粒等；不同组织来源的培养细胞按其各自的特征，可划分为生殖细胞、焰细胞、神经细胞、肥大细胞、肌肉细胞。

蒿苯酯在大鼠的药物代谢动力学

大鼠ｉｇ蒿苯酯后吸收迅速，其药时曲线出现双峰现象。ＳＰＬＩ非房室模型统计矩计算结果表明，３剂量组平均驻留时间ＭＲＴ约在１２ｈ，半衰期Ｔ１／２约在８ｈ，基本一致。将前８ｈ第一峰血药浓度曲线用３Ｐ８７程序拟合，药代动力学模型为一室模型。大鼠ｉｇ蒿苯酯后２ｈ药物可广泛分布于各组织，６ｈ后各组织中药物浓度均很低。ｉｇ蒿苯酯后主要经尿排出，４８ｈ经粪尿累积排出７０．４％。蒿苯酯平均血浆蛋白结合率约为７０％。提取物形式的鉴别结果表明，大鼠ｉｇ蒿苯酯后血中以蒿苯酯原型药为主，尿中蒿苯酯及还原青蒿素均有，粪中则以还原青蒿素为主。

蒿苯酯预防日本血吸虫病的实验研究

本文报道了蒿苯酯预防动物血吸虫病的实验结果。小鼠、免及犬在单次感染日本血吸虫尾蚴后第7d开始服蒿苯酯,每wkl次,连服4-6次,对宿主体内的血吸虫童虫有明显杀灭效果,减虫率达90％—100％,该药对不同感染度小鼠体内血吸虫童虫的杀灭作用相同。对连续感染14d(每d1次)的家兔减虫率亦达93.5％,蒿苯酯皮下注射给药效果比口服好,但毒性大。比较蒿苯酯、呋喃丙胺和吡喹酮3种药物杀灭血吸虫童虫的效果,以蒿苯酯为最佳。同样,蒿苯酯优于其他两种青蒿衍生物一蒿甲醚和还原青蒿素。

东方田鼠血清组分对日本血吸虫童虫的体外杀伤力

目的探讨东方田鼠血清不同组分对日本血吸虫童虫的杀伤力,以期发现东方田鼠血清中参与其天然抗日本血吸虫的相关蛋白质。方法以离子交换柱层析及分子筛柱层析技术对东方田鼠血清蛋白质进行分离,将所得血清不同组分加入体外培养的2日龄日本血吸虫童虫中(100±20条/孔),计算童虫死亡率以判断血清不同组分对童虫的杀伤力。结果从东方田鼠血清分离出58个蛋白组分,其中6个组分具有明显的杀伤日本血吸虫童虫的活性,童虫死亡率均在37%以上,特别是组分18.1的童虫死亡率达87.5%,而阴性对照组童虫死亡率为25.0%(P<0.01)。结论东方田鼠血清中某些蛋白质参与其抗日本血吸虫的过程。

日本血吸虫童虫保护性单克隆抗体的建株和鉴定

本研究获8株抗日本血吸虫(中国大陆株)童虫的单克隆抗体,从中确定一株具有体内保护性功能的单克隆抗体(编号为N15D9),其保护率范围为14-39％。经间接免疫荧光法和ELISA试验检测,N15D9能与尾蚴、3h龄机械转化童虫和5d龄肺童虫的表膜抗原反应。经3h龄机械童虫可溶性抗原的免疫印迹法分析,N15D9能识别132、96和10kDa抗原分子。

东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫童虫cDNA文库及新基因分析

目的获得日本血吸虫病新的候选疫苗分子。方法用对日本血吸虫具有天然抗性的东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫肝期童虫cDNA文库，阳性克隆转入E．coliBM25．8环化成质粒，抽提质粒DNA，EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定，插入片段进行核苷酸序列测序，并进行生物信息学分析。结果共获得12个不同的基因，插入片段长度为300～1100bp，其中2个具有完整的开放阅读框，为日本血吸虫新基因，命名为sj—sMf1和sj—sMf2，分别编码93个和61个氨基酸。前者含有cAMP磷酸化位点和酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点各1个，后者含有1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和2个蛋白激酶c磷酸化位点。结论用东方田鼠血清作为探针筛选到2个日本血吸虫新基因。

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴和童虫免疫小鼠的抵抗力研究

本文报告用２５条、５０条、１５０条和３００条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴钻皮免疫或减毒童虫皮下注射免疫均能诱导小鼠产生有效的抗攻击感染抵抗力。以２５条免疫量为例，尾蚴钻皮及童虫皮下注射后的减成虫率分别为７２．１％和７０．４％，肝脏减卵率分别为６９．４％和５７．４％，小肠组织减卵率分别为７６．６％和８０．５％，免疫后的有效保护期为７．５个月。

日本血吸虫童虫培养细胞超微结构动态变化的研究

随着培养时间的延长，日本血吸虫童虫培养细胞的超微结构发生一系列渐进性变化，主要表现在：核中异染色质含量逐渐增加，由０ｄ时的显著少于常染质转变为５４ｄ时的高于常染色质；线粒体逐渐变性，嵴由清晰变为模糊以至消失，基质电子密度降低，最终成为空泡；内质网由环状变为短管状、囊泡状，最后消失。日本血吸虫童虫培养细胞中线粒体和内质网超微结构的这些变化，可以用来判断培养条件的优劣；而从染色质的一系列变化推断，０～１８ｄ是诱导培养细胞发生增殖的最佳时期。

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的皮肤组织细胞反应

目的 :探讨紫外线减毒血吸虫尾蚴免疫宿主的皮肤组织在抗攻击感染中的作用。方法 :88只小鼠分为 4组 ,1、2组分别以 50± 3条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫或日本血吸虫尾蚴感染 ,5wk后以 10 0 0± 10 0条尾蚴进行攻击感染 ;3、4组分别以减毒尾蚴或尾蚴 10 0 0± 10 0条免疫或初次感染。各组均于感染或接种后 6- 12 0 h定时取局部皮肤组织作病理观察。结果 :( 1)免疫攻击组皮肤组织内炎症细胞杀伤童虫现象最明显、炎症反应最强且持续时间最长 ,嗜酸性粒细胞( EOS)浸润百分数最高 ;( 2 )感染攻击组呈现相似炎症反应但程度略轻 ;( 3)免疫对照组减毒童虫在皮肤内滞留时间延长 ,至 12 0 h皮下仍可见较多童虫 ;( 4 )感染对照组皮肤内的童虫数于 72 h后明显减少 ,童虫周围轻微炎症反应。电镜观察可见免疫攻击组童虫内部结构破坏 ,虫体周围 EOS、淋巴细胞增多 ,肥大细胞颗粒溶解。结论 :提示皮肤组织的细胞免疫反应在血吸虫减毒尾蚴免疫的宿主抗攻击感染保护性免疫中起重要作用。

日本血吸虫肺期童虫收集方法的实验研究

目的建立一种收集纯净肺期童虫的方法。方法用日本血吸虫尾蚴感染昆明小鼠,分别于感染后第1、2、3、4、5、6、7、10、12、14、21天解剖,从皮肤、肺脏、肠系膜静脉及肝门静脉处收集童虫。结果肺期童虫出现的高峰期为感染后第3天,获得最佳收获肺期童虫的时间,建立了回收大量纯净童虫的方法。

环孢素A体外抗AF18标记的曼氏血吸虫童虫的作用

目的探讨环孢素A抗曼氏血吸虫童虫的作用机制。方法制备童虫,环孢素A体外作用,AF18标记,荧光显微镜观察;定量童虫荧光素的分布以及测定光漂洗后童虫荧光素的复原率。结果童虫损伤或死亡,虫体逐渐从绿色变成黄色,虫体表面损伤;随着环孢素A剂量加大,童虫荧光素定量增加;童虫光漂洗后荧光素的复原率大幅度降低。结论环孢素A增加童虫AF18的含量,降低童虫荧光素的复原率,减低童虫表膜流动性;提示,表膜是药物作用的靶标。

小鼠感染日本血吸虫后iNOS的表达及NO介导的杀虫作用研究

目的研究小鼠在感染日本血吸虫后肺部诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的动态表达及一氧化氮(NO)对童虫的杀伤作用。方法在感染日本血吸虫后不同时间点剖杀小鼠并取其肺组织,用半定量RTPCR的方法检测肺部iNOS的转录水平;用NOS的抑制剂AG(Aminoguanidine,氨基胍)处理感染小鼠,比较处理组与对照组虫荷的高低以确定NO对童虫的杀伤作用。结果未感染小鼠肺部无iNOS转录表达,感染后第4d肺部iNOS有较高水平的转录表达,第9d表达消失;AG处理小鼠的虫荷较未处理组高(P<0.05)。结论移行到肺部的童虫能诱导肺组织表达iNOS,由iNOS产生的NO能对童虫发挥杀灭作用。

日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原组分及其保护性免疫力研究

目的 探讨日本血吸虫门脉内童虫表膜抗原(SjHmAg)的免疫特性,观察其抗日本血吸虫(Sj)的保护效果。方法 用SDS-PAGE电泳技术分析SjHmAg蛋白组分,酶联免疫电转移印迹(EITB)分析感染兔血清(IRS)和正常兔血清(NRS)对SjHmAg的识别;用完整SjHmAg免疫昆明鼠3次,分别在0、2、4周进行,第6周每鼠经腹部感染40±1条Sj尾蚴,42天后剖杀,计数虫数及肝卵数。结果 用SDS-PAGE电泳获得SjHmAg主带7条,IRS主要能识别SjHmAg23、33和63kDa等10个抗原组分;间接ELISA测其抗体滴度>1:6400,与对照组相比,SjHmAg免疫小鼠的减虫率为16.2％,减卵率为55.4％。结论 用SDS-PAGE获得了不同分子量的SjHmAg蛋白,EITB鉴别出具有免疫活性的蛋白分子,且SjHmAg对Sj攻击感染及雌虫生植似有一定的抗性。

小鼠中性粒细胞在抗体及补体参与下对日本血吸虫童虫杀伤作用的体外实验

用光镜及电镜观察小鼠中性粒细胞及中性粒细胞依赖抗体及补体对体外培养的日本血吸虫童虫 的作用。结果表明：单纯中性粒细胞很少粘附到童虫表面，仅个别十分疏松地粘附在童虫表面，被粘附 的童虫结构正常。提示：单纯中性粒细胞对童虫无明显作用，在抗体及补体协同下，中性粒细胞成群且 紧密地粘附在童虫体表，在细胞集聚的周围，虫体体被出现隧道样及火山口样变化，紧贴童虫的中性 粒细胞伸出伪足，虫体体棘紊乱，皮层变平，体被剥脱，虫体变形，说明中性粒细胞在抗体及补体协同 下，对童虫有杀伤作用、文中对杀伤机制进行了扼要的讨论。

血吸虫感染新模型兔血清对童虫的体外杀伤实验

目的 在已建立的一种血吸虫感染伴随免疫新模型的基础上 ,观察该模型兔血清对童虫的体外杀伤作用 ,探讨该血清抗体在抗日本血吸虫感染保护性免疫中的作用。 方法 用倒置显微镜观察并比较不同稀释度的日本血吸虫感染伴随免疫新模型兔血清 (A血清 )与日本血吸虫感染常规模型兔血清 (B血清 )对体外培养童虫的杀伤作用 ,并经甲基蓝染色后计算童虫死亡率。 结果 对体外童虫的杀伤作用 ,新模型兔血清随浓度的降低而逐渐减弱 ,血清浓度越低 ,童虫死亡率亦越低。但常规模型兔血清随浓度的降低则呈现先上升后下降的趋势 ,以 1/ 10左右稀释度时最高。比较A、B两种血清对童虫的杀伤作用 ,前者强于后者 ,1/ 2血清稀释度培养 48h观察到的童虫死亡率分别为 (4 1.2 3±1.0 8) %和 (2 7.2 7± 2 .86) % (P <0 .0 5 ) ;先加入后者 4h后再加入前者能部分抑制前者的杀童虫作用 ,童虫死亡率为(3 7.63± 2 .3 3 ) % ,介于两者之间。常规模型血清组部分童虫体表出现膜状或泡状物质包绕 ,但童虫却未受到明显杀伤。结论 日本血吸虫感染伴随免疫新模型兔血清在体外对童虫的杀伤作用强于常规模型兔血清 ,推测前者可能以杀伤抗体占优势 ;而后者可能以封闭抗体占优势。

日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位的初步筛选研究

目的:利用噬菌体随机12肽库技术筛选日本血吸虫感染早期诊断抗原。方法:用日本血吸虫感染后21d兔血清从噬菌体12肽库中经3轮筛选,有效地富集与早期感染兔血清有亲和力的噬菌体克隆。随机挑取11个单克隆分别纯化、扩增,随后采用ELISA、DOT-ELISA等检测方法,挑选出与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆。结果:挑选出3个与感染后21d兔血清具有高亲和力的噬菌体单克隆。结论:用感染后21d兔血清从噬菌体随机12肽库中能筛选到日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位。

日本血吸虫童虫在东方田鼠和昆明小鼠中的蛋白差异初探

东方田鼠具有天然抗日本血吸虫活性,为了筛选抗日本血吸虫疫苗分子,通过日本血吸虫尾蚴感染东方田鼠和昆明小鼠,感染11天后收集东方田鼠和昆明小鼠肝童虫.肝童虫经组织匀浆收集蛋白质并进行蛋白质定量后SDS-PAGE分离,切取差异蛋白条带进行蛋白质鉴定.发现差异蛋白主要为日本血吸虫结构蛋白,能量代谢相关蛋白以及热休克蛋白等.为进一步研究抗日本血吸虫疫苗奠定了基础.