青蒿琥酯在脓毒症相关脏器损伤中的保护作用及其机制研究进展

脓毒症是重症监护病房患者死亡的主要原因,其发病机制及病程复杂,严重脓毒症可导致多器官功能障碍综合征,目前暂无有效治疗方法。青蒿琥酯(AS)是青蒿素的衍生物之一,除抗疟疾作用之外还具有抗炎作用,它通过抑制炎症因子释放及调节免疫反应在脓毒症的治疗中发挥明显作用。AS通过调控不同信号通路对脓毒症诱导的急性肺损伤和肝损伤发挥保护作用,对于脓毒症易受累的靶器官如心脏、肾脏、神经系统也具有一定保护作用。本研究总结AS在脓毒症以及脓毒症相关脏器损伤中保护作用的最新研究进展,以期为探索脓毒症相关脏器损伤提供新的研究思路及治疗策略。

青蒿素及其衍生物抗急性髓系白血病作用的研究进展

青蒿素及其衍生物是一类具有多种生物活性的天然药物,目前已发现其不仅具有显著的抗疟疾作用,还具有强大的抗急性髓系白血病(AML)作用。青蒿素及其衍生物通过促进活性氧(ROS)的生成、诱导细胞自噬、下调抗凋亡蛋白髓系白血病1(MCL-1)和B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、激活同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)途径等多种方式发挥抗AML作用。AML是一种血液系统恶性肿瘤,具有高缓解率、易复发、预后差的特点。目前AML临床一线治疗方案已经数十年没有改变,急需找到一种新的治疗方案改善预后。本文就近些年青蒿素及其衍生物抗AML作用的研究进展做出综述,以期能为AML新的治疗方案提供思路和方向。

青蒿琥酯防止急性血吸虫病的实验研究

本文报道了家兔服用青蒿琥酯药物可防止急性血吸虫病发生的试验结果。家兔于感染后第7d开始服用青蒿琥酯16mg／kg，每wk服1次，连服4次。服药兔于感染后40d检查均未出现急性血吸虫病的症状体征。而对照兔则出现典型的发热、食欲差、体重增加缓慢、嗜酸性粒细胞增多、血沉加快、血清白球蛋白比例倒置、肝脾肿大等症状体征。血清免疫学检查也发现对照兔的特异性IgG和CAg全部阳性，而服药组IgG大部分阴性，个别兔为弱阳性，CAg则全部阴性。这是由于青蒿琥酯有效地杀灭血吸虫童虫，阻止或减少虫卵产生，使宿主免受抗原抗体复合物的作用，从而防止急性血吸虫病的发生。

青蒿琥酯对人淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞抑制作用及机理的研究

目的观察青蒿琥酯(ART)对白血病/淋巴瘤细胞株Raji、Jurkat和急性淋巴细胞白血病(ALL)原代细胞的增殖抑制作用,以及ART与长春新碱(VCR)、阿糖胞苷(Ara-C)的细胞毒协同效应,并探讨其作用机制。方法MTT法观察ART对Raji、Jurkat、ALL原代细胞的增殖抑制效应及ART与VCR、Ara-C的协同效应。Wright-Giemsa染色光镜下及透射电镜观察细胞凋亡的形态变化,Rhodamine-123检测线粒体跨膜电位(MMP)变化,比色法检测细胞内caspase-3浓度变化。结果ART在体外能显著抑制Raji、Jurket细胞的增殖,对ALL原代细胞亦具有增殖抑制作用。低浓度ART与VCR、Ara-C联合,能增加VCR、Ara-C的细胞毒作用。ART作用后B/T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞光镜及电镜均表现出凋亡形态学改变,线粒体跨膜电位下降,细胞内caspase-3的表达增加,呈浓度依赖性。与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论ART对淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞具有抑制作用,且与VCR、Ara-C联用具有协同效应,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。ART有望开发成治疗ALL/淋巴瘤的新药。

青蒿琥酯上调HO-1对老龄脓毒症小鼠急性肝损伤的作用

目的探讨青蒿琥酯能否上调血红素氧合酶-1(HO-1)起到对老龄脓毒症小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型,72只雄性昆明小白鼠按随机数字表法分为四组:假手术组(sham组)、脓毒症组(CLP组)、青蒿琥酯干预组(ART组)、HO-1抑制剂组(Zn PP组),各组按术后6 h、12 h、24 h分为3个亚组。分别于上述时间点处死小鼠,分时项检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6)水平变化,采用Western印迹法及免疫组化法检测24 h亚组肝组织HO-1表达水平,光学显微镜观察各组小鼠24 h亚组肝组织病理变化情况。结果与sham组相比,CLP组小鼠血清ALT、AST水平升高(P<0.05);血清TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);肝组织中HO-1水平表达升高(P<0.05);肝组织病理损伤明显。与CLP组相比,ART组血清ALT、AST水平显著下降(P<0.05);血清TNF-α、IL-6水平下降(P<0.05);肝组织HO-1水平表达明显升高(P<0.05);肝组织病理损伤程度减轻。Zn PP组与ART组相比,血清ALT、AST水平升高(P<0.05);血清TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);肝组织中HO-1表达水平下降(P<0.05);肝脏病理损伤明显。结论青蒿琥酯可以通过上调HO-1减轻老龄脓毒症小鼠急性肝损伤。

青蒿酯联合阿糖胞苷±柔红霉素对MLL基因重排白血病细胞株MV4-11凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨青蒿酯(ARTS)联合柔红霉素(DNR)±阿糖胞苷(Ara-C)对MLL基因重排(MLL-r)急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:采用CCK-8法检测ARTS、DNR、Ara-C单药及联用对MV4-11细胞增殖率及计算单药的IC50;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况及凋亡受体DR4、DR5的表达;Western blot检测各组细胞中Caspase-3、Caspase-9的表达。结果:ARTS、Ara-C、DNR均呈浓度依赖性抑制MV4-1l细胞增殖(r=0.99,r=0.90,r=0.97),48 h的IC50分别为0.31μg/ml、1.43μmol/L、22.47 nmol/L。ARTS 0.3μg/ml、Ara-C 1.0μmol/L、DNR 15 nmol/L作用于MV4-11细胞48 h的增殖率比较:3药联合组<2药联合组<单药组(均P<0.05);2药联合组细胞增殖率比较:ARTS+Ara-C组<ARTS+DNR组<Ara-C+DNR组,3药及2药相互作用的协同指数(CI)均<l。2药及3药联合处理细胞后,ARTS+DNR+Ara-C组细胞凋亡率高于Ara-C+DNR组、ARTS+DNR组(P<0.05),ARTS+DNR+Ara-C组细胞凋亡率与ARTS+Ara-C组相当(P>0.05),各组细胞中DR4和DR5的表达无差异(P>0.05)。与DNR+Ara-C组相比,ARTS+DNR+Ara-C组、ARTS+Ara-C组24 h Caspase-3表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05),其中3药联合组细胞中Caspase-3表达下调最显著,但各组细胞中Caspase-9表达无明显改变。结论:体外研究显示ARTS+DNR+Ara-C、ARTS+Ara-C方案协同抑制MV4-11细胞增殖和诱导MV4-11细胞凋亡作用均强于传统方案Ara-C+DNR,其作用机制可能是通过下调Caspase-3表达发挥作用,对Caspase-9、DR4、DR5的表达无影响。

青蒿琥酯对脂多糖致血管内皮细胞活化及损伤的保护作用

目的观察中药青蒿提取物青蒿琥酯 (artesunate ,AR)对脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)活化及损伤状态下的保护作用及相关机制。方法建立人脐静脉内皮细胞培养 ,细胞生长至融合状态后分别加入LPS及不同浓度的AR(0 0 4mg/L、0 2mg/L、1mg/L、5mg/L及 2 0mg/L)共同孵育 2 4h。ELISA方法检测培养上清中血管假性血友病因子 (vonWillebrandfactor ,vWF)含量 ,Westernblot法检测细胞间黏附分子 (ICAM 1)蛋白表达 ,原位杂交方法检测肿瘤坏死因子 (TNFα)mRNA表达。结果暴露于 1μg/mlLPS后 ,HUVECs的vWF及ICAM 1表达较对照组明显增加 ,加入AR后 ,随AR浓度增加明显下调LPS升高的vWF及ICAM 1表达 ,至AR为1mg/L时 ,其vWF与ICAM 1表达与LPS组比较差异均有显著性 (P <0 0 5 )。AR抑制LPS升高的vWF及ICAM 1表达呈一定的浓度依赖方式。原位杂交显示在AR 0 2mg/L及 1mg/L时明显下调TNFαmR NA表达 ,与LPS组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论青蒿琥酯对脂多糖诱导的HUVECs的活化及损伤有保护作用 ,可能与AR抑制TNFαmRNA表达有关。

青蒿琥酯通过Keap1/Nrf2通路抑制氧化应激改善犬急性肾损伤的体内外分析

本研究旨在观察青蒿琥酯对庆大霉素诱导犬急性肾损伤的抗氧化调节作用及其机制。将20只犬随机等分成4组:对照组(Control)、庆大霉素模型组(GM)、青蒿琥酯治疗组(GM+ART)、青蒿琥酯+ML385干预组(GM+ART+ML385)。除对照组,其他组犬采用注射GM建立AKI模型。成功造模后,GM+ART组给与青蒿琥酯,ART+ML385组给与ART和ML385,对照组和GM组给予生理盐水,试验期12 d。用不同浓度GM与MDCK细胞共培养,确定最佳浓度为4.0 mmol·L^(-1),用相同方法确定ART最佳浓度为50.0μmol·L^(-1)。将体外培养MDCK细胞、过表达Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)的MDCK细胞(M-K)和敲减核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的MDCK细胞(M-SiNrf2)分别分成3组:健康对照组、GM对照组和GM+ART干预组,共培养24 h后用于检测。结果显示:1)在动物试验中,GM+ART组肌酐(Cr)、尿素氮(UN)及肾损伤因子1(KIM-1)水平显著低于GM组,GM+ART+ML385组Cr、UN及KIM-1水平显著高于GM+ART组。2)在动物试验中,与GM组比较,GM+ART组Nrf2和谷胱甘肽半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)蛋白表达上调,Keap1蛋白表达下调,肾组织匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平升高,丙二醛(MDA)水平降低。与GM+ART组比较,给与ML385后Nrf2和GCLC蛋白表达下调,T-SOD和GSH水平降低。3)在细胞试验中,与4.0 mmol·L^(-1) GM共培养的MDCK细胞比较,加入50.0μmol·L^(-1)ART能显著提高细胞增殖率,降低ROS水平,下调Keap1表达,上调Nrf2、血红素氧合酶1(HO1)及GCLC表达。4)在细胞试验中,与MDCK细胞比较,在GM+ART相同处理下,M-K细胞和M-SiNrf2细胞Keap1蛋白表达上调,Nrf2、HO1及GCLC蛋白表达下调,细胞增殖率降低,ROS含量升高(P<0.05或P<0.01)。综上所述,青蒿琥酯对庆大霉素诱导犬急性肾损伤具有保护作用,其作用机制与青蒿琥酯通过Keap1/Nrf2信号通路抑制氧化应激反应有关。

小鼠口服青蒿琥酯纳米乳的急性毒性研究

[目的]研究3种不同配方青蒿琥酯（Artesunate,AS）纳米乳的急性毒性,筛选出安全性最好的配方。[方法]采用小鼠灌胃给药,观察14 d内小鼠的活动情况及死亡情况,记录小鼠的死亡数。用改良寇氏法测定各配方AS纳米乳的半数致死量（LD50）及可信限。[结果]AS1、AS2纳米乳的LD50分别为7.76和7.56 g/kg;可信限为6.90～8.68和6.42～8.87。AS3纳米乳的LD0为15 g/kg。[结论]在国内首次成功制备的3种不同配方AS纳米乳,均属于实际无毒范围,AS3纳米乳较之AS1、AS2更安全。

青蒿琥酯对小鼠实验性肝损伤的保护作用

研究抗疟新药青蒿琥酯(Art)对扑热息痛(AAP)和CCl_4引起的小鼠急性肝损伤的保护作用。实验结果证实,预先给小鼠ip Art200mg/kg,或100mg/kg共3次,其血清GPT和肝脏病变均明显低于对照组;并能降低AAP中毒小鼠的死亡率,对抗AAP所致小鼠早期肝糖元下降。此外,Art尚能显著缩短小鼠戊巴比妥钠睡眠时间,提示它可能具有诱导肝脏药物代谢酶作用。

青蒿琥酯对人急性白血病原代细胞线粒体膜电位的影响

【目的】观察青蒿琥酯作用于人急性白血病原代细胞后线粒体膜电位的变化。【方法】选取急性白血病患者的骨髓进行原代细胞培养,将终浓度为50、25、12.5μg/mL的青蒿琥酯分别作用于细胞,经线粒体膜电位荧光探针JC-1染色并固定后,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞形态的变化,并计算红、绿荧光细胞数。【结果】不同浓度青蒿琥酯作用于人急性白血病原代细胞后,均可升高绿荧光细胞数,与空白对照组比较差异有显著性意义(P<0.05),并可不同程度降低红荧光细胞数(P>0.05),且呈一定的剂量依赖关系。【结论】青蒿琥酯抗急性白血病原代细胞的作用机制与降低其线粒体膜电位,进而使其胞内环境改变而使肿瘤细胞凋亡有关。

青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株MV4-11增殖凋亡的调控作用

【目的】探讨青蒿琥酯抗急性髓系白血病(AML)的作用。【方法】取对数生长期AML细胞株MV4-11,用不同浓度青蒿琥酯分别处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖抑制率,选择青蒿琥酯处理48 h对MV4-11细胞的半数抑制浓度(IC50)进行后续实验。将细胞随机分为对照组、青蒿琥酯组、复合物C组与青蒿琥酯+复合物C组,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况,定量聚合酶链反应(q PCR)法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路相关蛋白的表达水平。【结果】青蒿琥酯可以抑制MV4-11细胞增殖,呈时间、剂量依赖性,处理48、72 h对MV4-11细胞的IC50分别为1.58、1.39μg/mL。与对照组比较,青蒿琥酯组细胞存活率降低,凋亡率升高,G0/G1期细胞增加,S期、G2/M期细胞减少,Bax mRNA相对表达量升高,Bcl-2 m RNA相对表达量降低,p-AMPK、Bax蛋白表达水平上调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平下调(均P<0.05);与对照组比较,复合物C组细胞存活率升高,凋亡率降低,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,Bax mRNA相对表达量降低,Bcl-2 mRNA相对表达量升高,p-AMPK、Bax蛋白表达水平下调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平上调(均P<0.05);与对照组比较,青蒿琥酯+复合物C组p-AMPK蛋白表达水平上调,p-mTOR蛋白表达水平下调(均P<0.05)。与青蒿琥酯组比较,复合物C组与青蒿琥酯+复合物C组细胞存活率升高,凋亡率降低,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,Bax m RNA相对表达量降低,Bcl-2 mRNA相对表达量升高,p-AMPK、Bax蛋白表达水平下调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平上调(均P<0.05)。与复合物C组比较,青蒿琥酯+复合物C组细胞存活率降低,凋亡率升高,G0/G1期细胞增加,S期、G2/M期细胞减少,Bax mRNA相对表达量升高,Bcl-2 mRNA相对表达量降低,p-AMPK、Bax蛋白表达水平上调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平下调(均P<0.05)。【结论】青蒿琥酯对MV4-11细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。

青蒿琥酯对雨蛙素联合脂多糖致急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用

目的:明确青蒿琥酯对急性胰腺炎模型小鼠的治疗作用。方法:昆明种小鼠60只,雌雄各半,随机分为正常组、模型组和治疗组,治疗组又分为3个浓度治疗组,即共5组,每组12只。造模方法为:使用雨蛙素(100μg/kg)连续6次腹腔注射小鼠,每次间隔1h;最后一次注射雨蛙素后,腹腔注射脂多糖(10mg/kg)。治疗组在造模后0h和4h肌肉注射不同浓度的青蒿琥酯,于第一次给药后18h,眼眶取血,测定血清淀粉酶;脱臼处死小鼠,取胰腺组织,进行胰腺组织学观察及组织病理学评分;测定组织脂肪酶、胰蛋白酶以及超氧化物歧化酶的含量。结果:与模型组相比,青蒿琥酯治疗组的胰腺组织病变情况明显减弱,胰腺系数、血清淀粉酶、组织脂肪酶和胰蛋白酶的活力都明显降低(P<0.05或P<0.01),组织超氧化物歧化酶的活力明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:青蒿琥酯对急性胰腺炎模型小鼠具有明显的治疗作用,值得继续深入研究。

青蒿虎酯对人急性髓系白血病原代细胞及其细胞株K562增殖和凋亡的影响研究

背景目前急性髓系白血病(AML)长期治疗仍面临着高复发率、治疗相关死亡风险及化疗相关毒副作用等多重挑战。而青蒿素作为我国学者首次从菊科植物黄花蒿中提取出的化合物(青蒿琥酯为其类衍生物),其近年来在白血病、肿瘤疾病治疗中的作用逐渐引起广泛关注。目的探究青蒿虎酯对人AML原代细胞、细胞株K562增殖和凋亡的影响。方法采用密度梯度法分离2016年10月-2018年10月于河南省儿童医院血液科就诊的符合纳入标准的24例初治或复发AML患儿的骨髓液中的AML原代细胞。并购买AML细胞株K562进行研究。将AML原代细胞及细胞株K562均分为对照组和实验组(依次为对照组1和实验组1,对照组2和实验组2),其中对照组1及对照组2不予青蒿琥酯干预,实验组1和实验组2分别添加终浓度为12.5、25.0、50.0μg/ml的青蒿琥酯液(分别记为终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组1及终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组2)。采用细胞计数法观察AML原代细胞、细胞株K562存活情况;采用MTT法检测其生长抑制情况;采用流式细胞术检测其凋亡情况。结果终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞存活率低于对照组1(P<0.05);终浓度25.0、50.0μg/ml实验亚组1干预72 h AML原代细胞存活率低于终浓度12.5μg/ml实验亚组1(P<0.05)。终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML细胞株K562存活率低于对照组2(P<0.05);终浓度25.0、50.0μg/ml实验亚组2干预72 h AML细胞株K562存活率低于终浓度12.5μg/ml实验亚组2(P<0.05)。终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组1干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组1(P<0.05);终浓度25.0、50.0μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5μg/ml实验亚组1(P<0.05)。终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组2干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组2(P<0.05);终浓度25.0、50.0μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5μg/ml实验亚组2(P<0.05)。终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组1(P<0.05);终浓度25.0、50.0μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5μg/ml实验亚组1(P<0.05)。终浓度12.5、25.0、50.0μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组2(P<0.05);终浓度25.0、50.0μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5μg/ml实验亚组2(P<0.05)。结论青蒿琥酯能够有效抑制AML原代细胞及细胞株K562的增殖并诱导其凋亡,可为青蒿素治疗AML提供实验依据。

青蒿琥酯诱导人原代白血病细胞凋亡及其相关基因表达谱的初步研究

目的探索青蒿琥酯治疗人类急性白血病的作用及其分子机理。方法收集人类急性白血病患者骨髓细胞,进行原代培养;MTT法检测青蒿琥酯对急性白血病原代细胞增殖的影响;基因芯片观察青蒿琥酯作用前后相关基因表达变化。结果浓度为50,25,12.5μg/mL的青蒿琥酯分别作用于急性白血病原代细胞,48 h后抑制率依次为56.25%、41.49%、30.08%;72 h后抑制率依次为59.8%、45.07%、33.57%,呈剂量、时间依赖关系;青蒿琥酯对AL原代细胞的半数抑制率浓度(IC50)为18.3μg/mL;经青蒿琥酯作用后,AML-M3和ALL-L2原代细胞基因表达谱分别呈现变化趋势,并与药物剂量呈梯度比例关系。结论青蒿琥酯抗AL原代细胞的作用包括多方面,诱导细胞凋亡是其主要作用,可能的机制包括通过Bcl-2途径、线粒体途径、Tnf/TnfR1及Fas/FasL信号转导途径、Jak/Stat通路等诱导AL细胞凋亡;同时青蒿琥酯还有抑制AL原代细胞的增殖及诱导AL原代细胞向成熟分化的作用。

青蒿琥酯对重型急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的保护作用

目的探讨青蒿琥酯对大鼠重型胰腺炎时胰腺细胞凋亡的保护作用。方法逆行胆管微量泵入5%牛磺酸钠制备大鼠急性重型胰腺炎模型,鼠尾静脉采血应用酶联免疫吸附(ELASE)方法检测血清淀粉酶,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6)及髓过氧化物酶(MPO),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)的变化情况;用Western-bolt蛋白印迹分析方法检测大鼠胰腺组织内凋亡相关因子半胱天冬酶-3(Caspase-3)和半胱天冬酶-9(caspase-9)的表达水平;对大鼠胰腺病理切片伊红(HE)染色观察大鼠胰腺组织坏死,出血,炎症,水肿等情况,并进行病理学组织学分析,原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠胰腺细胞凋亡情况及凋亡指数,根据各组大鼠存活率绘制生存曲线并进行比较。结果大鼠血清淀粉酶在重型胰腺炎组大鼠(Severe acute pancreatitis,SAP)与假手术组比较明显增高(P<0.05),青蒿琥酯干预处理后血清淀粉酶水平较SAP组大鼠有明显下降趋势(P<0.05);对各组实验大鼠血清中炎症因子TNF-α, IL-6, MPO, MDA检测发现经青蒿琥酯干预处理后较SAP组明显下降(P<0.05)而SOD水平升高(P<0.05);通过对胰腺组织中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平进行检测发现青蒿琥酯干预处理后较SAP组其表达水平下降(P<0.05);大鼠胰腺病理学切片HE染色后观察发现青蒿琥酯干预后与SAP组比较胰腺坏死水肿等情况有所缓解,病理学评分下降(P<0.05);应用TUNEL法检测胰腺细胞凋亡情况显示青蒿琥酯干预后胰腺细胞凋亡减少(P<0.05),生存曲线分析发现青蒿琥酯干预后大鼠存活率增加(P<0.05)。结论青蒿琥酯可延缓急性重型胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡,增加大鼠生存率,有重要临床应用价值。

青蒿琥酯对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用研究

目的探讨青蒿琥酯在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中的保护作用及其机制。方法建立对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、联苯双酯组和青蒿琥酯低、中、高剂量组。通过检测肝脏血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)、肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,检测肝细胞的凋亡率、观察肝脏病理学改变,评价青蒿琥酯在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中的保护作用。结果与对照组比较,模型组ALT、GOT、MDA水平显著升高,GSH和SOD水平显著下降(P <0.05),炎症因子TNF-α、IL-6水平和肝细胞凋亡率显著升高(P <0.05),说明造模成功。与模型组比较,青蒿琥酯组ALT、GOT及MDA水平显著下降,GSH和SOD水平显著上升(P <0.05);炎症因子TNF-α、IL-6水平和肝细胞凋亡率显著下降(P <0.05),并有效减轻肝细胞的坏死程度。结论青蒿琥酯在对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中具有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用、减少炎症反应及抑制细胞凋亡有关。

青蒿琥酯对鸡胚和雏鸡的毒性作用研究

采用9日龄鸡胚尿囊腔注射不同浓度的青蒿琥酯注射液和3日龄雏鸡经口一次给药的方法,以体重数据变化、肝体比、肝脏镜下组织病理学观察为评判指标,观察青蒿琥酯的急性毒性。结果表明:青蒿琥酯的LD50为2.17 mg/kg,可信限为2.01～2.38 mg/kg。雏鸡毒性试验表明,40 mg/kg剂量对雏鸡有明显的生长抑制作用,20 mg/kg剂量及10 mg/kg剂量对雏鸡生长抑制较40 mg/kg剂量轻,溶剂对雏鸡生长无毒副作用。40 mg/kg剂量组肝脏病变严重,20 mg/kg剂量组及10 mg/kg剂量组病变较轻,溶剂组无任何病变。

青蒿琥酯脂质体粉雾剂的制备及其治疗大鼠急性肺损伤的作用

青蒿琥酯是青蒿素衍生物,具有抗炎和抗疟疾作用,但其难溶于水,口服吸收差。急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种严重的弥漫性肺部疾病,具有进程快和死亡率高的特点。本文用薄膜分散法制备了青蒿琥酯脂质体,冻干后得到粉雾剂(dry powder inhalers,DPI),经肺吸入后用于治疗ALI。青蒿琥酯脂质体的包封率为71.4%,粒径为47.3 nm,zeta电位为-13.7 mV。粉雾剂的空气动力学粒径为4.2μm,体外肺部沉积率为34.5%。将脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)经气管喷入大鼠肺中成功建立ALI大鼠模型。大鼠很快出现自主活动明显减少、精神萎靡、呼吸加快和腹泻等症状。1 h后,将青蒿琥酯脂质体粉雾剂(liposomal artesunate dry powder inhalers,LADPIs)经气管直接喷入ALI大鼠肺内。LADPIs治疗组与模型组比较,症状减轻。DPI组的炎症因子TNF-α和IL-6水平低于青蒿琥酯原料药组和阳性药地塞米松组(P<0.05),表明青蒿琥酯治疗ALI的主要机制为抗炎作用,并且脂质体粉雾剂剂型可增加药物肺内利用,提高疗效。LADPIs有望成为治疗ALI的有效制剂。

青蒿琥酯上调血红素氧合酶-1对脓毒症小鼠急性肺损伤的作用研究

目的 探讨青蒿琥酯（artesunate,AS）能否上调血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）对脓毒症小鼠急性肺损伤（ALI）起到保护作用.方法 本实验于哈尔滨医科大学附属第一医院外科中心实验室完成.60只雄性昆明小白鼠,随机（随机数字法）分为假手术组（Sham组,n=15）、模型组（CLP组,n=15）、青蒿琥酯干预组（AS＋CLP组,n=15）和HO-1抑制剂组（AS＋ ZnPP＋CLP组,n=15）.采用改良盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型,青蒿琥酯干预组,造模前2h经腹腔注射青蒿琥酯（15 mg/kg）,HO-1抑制剂ZnPP（40μmol/kg）则在给予青蒿琥酯1h后经腹腔注射,其余各组小鼠给予等体积生理盐水.于术后24h处死小鼠,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清炎症介质（TNF-α、IL-6）变化情况.通过测定肺脏湿/干（W/D）质量比检测肺水肿情况,采用HE染色观察肺组织病理损伤情况.采用蛋白印迹以及免疫组化法检测肺组织HO-1的表达情况,并且通过蛋白印迹法检测HO-1的上游调节转录因子核因子E2相关因子2（Nrf-2）的表达情况.组间多重比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q（Student-Newman-Keuls）法,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与Sham组比较,CLP组血清炎症介质TNF-α （pg/mL）（54.37±15.59 vs.627.45±117.03,P＜0.05）、IL-6 （pg/mL） （81.53±26.89vs.898.52±222.78,P＜0.05）释放增加,蛋白渗出明显,肺水肿（肺脏W/D比值：4.27±0.22vs.6.78±0.73,P＜0.05）和肺脏病理损伤（肺损伤评分：2.20±0.2 vs.13.25±2.67,P＜0.05）均加重.肺组织中HO-1、Nrf-2蛋白表达含量增加（P＜0.05）.给予AS干预后,与CLP组比较,血清炎症介质TNF-α（pg/mL）（627.45±117.03 vs.307.88±72.33,P＜0.05）、IL-6 （pg/mL）（898.52±222.78 vs.413.47±115.14,P＜0.05）释放减少,蛋白渗出减少,肺水肿减轻（肺脏W/D比值：6.78±0.73vs.5.05±0.61,P＜0.05）,肺脏病理损伤减轻（肺损伤评分：13.25±2.67vs.4.95±1.46,P＜0.05）.肺组织HO-1、Nrf-2蛋白表达含量明显增加（P＜0.05）,而AS对于脓毒症小鼠肺组织的上述保护作用被HO-1抑制剂ZnPP所逆转,HO-1抑制剂组肺脏损伤情况与CLP组相当（肺损伤评分：12.15±2.95vs.13.25±2.67,P＞0.05;肺W/D比值：6.78±0.73 vs.6.29±0.82,P＞0.05）.结论 AS对脓毒症诱发的ALI小鼠具有保护作用,其作用通路可能与上调HO-1减轻肺组织炎症反应,继而减轻肺损伤有关.