Establishment of Experimental Model of Hepatic Schistosoma Japonicum Egg Granulomas in Mice

An experimental model of hepatic Schistosoma japonicum egg granuloma was established in C57BL/6 mice sensitized with soluble egg antigen(SEA) by direct injection of vital egg suspension into the spleen. The mice infected with cercariae of Schistosoma japonicum in abdominal skin were used for comparative studies. The results showed that morbidity of hepatic Schistosoma japonicum egg granulomas in the group sensitized with SEA was 100% and that the morphology, cellular constituents, developing process and the diameter and size of the egg granulomas in the group sensitized with SEA were similar to those of the group infected with cercariae. The authors suggest that this experimental model is a useful and appropriate tool for the study on egg granulomas of Schistosoma japonicum.

蒿甲醚预防血吸虫感染的实验研究

为了观察蒿甲醚预防血吸虫感染的作用，小鼠、兔和犬于感染血吸虫尾蚴后不同时间灌服（ｉｇ）蒿甲醚（Ａｒｔ），并根据总减虫率和减雌虫率评价预防效果。结果，小鼠于感染后ｄ７开始ｉｇ１剂Ａｒｔ，然后每ｗｋ重复给药１次，共４次的效果最好。兔与犬于感染后ｄ７ｉｇＡｒｔ１０或１５ｍｇ／ｋｇ，然后每１－２ｗｋ重复给药１次，共２－４次，总减虫率和减雌虫率为９６．８％－１００％，部份或全部受治动物无雌虫，一些与急性血吸虫病有关的指标，如体温、嗜酸性粒细胞数和粪便虫卵等均无异常或阴性。兔每隔天感染血吸虫尾蚴４８－５２条，共５次，并于第１次感染后ｄ７开始，用Ａｒｔ１５ｍｇ／ｋｇ，按上述给药方案预防，总减虫率和减雌虫率为９７．６％－９８．４％。上述感染犬和多次感染的兔用Ａｒｔ预防后，肝组织结构正常，虫卵肉芽肿数亦明显减少。结果认为，Ａｒｔ具有预防血吸虫感染的作用，可明显减低血吸虫感染率、减轻感染度和防止急性血吸虫病。

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子(ICOS)转基因小鼠的免疫应答及其病理反应

目的观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。方法收集ICOS转基因小鼠及对照组野生型小鼠分别感染30条日本血吸虫尾蚴后4～8周的血清及脾淋巴细胞培养上清,用ELISA双抗体夹心法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平和培养上清中的Th1细胞因子γ干扰素(IFN-γ),Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)水平。取小鼠感染后6、8周肝脏,常规石蜡连续切片,HE染色,在光镜观察单个虫卵肉芽肿病变。结果转基因小鼠IFN-γ的表达水平无显著变化,而6、8周时转基因小鼠的IL-4水平呈显著上调表达,分别为(20.8±1.6)pg/ml和(25.3±3.4)pg/ml(P<0.01)。转基因小鼠血清IgG、IgG1表达水平也均高于对照组。在转基因小鼠,反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数和IgG1/IgG2a比值也明显呈Th2优势应答,分别为2.20±0.68和5.59±0.31。感染6、8周转基因小鼠肝虫卵肉芽肿反应比对照组更为显著。转基因小鼠肝虫卵肉芽肿体积显著大于同期对照组的肉芽肿,增大率分别为24.48%和26.37%(P<0.01)。结论ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后表现出Th2优势应答的免疫学特征,表明ICOS在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。

青蒿琥酯早期预防性治疗日本血吸虫病家兔的肝脏病理变化

兔于感染日本血吸虫尾蚴后第7d,开始喂青蒿琥酯,每wkl次,剂量分别为20mg/kg·次×4次(1组)和40mg/kg·次×6次(2组).于感染后12wk剖检:1组6只兔中有3只未检获虫体,此3只兔的肝脏肉眼直观和在切片中未见虫卵和虫卵性肉芽肿形成;另3只兔分别检获1—2对虫体,肝切片偶见少量虫卵和虫卵肉芽肿.2组6只兔中,仅1只检获3条(?)虫,未检获雌虫,故此6只兔的肝切片未见虫卵和虫卵肉芽肿.结果表明,兔于感染血吸虫尾蚴后,用青蒿琥酯作早期预防性治疗,可使宿主肝脏免受虫卵损害或轻微损害.

细胞信号转导抑制剂介导Th1/Th2免疫偏移对血吸虫虫卵肉芽肿的影响

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)和磷酯酰肌醇-3-激酶(P13-K)特异性抑制剂(分别为tyrphostin-25、D-sphingosine和wortmannin)对日本血吸虫感染小鼠虫卵肉芽肿病变的影响,并探讨其作用机制。 方法 于小鼠感染日本血吸虫后第35天起,经尾静脉分别注射3种信号转导分子抑制剂,连续5 d。在小鼠感染后6和8wk,观察小鼠肝肉芽肿病变,并用ELISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠血清IFN-γ、IL-4和一氧化氮(NO)水平。结果 感染小鼠应用TPK和PKC抑制剂后均可显著抑制肝肉芽肿病变,PKC抑制剂可使肉芽肿减少率达56.2％～63.4％(P<0.01)。PKC抑制剂主要抑制Th2细胞因子IL-4的表达,其抑制率为34.1％和65.6％(P<0.01),而对NO水平的检测结果进一步证明了PKC抑制剂对IL-4表达的抑制作用。 结论 在日本血吸虫感染早期应用PKC抑制剂干预T淋巴细胞信号转导可显著抑制小鼠肝肉芽肿病变,其机制可能是由于抑制了Th2优势应答并介导Th2向Th1免疫反应偏移。

感染亚洲不同地域品系日本血吸虫小鼠的肝虫卵肉芽肿大小

目的 :了解亚洲不同地域品系日本血吸虫对宿主的致病性。方法 :应用相同宿主 C57BL小鼠在同等条件下感染亚洲 7地域品系日本血吸虫后 ,观察和比较其肝虫卵肉芽肿体积大小。结果 :虽然不同地域品系日本血吸虫对小鼠肝组织所致的虫卵肉芽肿体积大小有异 ,但以亲动物的中国台湾品系所致的单个卵的增生期虫卵肉芽肿平均体积为最小。它与亲人体的中国云南、中国广西、中国四川、中国皖鄂、日本、菲律宾 6地品系所致的增生期虫卵肉芽肿平均体积具有显著性的差别。结论 :中国台湾品系日本血吸虫尾蚴感染宿主后 ,寄生虫与宿主的相互关系可能具有某些独特性 ,或存在免疫应答程度上的差异。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿免疫调节作用的研究

目的研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对虫卵肉芽肿的影响。方法 ＮＰ３０腹腔注射主动免疫ＩＣＲ小鼠，对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水，分别在尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４周处死，观察和比较肝内虫卵肉芽肿的形成和演变。应用计算机图像分析技术，测量虫卵肉芽肿大小。结果尾蚴攻击感染第 １２周以后， ＮＰ３０免疫组虫卵肉芽肿的直径明显低于 ＳＰ２／０对照组，虫卵肉芽肿的演变时相提前，并出现２种特殊类型的肉芽肿。结论ＮＰ３０能减轻日本血吸虫对宿主造成的免疫病理损害。

抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用

目的 研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法 实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果 尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论 NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 。

血吸虫感染鼠血清SEAIC水平与肝脏病变关系的动态观察

采用分离纯化的兔抗ＳＥＡ－ＩｇＧ以生物素－亲和素放大系统，用ＣａｐｔｕｒｅＥＬＩＳＡ方法检测感染血吸虫鼠血清中抗ＳＥＡ循环免疫复合物（ＳＥＡＩＣ）水平在感染后各周的动态变化；并在观察肝脏病变的同时，采用图像分析技术，动态测定各周肝内虫卵肉芽肿的直径和面积。结果表明，血清ＳＥＡＩＣ在感染后４ｗｋ即可检出，６－７ｗｋ时达高峰，以后有所下降，但至实验观察结束时（１２ｗｋ）仍维持在较高水平。感染后４ｗｋ，肝组织内发现虫卵，但到５ｗｋ时尚未形成虫卵肉芽肿病变，至６ｗｋ时，肝内形成巨大的虫卵结节，其直径和面积于７ｗｋ时达高峰，此后逐渐下降，其动态变化与血清ＳＥＡＩＣ水平的动态变化相吻合，表明血清ＳＥＡＩＣ水平的高低可以作为反映肝脏病变程度的指标，并提示ＳＥＡＩＣ在日本血吸虫病的免疫发病机理中可能起重要作用。

ICOSL敲基因小鼠日本血吸虫病模型的免疫应答及其免疫病理(英文)

目的观察ICOSL敲基因(ICOSL knockout,ICOSL-KO)小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。方法建立ICOSL-KO小鼠及野生型C57BL/6J小鼠日本血吸虫病模型,收集感染前(0周)和感染后(4～20周)的小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72小时后,采用ELISA双抗夹心法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(IL-4、IL-10、IL-13)细胞因子表达水平。应用ELISA法检测同期血清中SEA特异性抗体IgG、及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变。结果ICOSL-KO小鼠Th1细胞因子IFN-γ、IL-12表达明显高于野生型小鼠,而其Th2型细胞因子(IL-4、IL-10、IL-13)表达水平却显著低于野生型小鼠。ICOSL-KO小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著低于野生型C57BL/6J小鼠的水平,其Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦低于野生型小鼠的水平,特别是在感染7、12、16周后具有显著性差异。且ICOSL-KO小鼠的肝脏虫卵肉芽肿病变显著小于野生型小鼠。结论感染日本血吸虫的ICOSL-KO小鼠Th2免疫应答显著下调并导致肝虫卵肉芽肿病变减弱,表明ICOS–ICOSL信号通路在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。

SjR12和SjR47组分抗原对日本血吸虫感染小鼠肝内虫卵肉芽肿形成的影响

本项研究将从日本血吸虫感染家兔红细胞上分离、纯化的12kDa和47kDa蛋白分子，分别称为SjR12（虫源性）和SjR47（卵源性）组分抗原，加福氏完全佐剂免疫小鼠，攻击感染后35d、39d和42d时，各组分三批在相同条件下剖杀小鼠的观察结果：获得31．27～31．33％的减虫率和54．95～72．36％的减卵率；SjR12和SjR47组分抗原均能显著地抑制感染小鼠肝内虫卵肉芽肿形成，特别是SjR47组分抗原具有更显著的免疫抑制作用。本项研究尚未见有类似报道，具有理论意义和应用前景。

N-乙酰半胱氨酸对早期日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的影响

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对早期日本血吸虫病小鼠肝脏虫卵肉芽肿的影响。方法将36只健康小鼠随机分为NAC组、正常对照组、感染对照组。NAC组和感染对照组小鼠每只经腹部皮肤感染25±2条日本血吸虫尾蚴,于感染当天起给NAC组小鼠200 mg/kg NAC灌胃,2次／d,共42 d;正常对照组和感染对照组每只小鼠2 ml蒸馏水灌胃,2次／d,共42 d。感染第42天,各组小鼠全部处死后取血清和肝脏。对肝脏进行病理学观察,测定血清及肝组织的生化指标。结果NAC组小鼠的肝组织“+、++、+++”3级单个虫卵肉芽肿个数分别为1．80±0.25、1．37±0．23、0．53±0．15,均显著低于感染对照组(P<0．05)。NAC组小鼠血清中NO水平、GSH水平分别为0．53±0．17、229．66±9．47．相对感染对照组均有所下降(P<0．05),谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX活性为1101．99±140．81,相对感染对照组有所升高(P<0．05);肝组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、NO水平、还原型符胱甘肽(GSH)水平及GSH-PX活性分别为6．85±0．30、13．44±0．40、358．40±19．15、110．84±10．93,均显著低于感染对照组(P<0．05)。结论N-乙酰半胱氨酸可以减缓日本血吸虫病小鼠肝组织病理变化。

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导免疫对虫卵肉芽肿影响的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原和成虫冷浸抗原分别免疫昆明系小鼠，发现未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）能诱导小鼠产生明显抗卵成熟能力。所得虫卵肉芽肿面积（HE染色，LSAB法）和只用佐剂的对照组存在显著性差异（P＜0．01），面积显著减小，而对照组和成虫冷浸抗原之间无显著性差异（P＞0．05）。

吡喹酮对感染血吸虫小鼠血清羟脯氨酸及肝脏虫卵肉芽肿作用的探讨

本研究主要观察吡喹酮(PZQ)对血清游离羟脯氨酸(F-Hyp)水平和肝脏虫卵肉芽肿(HEG)的作用.结果显示PZQ在减轻HEG及纤维化反应的同时,还可降低F-Myp的水平,表明F-Hyp水平能够反映肝脏胶原代谢的情况,可作为血吸虫性肝纤维化(SHF)诊断和疗效判断的一个指标.

青蒿琥酯对日本血吸虫生殖作用的影响

目的观察青蒿琥酯对日本血吸虫成虫生殖的影响。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第20d灌服青蒿琥酯300mg/kg,给药后3周解剖小鼠,用灌注法收集成虫,计算减虫率;取肝右叶做石蜡切片,观察虫卵肉芽肿;剩余肝脏溶解后计数虫卵;收集无损虫体进行体外培养,观察虫卵形态,并计数产卵量;取完好的虫体做石蜡切片,HE染色后镜下观察生殖器官的发育。结果给药组小鼠体内雌虫产卵量与对照组存在显著的差异,体外培养结果与体内产卵结果相一致。给药组小鼠体内的雌虫的卵巢发育缓慢,比对照组的小,且卵巢内多为未成熟的卵细胞。结论青蒿琥酯能抑制雌虫卵巢的发育,降低或抑制雌虫的产卵量,具有抗日本血吸虫雌虫生殖的作用,能有效的减轻血吸虫病的病情和控制传播。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿形成的致敏作用

应用日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０腹腔注射致敏Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，继之经脾脏注射虫卵形成的肝虫卵肉芽肿模型。用ＳＥＡ致敏组作阳性对照，ＳＰ２／０腹水组作阴性对照。实验结果表明，在虫卵攻击后第４ｄ，ＮＰ３０致敏组肝虫卵肉芽肿面积、体积即开始明显增加，出现多量嗜酸性粒细胞浸润。肉芽肿面积在第８ｄ、体积在第１５ｄ达高峰值，与ＳＥＡ致敏组的高峰值相近（Ｐ＞０．０５）。而ＳＰ２／０腹水组肉芽肿的面积、体积至第３２ｄ才达高峰值，其高峰值低于ＮＰ３０致敏组（面积Ｐ＜０．０５，体积Ｐ＜０．０１）。本文提示ＮＰ３０对肝虫卵肉芽肿的形成具有致敏作用。

日本血吸虫虫卵肉芽肿与肝纤维化免疫病理及调节研究初步报告

为探讨血吸虫病肝纤维化的免疫学发病机理，对感染血吸虫的新西兰兔进行了动态观察。在感染后4、6、8、10、12、16、20、24、28wk，分别取肝组织活植，用定量RT－PCR法检测肝组织的细胞因子mRNA水平，并作形态学与免疫组化检查。结果认为肝脏内多种细胞因子mRNA水平与虫卵内芽肿变化呈平行关系，感染4wk后即有上升，以TGF-β_1上升最明显，在感染后第8wK达到峰值，随之下降，从12wk至16wk下降最明显。TGF-β_1和IFN－γmRNA水平的比值随肝纤维化进展而变大，可能具有较大的实用价值。本研究提示日本血吸虫虫卵肉芽肿与肝纤维化不仅具有不同的细胞学基础，而且其免疫调节作用也不同。

ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫对CD28/CD86表达及Th1/Th2极化的影响

目的探讨上调可诱导共刺激分子(ICOS)信号对感染日本血吸虫小鼠CD28/CD86的表达及Th1/Th2极化的影响。方法建立ICOS转基因(ICOS-Tg)小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型,应用流式细胞术分析感染前(0周)和感染后(4～20周)小鼠的脾CD4+T淋巴细胞上CD28与脾CD19+B淋巴细胞上CD86的表达水平。应用免疫组化法检测同期小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞上CD28、CD86表达水平变化。取同期小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72 h后,采用ELISA法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(IL-4、IL-13)细胞因子表达水平。采集同期小鼠的血清,应用ELISA法检测血清中SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化。结果ICOS-Tg小鼠脾CD4+T细胞上CD28和脾CD19+B细胞上CD86的水平与同期野生型FVB/NJ小鼠相比明显升高,且分别在感染4周后(50.57±7.54 vs 40.38±5.43,P<0.05)及在感染12周后(76.46±10.55 vs 65.10±10.17,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿的CD28、CD86表达亦高于野生型FVB/NJ小鼠的水平,且分别在感染7周后(0.485±0.094 vs 0.357±0.078,P<0.05)及感染12周后(0.649±0.072 vs 0.537±0.064,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13)水平从感染7周后比野生型FVB/NJ小鼠显著升高(皆P<0.05);ICOS-Tg小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著高于野生型FVB/NJ小鼠的水平(P<0.05、0.01、0.001不等);ICOS-Tg小鼠Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦高于野生型小鼠,分别在感染7、12、16、20周后(P<0.05、0.001)及12、16周后(皆P<0.05)具有显著性差异。在整个病程中,ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型FVB/NJ小鼠。结论感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠CD28、CD86表达及其Th2免疫应答显著上调,并伴随肝虫卵肉芽肿病变增强,表明ICOS信号对CD28-CD86信号通路具有一定的调控作用,且在介导Th2极化及肝虫卵肉芽肿的发生、发展中发挥重要作用。

非游离循环抗原组分对血吸虫感染宿主虫卵肉芽肿保护性免疫调节机制的研究

首次采用特殊方法从感染兔红细胞上分离、纯化两种血吸虫组分抗原SjR47和SjR12，实验结果证明，前者属卵源性抗原，后者为虫源性抗原．两次实验结果均表明，两种组分抗原能诱导出明显的抗病免疫力，实验1获得54．95％－72．36％的肝内减卵率，实验2获得52．57％－57.27％的肝内减卵率和50.73％－74．70％的成熟卵减少率，并均可使肝内肉芽肿病变明显减小，尤以SjR47效果显著．两种抗原诱导的抗肝内肉芽肿保护性免疫调节机制的研究结果表明，两者均能诱导小鼠产生高水平的IgG，测定IgG及其亚类动态显示，在感染后0－12wk时，免疫小鼠血清IgG和IgG_1水平均显著高于佐剂和感染对照组者（P＜0.01），特别是能反映保护性免疫力指标的IgG_1升高非常明显：SjR47免疫鼠的脾T淋巴细胞亚群表型动态研究显示，SjR47免疫鼠的CD4~＋和CD8~＋T细胞在感染4wk时均升高，随后下降．CD4~＋／CD8~＋比值也随时间延长而下降，呈现免疫下调，其变化趋势同肉芽肿病变减小相一致；SjR47免疫鼠的细胞因子水平动态观察结果表明，SjR47免疫鼠后可使TNF－α在小鼠体内的活性水平较平显著上升（成虫期前），减弱了TNF－α对虫卵肉芽肿形成的介导作用以及对雌虫排卵的促进作用，导致肝内肉芽肿病变减小和虫卵减少。本研究结果表明。

活化剂HYP协同rSjc26GST的抗血吸虫性肉芽肿的效果及其机制的研究

目的探讨活化剂HYP协同rSjc26GST的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果及机制。方法采用活化剂HYP联用rSjc26GST、福氏佐剂(FCA)联用rSjc26GST、单用HYP和单用福氏佐剂分别免疫BALB/c小鼠,末次免疫后1周,免疫和对照组小鼠均用日本血吸虫尾蚴攻击感染,7周后测定其免疫效应,观察其抗血吸虫卵肉芽肿病变的效果。结果活化剂HYP联用rSjc26GST组的总虫卵数和成熟虫卵数减少率分别为55.37%和54.31%,均显著高于FCA联用rSjc26GST组的30.3096和38.07%;该两组肝内虫卵肉芽肿的直径及面积分别下降36.86%和35.25%及62.59%和60.44%;两组IgG和IgG1水平均明显升高。结论活化剂HYP协同rSjc26GST比FCA具有更好的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果,其机制与体液免疫(IgG和IgG1)的增强密切相关。