苯并芘通过芳香烃受体对心肌缺血再灌注损伤作用的研究

目的:探究空气污染物苯并[a]芘[benzo(a)pyrene,BaP]对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,IR)的影响,并进一步探索芳香烃受体(aromatic hydrocarbon receptor,Ahr)在这一过程中的关键作用。方法:本研究首先对C57BL/6J小鼠进行Bap气道给药(15mg/kg),随后构建心肌缺血再灌注损伤模型。我们通过Evans Blue/TTC染色,TUNEL染色,超声心动图和Masson染色对实验组和对照组小鼠的心肌损伤程度进行评估,并通过RT-PCR及免疫荧光共定位探究Ahr介导的潜在作用机制。结果:与对照组相比,实验组小鼠表现出更为严重的心肌损伤。RTPCR结果表明,BaP暴露后,Ahr下游靶基因及炎症相关基因mRNA表达水平明显升高。免疫荧光染色结果显示,Ahr在心脏巨噬细胞上呈现出明显的表达。结论:空气污染物BaP可通过激活Ahr,促进巨噬细胞分泌炎症因子,加重心肌缺血再灌注损伤。

芳香烃受体在银屑病发病中的作用

芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)是一类配体依赖性转录激活因子,在调节免疫及皮肤屏障功能中具有重要的作用。近年来,AhR的靶向激活已被证明可有效治疗银屑病。本文就AhR基本特征和功能以及与银屑病发病的关系进行综述,并探讨基于AhR靶点治疗药物的发展情况。

补肾益精法调控AhR通路治疗硬皮病的机制:基于网络药理学及分子对接

目的通过网络药理学方法、分子对接方法分析芳香烃受体(AhR)信号通路在补肾益精法治疗硬皮病中的作用及其机制。方法通过TCMSP等数据库及LC-MS分析结果获取补肾益精法中药复方的有效活性成分及其靶点基因、AhR信号通路基因和硬皮病疾病基因,构建补肾益精法活性成分-AhR信号通路-硬皮病交集靶点网络图;使用STRING数据库构建蛋白互作网络;进行GO、KEGG富集分析;最后通过分子对接验证有效活性成分与AhR结合能力。结果阿魏酸、槲皮素、山奈酚、异阿魏酸、木犀草素在补肾益精法靶向AhR信号通路治疗硬皮病中发挥关键作用;其机制可能与调控参与硬皮病发病机制的IL-6、CTNNB1、HSP90AA1、TNF、PTGS2等AhR信号通路分子有关;分子对接显示阿魏酸、山奈酚、槲皮素、异阿魏酸、木犀草素等活性成分与AhR结合能均低于-6.0 kcal/mol,具有较好结合活性。结论补肾益精法治疗硬皮病的机制可能与阿魏酸、槲皮素、山奈酚、异阿魏酸、木犀草素等多种关键活性成分,靶向AhR信号通路,调控IL-6、CTNNB1、HSP90AA1、TNF、PTGS2等核心靶点相关。

自诱导因子-2激活芳香烃受体缓解新生小鼠坏死性小肠结肠炎肠道损伤

目的探讨自诱导因子-2(autoinducer-2,AI-2)缓解新生鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enter colitis,NEC)模型肠道损伤的作用机制。方法将36只7 d龄C57BL/6J小鼠随机分为(n=12):对照组(Control组,由母鼠喂养)、NEC组(采用配方奶+脂多糖灌胃、缺氧和冷应激的方法诱导新生鼠NEC模型)及NEC+AI-2组(建模的配方奶中添加AI-2溶液)。记录造模期间各组小鼠体质量及存活率。建模3 d后处死小鼠,HE染色观察末端回肠组织病理学改变;RT-qPCR检测肠组织芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)、细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)基因的表达水平;Western blot检测肠组织AHR、CYP1A1蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肠组织中TNF-α、IL-6、IL-22蛋白表达水平。结果与NEC组相比,NEC+AI-2组新生鼠存活率增加(91.7%vs 66.7%,P<0.05);肠道病理损伤评分降低(1.33±0.21 vs 2.67±0.33,P<0.05);肠组织中AHR、CYP1A1在基因及蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05);肠组织中促炎因子TNF-α、IL-6表达水平降低(均P<0.05),抑炎因子IL-22表达水平增加(均P<0.05)。肠道AHR表达及活化与肠道病理损伤评分呈明显的负相关关系(P<0.001)。结论AI-2可通过激活肠道中AHR调节炎症反应缓解NEC新生鼠的肠道损伤。

基于色氨酸-芳香烃受体代谢通路探讨溃疡性结肠炎肠屏障修复的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)是结肠黏膜的一种特发性慢性炎症性疾病,近年来UC的发病率在各国逐渐增加,其发病与肠屏障功能受损密切相关,色氨酸通过多种代谢途径产生芳香烃受体(AhR)的配体,这些配体可以与AhR结合并刺激下游靶基因的表达,从而修复肠屏障的功能。调节Trp-AhR通路可能成为治疗UC的有效途径。该研究就该通路在修复UC肠屏障的研究进展作一综述。

运动性骨骼肌损伤中时钟基因BMAL1与MyoD的作用

背景:一次大负荷运动后会引起肌联蛋白titin降解导致骨骼肌损伤,成肌调节因子家族MyoD参与骨骼肌生成,在骨骼肌损伤修复中发挥重要的作用。目的:观察一次大负荷运动不同时相下骨骼肌MyoD、时钟基因BMAL1与titin表达变化,以期明确BMAL1与MyoD在运动诱导骨骼肌损伤中的作用。方法:24只8周龄SD大鼠随机分为安静对照组(n=4)和运动组(n=20)。运动组大鼠于跑台进行90 min下坡跑,运动后即刻(0 h)及运动后12,24,48,72 h取比目鱼肌。通过实时荧光定量PCR实验检测BMAL1、MyoD的mRNA表达量;透射电镜观察骨骼肌肌纤维超微结构变化;免疫荧光观测MyoD与BMAL1、BMAL1与titin的定位情况。结果与结论:①透射电镜显示:一次大负荷离心运动后,大鼠比目鱼肌部分位置肌节变宽,Z线模糊不清呈水波状,其中运动后12 h损伤最为严重,72 h后基本恢复;②实时荧光定量PCR检测显示:运动组BMAL1的mRNA表达呈现先升高,后趋于正常的状态;MyoD的mRNA表达呈现先下降、后升高的趋势;③免疫荧光观测:运动组可在12,24 h观测到BMAL1和MyoD的共定位;可在0,12,24 h观测到BMAL1和titin的共定位;④结果表明,MyoD与BMAL1共同参与运动性骨骼肌损伤的修复,可能是通过titin进行的。

基于信号通路探讨青黛治疗溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种慢性非特异性炎症,中医药对UC的疗效确切。中药青黛发挥多靶点、复发率低、毒副作用较小的独特优势,对UC有较快缓解作用。青黛治疗UC微观分子机制可能涉及芳香烃受体/白介素-22(aryl hydrocarbon receptor/interleukin-22,AhR/IL-22)、核因子—红细胞2型相关因子/血红素氧合酶-1(nuclear factor erythroid 2-related factor 2/heme oxygenase-1,Nrf2/HO-1)、Janus激酶/信号转导和转录激活因子3(janus kinase/signal transducer and activator of transcription 3,JAK/STAT3)、转化生长因子β/Smad(transforming growth factorβ,TGF-β/Smad)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、核因子-κB(nuclearfactor kappa-B,NF-κB)7条信号通路。大量动物实验、细胞实验证明,青黛及活性成分可通过直接作用于AhR然后激活AhR/IL-22信号通路,调节免疫反应,加强肠黏膜屏障功能;通过Nrf2/HO-1信号通路发挥抗氧化应激保护肠道屏障;通过JAK/STAT3信号通路调节辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞免疫平衡;通过NF-κB、MAPK信号通路发挥抗炎、抗细胞焦亡、保护紧密连接屏障作用;通过PI3K/Akt信号通路调节凋亡蛋白表达,预防UC相关癌症进展;通过TGF-β/Smad信号通路调节炎症因子,预防肠道纤维化等。现代分子生物学研究证实青黛及主要成分可通过调节相关信号通路相关分子的表达,降低肠道细胞的异常凋亡、分化及相关炎性因子的转录与释放,改善肠道稳态,加速溃疡愈合。本综述系统阐述青黛通过各信号通路调节机体免疫反应治疗UC,充分挖掘青黛活性成分及方剂的作用机制,为中医药发展提供理论基础。

逍遥散对胃癌荷瘤共病抑郁小鼠程序性死亡受体1抑制剂治疗的增敏作用及机制探讨

目的 观察逍遥散对胃癌荷瘤共病抑郁小鼠程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)抑制剂治疗的增敏作用,并探讨其作用机制。方法 采用皮下移植胃癌细胞系——MCF细胞构建荷瘤小鼠共60只,随机分为荷瘤对照组、荷瘤共病抑郁组、PD-1抑制剂组、逍遥散联合PD-1抑制剂组,每组15只。荷瘤对照组不做任何干预,共饲养56天;荷瘤共病抑郁组是在荷瘤对照组的基础上每天以慢性不可预知温和应激干预,每天行适量生理盐水灌胃,分别在第1天、15天、29天、43天小鼠尾静脉注射适量生理盐水;PD-1抑制剂组是在荷瘤共病抑郁组的基础上,将小鼠尾静脉注射生理盐水改为PD-1抑制剂;逍遥散联合PD-1抑制剂组是在PD-1抑制剂组的基础上,将生理盐水灌胃改为逍遥散水提物灌胃。分组后第57天,荷瘤对照组、荷瘤共病抑郁组进行糖水偏好测试、陌生环境摄食实验,分析两组小鼠的行为学变化。计算荷瘤共病抑郁组、PD-1抑制剂组、逍遥散联合PD-1抑制剂组小鼠的生存率并绘制生存曲线;获取小鼠瘤体,并测量瘤体体积及重量,计算抑瘤率;采用ELISA法检测小鼠肿瘤组织吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase, IDO)、犬尿氨酸(kynurenine, Kyn)、芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AhR)的数值;对肿瘤组织通过免疫组化法检测小鼠肿瘤组织叉头样转录因子3(forkhead box P3,Foxp3)表达情况。结果 (1)行为学改变:与荷瘤对照组比较,荷瘤共病抑郁组的糖水偏好率显著降低(P<0.01),摄食潜伏时间显著延长(P<0.01)。(2)生存率差异:荷瘤共病抑郁组小鼠生存率为20%,PD-1抑制剂组小鼠生存率为26.7%,逍遥散联合PD-1抑制剂组小鼠生存率为40%。(3)肿瘤增值差异:逍遥散联合PD-1抑制剂组瘤体体积小于PD-1抑制剂组(P<0.05),PD-1抑制剂组小于荷瘤共病抑郁组(P<0.05);逍遥散联合PD-1抑制剂组瘤体重量显著小于PD-1抑制剂组(P<0.01),PD-1抑制剂组显著小于荷瘤共病抑郁组(P<0.01);逍遥散联合PD-1抑制剂组的抑瘤率为35.4%优于PD-1抑制剂组的22.1%。(4)相关蛋白表达差异:逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中IDO的表达显著低于PD-1抑制剂组及荷瘤共病抑郁组(P<0.01);逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中Kyn的表达显著低于PD-1抑制剂组(P<0.01),PD-1抑制剂组小于荷瘤共病抑郁组(P<0.05);逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中AhR的表达显著低于PD-1抑制剂组及荷瘤共病抑郁组(P<0.01);(5)各组小鼠肿瘤组织Foxp3表达情况:与荷瘤共病抑郁组比较,PD-1抑制剂组、逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中Foxp3蛋白表达均显著降低(P<0.01);与PD-1抑制剂组比较,逍遥散联合PD-1抑制剂组肿瘤组织中Foxp3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论 逍遥散对PD-1抑制剂的增敏作用可能与通过下调IDO、Kyn、AhR水平,进而有效降低调节性T淋巴细胞的增值与分化而实现的。

芳香烃受体在炎症性皮肤病中的研究进展

芳香烃受体(AhR)又名二噁英受体,是一种配体依赖型转录因子。因其在癌症的发生发展中具有重要作用而一直受到广泛关注。AhR已被认为是免疫和炎症反应中宿主-环境相互作用的重要调节剂,参与多种皮肤病的发病机制。由于AhR在所有皮肤细胞类型中高度表达,并调节许多对皮肤基本功能至关重要的基因,其有望成为炎症性皮肤病治疗的新靶向。就AhR与炎症性皮肤疾病相关的研究成果进行阐述和分析,以助力加快新药物的研发。

芳香烃受体蛋白质生理功能及在肿瘤中的作用机制

芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)作为一种配体依赖性的转录因子,介导2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英(2,3,7,8-tetrachloro-dibenzop-dioxin,TCDD)等卤代烃的毒性作用,属于碱性螺旋-环-螺旋-PAS(basic Helix-Loop-Helix-PER-ARNT-SIM,bHLH-PAS)家族成员,具有进化保守性,在多种动物和人类中表达。该蛋白质通过与特定配体结合发生构象改变,转位至细胞核同AHR核转运蛋白(AHR nuclear translocator,ARNT)形成二聚体,并对下游靶基因表达发挥调控作用。最近研究发现,AHR也成为控制细胞增殖分化、凋亡、迁移黏附等多种生理过程的关键转录因子,揭示了AHR在细胞稳态、宿主免疫和肿瘤发展中的重要作用。本文基于国内外对AHR的系列研究,讨论了AHR功能结构、发挥作用的信号通路及其多样性的配体,重点阐述其在防御和屏障保护、调节自身免疫进程、参与调节B细胞和多种T细胞亚群发育分化及其细胞因子的表达,以及在不同微环境中对肿瘤发挥促进或抑制作用的讨论,旨在为相关免疫疾病和肿瘤的AHR靶向治疗提供新思路。

吲哚乙酰化高直链玉米淀粉改善溃疡性结肠炎的作用机制研究

为了研究吲哚乙酰化高直链玉米淀粉改善溃疡性结肠炎的作用机制,利用葡聚糖硫酸钠诱导急性溃疡性结肠炎小鼠模型,采用吲哚乙酰化高直链玉米淀粉靶向结肠释放吲哚乙酸,结合芳香烃受体抑制剂,分析小鼠结肠长度、疾病活动指数,利用酶联免疫吸附法测定结肠白介素-6、白介素-10、转化生长因子β1、髓过氧化物酶和白介素-22等细胞因子的表达水平,采用定量聚合酶链反应分析结肠紧密连接蛋白occludin、ZO-1及CYP1A1的相对表达水平,并通过流式细胞术分析肠系膜淋巴结中调节性T细胞和辅助性T细胞17的比例。结果发现,吲哚乙酰化高直链玉米淀粉明显减轻结肠长度的缩短,显著降低疾病活动指数及白介素-6和髓过氧化物酶的表达,显著促进白介素-10、转化生长因子β1、白介素-22、CYP1A1、occludin和ZO-1的表达,明显提高调节性T细胞的比例,并显著降低辅助性T细胞17的比例,而给予芳香烃受体抑制剂会削弱吲哚乙酰化高直链玉米淀粉的作用。以上结果提示,吲哚乙酰化高直链玉米淀粉可通过激活芳香烃受体发挥改善溃疡性结肠炎的作用。

BMAL1和miR-552在胃癌中的表达及其临床价值

目的探讨胃癌中芳香烃受体核转运体样蛋白1(BMAL1)和miR-552的表达及其临床价值。方法选择2018年1月至2019年1月在绍兴文理学院附属医院诊治的92例胃癌患者设为胃癌组,40例胃良性疾病患者设为对照组。收集胃癌组的胃癌组织和癌旁组织、对照组的胃病灶组织。另选取正常胃黏膜上皮细胞RGM-1和胃癌细胞(AGS、Hs746T、MGC-803及SGC-7901)。采用实时荧光定量PCR法检测各种组织和细胞中BMAL1和miR-552表达水平。分析胃癌组织中BMAL1和miR-552表达与患者临床病理特征的关系。采用ROC曲线分析胃癌组织中BMAL1和miR-552表达对患者死亡的预测效能。采用Kaplan-Meier生存曲线分析BMAL1和miR-552表达与胃癌患者生存期的关系。采用多因素logistic回归分析探讨胃癌患者预后的危险因素。结果胃癌组织中BMAL1和miR-552表达水平均显著高于癌旁组织和对照组胃病灶组织(P均<0.05),各种胃癌细胞中BMAL1和miR-552表达水平均显著高于正常胃黏膜上皮细胞(P均<0.05)。低分化、肿瘤最大径≥5 cm、T3~T4、有淋巴结转移及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者的BMAL1和miR-552表达水平分别显著高于中~高分化、肿瘤最大径<5 cm、T1~T2、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者。BMAL1预测胃癌患者死亡的截断值为2.0,敏感度为81.2%,特异度为93.6%(P<0.05);miR-552预测胃癌患者死亡的截断值为1.0,敏感度为97.6%,特异度为74.2%(P<0.05)。低分化、肿瘤最大径≥5cm、T3~T4、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、BMAL1表达≥2.0、miR-552表达≥1.0均为胃癌患者预后的危险因素(P均<0.05)。胃癌组织中BMAL1表达≥2.0且miR-552表达≥1.0的患者的中位生存期显著短于BMAL1表达<2.0或miR-552表达<1.0的患者[中位生存期(25.3±5.2)个月比(31.4±6.6)个月,Log-rank=14.677,P<0.05]。结论胃癌组织中BMAL1和miR-552表达水平均显著升高,其与患者的组织学分级、肿瘤最大径、T分期、淋巴结转移、TNM分期及生存期均有相关性。BMAL1表达≥2.0、miR-552表达≥1.0均为胃癌患者预后的危险因素,两者有潜力作为胃癌患者病情及预后评估的标志物。

基于NLRP3炎症小体探讨半夏泻心汤对炎症性结直肠癌小鼠的影响

目的 基于NLRP(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein,NLRP)3炎症小体探讨半夏泻心汤对炎症性结直肠癌(colorectal cancer,CRC)小鼠的改善作用。方法 小鼠CRC模型采用腹腔注射氧化偶氮甲烷联合口服葡聚糖硫酸钠法制备。100只小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型组、半夏泻心汤低剂量、半夏泻心汤高剂量组及美沙拉嗪组,每组各20只,连续给药14 d。记录各组小鼠一般情况;光镜观察小鼠结肠和脾脏病理改变;TUNEL染色检测结肠组织肿瘤细胞凋亡情况、荧光定量PCR检测结肠组织NLRP3、芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)、三叶因子(trefoil factor,TFF)3和p53肿瘤蛋白(tumor protein 53,P53)m RNA表达水平;免疫组化和Western Blot分别检测各组结肠组织中核增殖抗原Ki-67(Ki-67 antigen,Ki67)、AhR及NLRP3、AhR、TFF3和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9蛋白表达。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠体质量明显减轻,结肠瘤体数目增多,脾脏和胸腺指数升高,血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白介素(interleukin,IL)-6和干扰素(interferon,IFN)γ含量显著升高(P<0.01),IL-10含量下降;结肠组织中Ki67、AhR、NLRP3、AhR、MMP-9蛋白以及NLRP3、AhR和P53mRNA表达明显增高(P<0.05);而TFF3 m RNA和蛋白显著降低(P<0.01)。与模型组比较,半夏泻心汤和美沙拉嗪组上述指标的变化均发生逆转,均具有统计学差异(P<0.05),且以半夏泻心汤高剂量组变化更为显著。结论 半夏泻心汤可减轻CRC小鼠炎症反应,诱导肿瘤细胞凋亡从而改善肠黏膜屏障功能,其机制与阻断AhR通路活化抑制NLRP3炎症小体生成有关。

AhR对急性胰腺炎大鼠肠道微环境及屏障功能的影响

目的探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)大鼠肠道微环境、屏障功能及核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf-2)通路的影响。方法通过胆胰管注射5%牛磺胆酸钠的方法建立AP大鼠模型,将50只大鼠随机分组:AP组、NC组(尾部注射5μl慢病毒空白载体)、AhR过表达组(尾部注射5μl过表达AhR慢病毒载体)、AhR抑制剂组(腹腔注射10μg 2-甲基-2H-吡唑-3-羧酸)、AhR过表达+ML385组(在AhR过表达组基础上,腹腔注射20 mg/kg ML385),另取10只大鼠为假手术组。心脏采血,检测血清中脂肪酶、淀粉酶水平以及SOD、MDA、CRP水平;分离胰腺组织,观察胰腺组织损伤程度及AhR、Nrf-2、HO-1蛋白表达水平;分离回肠组织,观察肠黏膜损伤情况并进行评分。结果与假手术组相比,模型组大鼠回肠、胰腺病理评分、CRP、MDA含量、脂肪酶、淀粉酶水平均升高,SOD含量、Nrf-2、HO-1、AhR表达显著降低(P<0.05);与模型组、NC组相比,AhR过表达组大鼠回肠、胰腺病理评分、CRP、MDA含量、脂肪酶、淀粉酶水平均降低,SOD含量、Nrf-2、HO-1、AhR蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与模型组相比,AhR抑制剂组大鼠回肠、胰腺病理评分、CRP、MDA含量、脂肪酶、淀粉酶水平均升高,SOD含量、Nrf-2、HO-1、AhR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);ML385逆转了AhR过表达对AP大鼠的保护作用(P<0.05)。结论增强AhR表达可以改善AP大鼠肠道微环境,恢复肠道功能,缓解大鼠胰腺和肠黏膜损伤,可能与激活Nrf-2通路有关。

芳香烃受体与动物繁殖关系的研究进展

芳香烃受体(Aryl Hydrocarbon Receptor,AHR)是一种细胞内受体,也是一种重要的配体依赖性转录因子。现有研究发现AHR的配体和其生物学功能具有多样性,并且对动物繁殖活动有重要的调控作用,但具体机制尚不清晰。本文对AHR的配体、AHR在动物机体的分布与表达调控、AHR对激素分泌及生殖系统的作用、AHR多态性和拷贝数与产仔数关系等方面进行归纳分析,为扩展动物繁殖理论提供新思路和参考。

AhR、25-OHD和DOCK8在小儿特应性皮炎中的表达及相关性研究

目的分析芳香烃受体(AhR)、25-羟维生素D(25-OHD)和胞质分裂蛋白8(DOCK8)在小儿特应性皮炎(AD)中的表达及相关性。方法选取2019年8月—2020年8月本院收治的92例AD患儿作为AD组,80例系统性红斑狼疮(SLE)患儿作为SLE组,以同期在本院健康体检的90例健康儿童作为健康对照组。测定3组研究对象AhR、25-OHD和DOCK8的mRNA表达情况。采用Logistic回归分析影响AD发生的影响因素,采用Pearson相关性分析法分析AhR、25-OHD和DOCK8的相关性,受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析影响因素对AD发生的预测价值。结果与健康对照组比较,SLE组及AD组AhR、DOCK8的mRNA表达升高,25-OHD的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与SLE组比较,AD组AhR、DOCK8的mRNA表达升高,25-OHD的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着疾病进展,AD患儿AhR、DOCK8的mRNA表达升高,25-OHD的mRNA表达降低。与轻度AD患儿比较,中度、重度AD患儿AhR、DOCK8的mRNA表达升高,25-OHD的mRNA表达降低(P<0.05)。与中度比较,重度AD患儿AhR、DOCK8的mRNA表达升高,25-OHD的mRNA表达降低(P<0.05)。以小儿AD作为因变量(否=1,是=0),以AhR、25-OHD、DOCK8作为自变量纳入方程,建立Logistic回归模型,结果显示,高AhR[优势比(OR)=13.283,95%可信区间(95%CI):4.371~40.365]和高DOCK8(OR=3402.792,95%CI:100.332~115406.258)为小儿AD发生的独立危险因素,高25-OHD(OR=0.679,95%CI:0.561~0.822)为小儿AD发生的保护因素(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,AhR与25-OHD之间呈负相关(r=-0.230,P=0.003);AhR与DOCK8之间呈正相关(r=0.410,P=0.001);25-OHD与DOCK8之间呈负相关(r=-0.455,P=0.001)。与AhR(AUC=0.897)、25-OHD(AUC=0.766)和DOCK8(AUC=0.918)单项预测比较,3项联合(AUC=0.975,当截断值为0.431时,其敏感度为98.24%,特异度为89.13%)预测小儿AD发生的价值较高(P<0.05)。结论AhR在小儿AD中表达升高,DOCK8、25-OHD在小儿AD中表达降低,且与患儿疾病严重程度相关,三者线性相关,临床可根据其表达高低早期诊断此病。

禽传染性支气管炎病毒非编码RNA调控芳烃受体及其信号通路相关基因的表达

为了探究禽传染性支气管炎病毒非编码RNA对芳烃受体(AhR)及其信号通路相关基因表达的调控作用,将rIBV和rIBV-C27107G分别感染H1299细胞16 h后,用qRT-PCR检测AhR及其通路相关基因的表达水平,并用Western blot检测AhR蛋白的丰度。结果显示,不产生ncRNA的IBV感染可激活AhR信号通路,诱导H1299细胞产生抗病毒反应,而IBV编码的ncRNA抑制AhR信号通路的激活,从而抑制细胞因子IL-6、IL-8和IL-12β的上调表达,利于病毒的复制。

二噁英及类二噁英污染物致免疫毒性作用机制研究进展

二噁英是芳烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)的高效外源配体,已知可以通过AHR发挥免疫毒性作用。经典的AHR毒性通路是指AHR由配体激活后进入细胞核,并与芳烃受体核转运蛋白(AHR nuclear translocator,ARNT)形成复合物,诱导二噁英反应元件(dioxin response element,DRE)控制的下游免疫相关基因的表达。但新的研究表明二噁英诱导免疫毒性还存在多种非经典的AHR通路,即激活后的AHR与其他信号通路(如炎症反应、细胞周期和信号转导)中的关键蛋白之间发生相互串扰,影响细胞功能。该过程中,AHR直接或以AHR-ARNT复合物的形式与其他转录因子相互作用,协同募集到共识或非共识DRE位点并与之结合,进而影响关键分子的转录和表达。目前已有许多与二噁英结构相似的物质被证明具有类二噁英的AHR激活活性,包括部分多氯联苯、多环芳烃和多溴联苯醚等,被称为类二噁英物质(dioxin-like compounds,DLCs)。DLCs可以通过激活AHR影响免疫系统,但一些研究表明,部分DLCs的免疫毒性可通过非AHR依赖的途径产生,这些途径可能包括导致细胞氧化应激、影响细胞呼吸爆发反应、促进细胞凋亡和干扰线粒体功能等。总之,与二噁英相比,DLCs的免疫毒性作用机制并不清晰,还需要更为系统的研究。

基于芳香烃受体探讨青黛及其主要成分缓解溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨青黛及其主要成分对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用及机制。方法将42只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、青黛组、靛蓝组、靛玉红组和色胺酮组,每组7只。除空白组外,其余组采用葡聚糖硫酸钠自由饮用10 d建立UC小鼠模型,各给药组从造模第4日开始予相应药液灌胃,连续7 d。记录小鼠一般状况,测量小鼠结肠长度,HE染色观察结肠组织病理形态,Western blot检测结肠组织芳香烃受体(AHR)、细胞色素P4501A1(CYP1A1)、白细胞介素(IL)-10、IL-22蛋白表达量,RT-PCR检测结肠组织AHR、CYP1A1、IL-10、IL-22 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量明显减轻,结肠长度明显缩短;结肠组织结构破坏,隐窝结构变形,上皮细胞坏死水肿,中性粒细胞和淋巴细胞弥漫性浸润,结肠组织CYP1A1、IL-10、IL-22蛋白表达明显降低,AHR、IL-10、IL-22 mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠体质量明显增加(P<0.01),青黛组、靛玉红组和色胺酮组小鼠结肠长度明显增加(P<0.05,P<0.01);各给药组小鼠结肠组织黏膜损伤及溃疡情况明显好转,水肿及炎性细胞浸润不同程度改善,结肠组织AHR、CYP1A1、IL-10、IL-22蛋白表达明显升高(P<0.01),靛玉红组和色胺酮组小鼠结肠组织AHR、CYP1A1、IL-10、IL-22 mRNA表达明显升高(P<0.01)。结论青黛可能通过激活AHR/CYP1A1信号途径调节炎症因子IL-10、IL-22表达,从而改善UC小鼠炎症损伤。

芳香烃受体调控人脂肪间充质干细胞的免疫调节功能

目的探索芳香烃受体(AHR)对人脂肪间充质干细胞(MSCs)免疫调节功能的影响。方法RT-qPCR和免疫荧光染色法检测炎性细胞因子刺激前后,MSCs中吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、白细胞介素-4诱导基因1(IL4I1)和芳香烃受体表达水平;将si-Ctrl、si-IDO1、si-IL4I1、si-AHR转染至MSCs,阻断AHR信号通路;将MSCs的条件培养基与巨噬细胞共培养,RT-qPCR和ELISA检测巨噬细胞炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果未经细胞因子刺激的MSCs高表达AHR,几乎不表达IDO和IL4I1蛋白;不同细胞因子刺激后,代谢酶IDO1、IL4I1及AHR表达上调(P<0.05),IFN-γ刺激后IDO1、IL4I1表达上调最为显著(P<0.001),进入细胞核的AHR增多;下调AHR的表达削弱MSCs的免疫抑制作用(P<0.05)。结论AHR参与调节MSCs的免疫功能,下调AHR可以抑制MSCs的免疫调节作用。