肝靶向基因给药系统AsOR-PL+PEG-PEI的研究

目的:研制含有靶向配基、DNA聚合亚基、溶酶体活性成分及聚乙二醇等多种组分的肝靶向的DNA给药系统。 方法:分别制备AsOR-PL偶合物及PEG-PEI偶合物,然后按照不同的比例先后与报告基因DNA形成复合物,再进行Huh-7细胞的体外转染试验和静脉给药后小鼠体内的表达试验。 结果:AsOR-PL/PEG-PEI/DNA复合物对受体阳性的Huh-7细胞具有较高的转染效率;小鼠尾静脉给药后能够在肝脏特异性表达。 结论:含有靶向配基、DNA聚合亚基、溶酶体活性成分及聚乙二醇等多种组分的载体系统能将DNA选择性的投放于小鼠肝脏,显示了较好的应用前景。

PEG-PEI共聚物介导VEGF165基因转染及对内皮细胞生长的影响

为了考察PEG-PEI共聚物作为基因载体介导VEGF165基因的能力,合成不同接枝量的PEG-PEI共聚物,考察共聚物的细胞毒性,同时采用PCR技术获得上下游含有HindⅢ和BamHⅠ酶切位点的目的基因VEGF165,与pEGFP-C1构建重组质粒pEGFP-VEGF165,将PEG-PEI作为基因载体,与pEGFP-VEGF165通过自组装成DNA复合物,使其转染脐静脉内皮细胞(HUVEc),测定发荧光细胞百分数获得转染率,利用ELISA、RT-PCR检测VEGF的表达,用MTT法考察VEGF165转染HUVEc后对内皮细胞生长的影响.结果显示,形成PEG-PEI共聚物后可显著降低PEI的细胞毒性.作为基因载体介导pEGFP-VEGF165转染HUVEc后,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,转染率与接枝PEG的量及N/P有关,PEG-PEI(5-25-1)在N/P=30时转染率达到最大值,比PEI显著提高.转染后血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达及mRNA水平均有显著提高,且可有效地刺激内皮细胞增殖.研究表明,PEG-PEI共聚物可做为基因载体,有效地介导pEGFP-VEGF165基因的传递.

聚乙二醇-聚乙烯亚胺共聚物介导体外基因传递

【目的】研究非病毒基因载体聚乙二醇(PEG)-聚乙烯亚胺(PEI)共聚物的组成对体外介导基因传递的影响。【方法】将含PEG不同分子量和接枝量的PEG-PEI共聚物,与DNA形成复合物。考察带正电荷的PEI与带负电荷的DNA的相互作用,测定了PEG-PEI/DNA复合物的粒径和Zeta电位,及对Hela细胞的毒性和转染率。【结果】PEG侧链并未明显影响PEI与DNA形成复合物的能力;连接PEG5000能够明显降低复合物的粒径;复合物的Zeta电位随着PEG接枝量的增加而降低;细胞毒性不依赖于PEG的分子量的变化,而是取决于PEG的接枝量;共聚物PEG-PEI(2-25-1)被证实为较有效的介导体外基因传递的复合物。【结论】共聚物的结构组成对DNA复合物的理化性质、毒性和转染率都产生较大的影响。

非病毒基因载体聚乙二醇-聚乙烯亚胺共聚物缓冲容量的研究

目的考察非病毒基因载体PEI不同的分子量及接枝PEG的量对缓冲容量的影响。方法采用电位滴定的方法，根据公式β=dc（HCl）／dpH计算获得缓冲容量。结果分子量不同的PEI缓冲容量的最大值均〉8，且pH值随着分子量的增加而降低；同一分子量的PEI接枝不同量的PEG后，缓冲容量有明显的下降，接枝PEG量越多，缓冲容量下降越大。在生理pH4～7，缓冲容量差异减小。结论PEI分子量及接枝PEG的量对缓冲容量会产生一定影响．而缓冲容量又会影响PEI介导基因传递的能力。

靶向纳米材料作为大鼠单个核细胞基因载体的研究

目的:探讨纳米材料聚乙二醇-聚乙烯亚胺(PEG-PEI)作为基因载体的可行性研究,研究其负载质粒DNA(p DNA)的能力,分析所形成纳米材料/p DNA复合物的特性,以及体外对细胞的毒性大小及其转染效率。方法:以PEI为对照,合成PEG-PEI,采用MTT法检测所形成纳米材料/DNA复合物对大鼠单个核细胞(PBMC)的细胞毒性,再采用倒置荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效果。结果:N/P<10时,PEG-PEI和PEI的存活率分别为82.7%及81.3%(P﹥0.05);N/P=10时,PEG-PEI是81%,PEI为59%(P<0.05);N/P﹥10时,PEG-PEI的细胞存活率比PEI低(P<0.05)。N/P=10时,用倒置荧光显微镜观测PEG-PEI较PEI表达的绿色荧光多,荧光强度大(P<0.05);同时利用流式细胞仪检测PEG-PEI和PEI的转染效率,分别为28.9%和12.5%(P<0.05)。结论:纳米材料PEG-PEI具有强的负载能力,转染效率高,细胞毒性低的优点,为作为多发性硬化基因载体的可行性奠定了实践基础。

PEG-PEI共聚物/DNA复合物的物理化学性能研究

目的研究合成的非病毒基因载体材料PEG-PEI共聚物与DNA形成复合物的各项物理化学性能指标,为PEG-PEI共聚物作为非病毒基因载体介导体内外基因传递的研究奠定基础。方法将含PEG不同相对分子质量和接枝量的PEG-PEI共聚物,与DNA形成复合物。测定了PEG-PEI/DNA复合物的粒径、Zeta电位,结构形态、在水溶液中的溶解性及共聚物的缓冲容量,分析了接枝PEG对各项物理化学性能的影响。结果接枝了PEG后,PEG-PEI/DNA复合物的粒径都明显减小,Zeta电位有一定程度的下降,接枝相对分子质量较大的PEG可使Zeta电位下降较多,亲水链段PEG对降低粒子间的聚集和增加溶解性起到了关键性的作用。接枝PEG的量对引起的内含体破裂并释放DNA的质子海绵效应不会产生明显影响。结论形成PEG-PEI共聚物后,对PEI/DNA复合物的物理化学性能有一定的改善作用,使复合物更适宜用于体内基因转导。