O型、A型及Asia-1型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立

根据口蹄疫病毒VP1基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计4条特异性引物,通过对退火温度等反应条件进行优化,建立能够同时扩增出O型、A型、Asia-1型口蹄疫病毒的多重RT-PCR检测方法。结果表明,建立的方法最低可以检测出约含1 pg/μL的病毒样品;该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等其他相关病毒的检测结果均为阴性,特异性良好。建立的方法能够对口蹄疫O型、A型、Asia-1型病毒准确定型,可广泛用于口蹄疫病毒3个血清型的快速检测和分子流行病学调查。

豚鼠动物模型评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的研究

以豚鼠为试验动物模型,探索一种应用豚鼠替代牛进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法。豚鼠和牛同步对6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗进行PD50效力检验,其中2批进行重复性试验。豚鼠分别在免疫后7、14、21和28天采血检测Asia-1型的中和抗体水平。统计学分析显示,测定的豚鼠PD50和牛PD50之间具有极显著的相关性(R=0.846,P<0.01);经回归分析,建立了应用豚鼠测定的PD50预测牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的线性回归模型(y=1.625x-0.704;x表示豚鼠PD50结果;y表示牛PD50结果)。F检验(F=15.058,P=0.008)和t检验(t=3.880,P=0.008)证明该线性方程成立。豚鼠的Asia-1型抗体水平随免疫剂量的增加而升高,攻毒时的抗体水平与攻毒后的保护力存在正相关关系。本研究初步证明,在未来的效力检验中豚鼠可作为试验动物替代牛进行口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验。