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Secretive expression of Aspergillus fumigatus phytase in tobacco improves phosphorus nutrition in plant
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作者 王严 Gao Xiaorong Su Qiao An Lijia 《High Technology Letters》 EI CAS 2007年第4期436-440,共5页
To generate transgenic plants capable of utilizing exogenous phytate, an Aspersgillus fumigatus phytase gene (fphyA) was constitutively expressed in tobacco and recombinant enzyme was secreted from plant roots into ... To generate transgenic plants capable of utilizing exogenous phytate, an Aspersgillus fumigatus phytase gene (fphyA) was constitutively expressed in tobacco and recombinant enzyme was secreted from plant roots into the rhizosphere using the signal sequence from tobacco calreticulin. After 40 days of plant growth in hydroponic media, phytase activities in leaves, stems, roots and growth media of transgenic plants were 8.6-fold, 7.4-fold, 12.6-fold and 14.3-fold higher than those of wild-type plants. Signifi- cant improvements in plant growth and phosphorus (P) utilization were observed in the transgenic plants. When phytate was supplied as the sole P source, 45-day-old transgenic tobaccos accumulated 1.0-fold and 0.5-fold more shoot and root biomass than wild-type tobaccos, with a concomitant of l. 7-fold increase in total P concentration. These results indicate that secretive expression of the A. fumigatus phytase improves acquisition and use of P from phytate in plants. 展开更多
关键词 aspergillus fumigatus PHOSPHORUS PHYTATE phytase gene TOBACCO
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无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)植酸酶基因的克隆及序列分析
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作者 张波 王林美 +2 位作者 叶博 赵振军 李树英 《辽宁农业科学》 2010年第3期22-25,共4页
以无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增植酸酶基因(phyA)。将PCR产物克隆到pMD 18-T质粒中,用于DNA测序。DNA序列分析结果表明,基因全长1 509 bp,其中包括一个长105 bp的内含子。编码467个氨基酸,第1-1... 以无花果曲霉(Aspergillus ficuum 3.4322)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增植酸酶基因(phyA)。将PCR产物克隆到pMD 18-T质粒中,用于DNA测序。DNA序列分析结果表明,基因全长1 509 bp,其中包括一个长105 bp的内含子。编码467个氨基酸,第1-19氨基酸为信号肽序列,成熟的植酸酶由448个氨基酸组成。与黑曲霉(Aspergillus niger)植酸酶(GenBank Accession:M94550)的氨基酸同源性为95.7%,与无花果曲霉(Aspergillus ficuum3.324)植酸酶(GenBank Accession:AY013315)的氨基酸同源性为98.9%,显示了植酸酶基因在不同菌株中的差异。 展开更多
关键词 无花果曲霉 植酸酶 基因克隆
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烟曲霉植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母的高效表达 被引量:6
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作者 张桂敏 张晚鸣 +1 位作者 何国帮 马立新 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期529-532,共4页
根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列,设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR,扩增出了1条约1.4 kb的带,将该片段进行DNA序列测定,其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致,但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆... 根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列,设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR,扩增出了1条约1.4 kb的带,将该片段进行DNA序列测定,其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致,但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上,获得表达质粒pHBM108。该质粒转化毕赤酵母KM71所得重组子经PCR验证后进行诱导表达,其中一重组子经144 h诱导,植酸酶表达量至少为1.25 mg/ml,比同类报道的表达量高出60%以上,以植酸钠为底物测得酶活为11.17U/ml。 展开更多
关键词 烟曲霉植酸酶基因 基因克隆 毕赤酵母 基因表达 菌种 质粒 PCR扩增 饲料添加剂
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烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量:6
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作者 史利宁 邵世和 +5 位作者 李芳秋 孔小祥 王仕钦 陆静芬 黄梅 邵海枫 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期599-601,共3页
目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实... 目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选重组表达质粒。用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。结果构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。结论成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 烟曲霉 硫氧还蛋白还原酶 基因克隆 原核表达
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烟曲霉WY-1植酸酶基因的克隆及其在烟草中的表达 被引量:3
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作者 王严 高晓蓉 +2 位作者 苏乔 夏秀英 安利佳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第7期1923-1924,1931,共3页
以自行筛选的烟曲霉WY-1为出发菌株,通过PCR方法克隆其植酸酶基因,并构建了含有植物信号肽序列的植酸酶基因植物表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法对烟草叶片进行了遗传转化。结果表明,PCR鉴定和Southern杂交分析说明植酸酶基因已整合到... 以自行筛选的烟曲霉WY-1为出发菌株,通过PCR方法克隆其植酸酶基因,并构建了含有植物信号肽序列的植酸酶基因植物表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法对烟草叶片进行了遗传转化。结果表明,PCR鉴定和Southern杂交分析说明植酸酶基因已整合到烟草的基因组中;RT-PCR检测结果证实了植酸酶基因已得到转录表达;酶活性分析表明功能性的植酸酶已成功表达在烟草中,这是烟曲霉植酸酶基因在烟草中的首次表达。 展开更多
关键词 烟曲霉 植酸酶基因 表达 烟草
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产植酸酶菌株的筛选及其植酸酶基因的克隆 被引量:1
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作者 王严 高晓蓉 +2 位作者 苏乔 王静云 安利佳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期719-722,共4页
从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的烟曲霉菌株WY-2,其植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃。通过对烟曲霉WY-2植酸酶基因进行PCR扩增,获得了一个1.5kb大小的特异性产物,将其克隆到载体pMD18-T中。测序结果分析表明,该基因片段含有植酸酶... 从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的烟曲霉菌株WY-2,其植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃。通过对烟曲霉WY-2植酸酶基因进行PCR扩增,获得了一个1.5kb大小的特异性产物,将其克隆到载体pMD18-T中。测序结果分析表明,该基因片段含有植酸酶基因完整的阅读框架(ORF),基因全长1459bp,其中包含一个61bp的内含子,编码465个氨基酸,有7个潜在的糖基化位点,5′端有一编码26个氨基酸的信号肽序列。该基因与已报道的烟曲霉ATCC34625植酸酶基因有91%同源性,编码的氨基酸序列同源性为91%。 展开更多
关键词 烟曲霉 植酸酶基因 克隆
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