原生质体诱变选育乳糖酶高产菌株

采用紫外线诱变和60Co-γ射线协同诱变的方法,对出发菌株Uco-3的原生质体进行诱变处理,通过正突变率与诱变剂量的相互关系,确定最佳诱变剂量。采用4min的紫外线照射和剂量为500Gy的γ射线对黑曲霉Uco-3的原生质体进行诱变,获得一株产高温乳糖酶的高产突变株,突变株产乳糖酶能力显著提高,产酶活力达44.37U/mL,是出发菌株Uco-3的2.73倍。

He-Ne激光诱变黑曲霉Sx的原生质体

对生淀粉糖化菌黑曲霉Ｓｘ用混和酶制取原生质体进行了探索．在ＧＭ培养基中加入一定量的Ｃｕ２＋、Ｍｎ２＋，原生质体产量较高；采用ｐＨ４～５的蜗牛酶、纤维素酶、溶菌酶的混合酶，最佳浓度比为：１．５∶３．５∶１．５（ｍｇ／ｍＬ）．取在ＧＭ培养基中培养１７～１８ｈ的菌丝，在３２℃酶解３ｈ，原生质体产量最高，达到２．４×１０５个／ｍＬ；在加入β－巯基乙醇及二硫苏糖醇处理菌丝时，原生质体产量提高近３倍．在再生培养基中，加入终浓度为３０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４时，原生质体再生率由１６．７％提高到２５．６％．用Ｈｅ－Ｎｅ激光照射原生质体时，功率９ｍＷ照射３０ｍｉｎ时致死率为５０％，随着时间的延长，原生质体存活率降低．采用波长６３２．５ｎｍ、功率９ｍＷ、光斑直径５ｍｍ的Ｈｅ－Ｎｅ激光多次照射诱变，筛选出一株酶活力最高菌株黑曲霉Ｓｙ，活力提高５１％，经连续传代５次。

高温乳糖酶产生菌株的诱变选育

以产高温乳糖酶的黑曲霉菌株(Aspergillusniger)D2-26作为出发菌株,经1次紫外线和3次γ射线诱变后,获得1株产高温乳糖酶的黑曲霉突变株UCo-3,其菌落形态较出发菌株略有差异,菌落呈圆形年轮状,菌落背面只在接种处有明显的皱褶。该突变株产生的高温乳糖酶活力达16 27U mL。

黑曲霉原生质体诱变选育β-葡萄糖苷酶高产菌株

本研究报道了以原生质体诱变技术选育高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉菌株,并研究了其发酵特性。以黑曲霉CGMCC3.316为出发菌株,通过紫外诱变得到突变株3-3M。然后以3-3M为供试菌株,研究了其原生质体制备与再生的条件。最后通过原生质体诱变,选育得到一株β-葡萄糖苷酶活力较高的突变株60B-3D。该菌株具有良好的遗传稳定性,酶活力平均达到23IU/mL,与出发菌株CGMCC3.316相比提高39%。此外,该菌株的木聚糖酶活力也有所增加。同时考察了黑曲霉60B-3D的发酵特性,并与3-3M和出发菌株进行比较,结果表明该菌株有较高的蛋白分泌能力。本研究为发酵生产β-葡萄糖苷酶提供了一株良好的供试菌株。

黑曲霉乳糖酶高产菌株的诱变选育

为诱变选育出产高温乳糖酶的高产黑曲霉(Aspergillusniger)菌株,采用紫外线诱变和Co60-γ射线诱变协同的方法,对出发菌株D2-26进行诱变处理,并根据致死率与诱变剂量的相互关系,选择合适的诱变剂量。确定了菌株的最佳诱变剂量,即采用15min紫外线照射,用剂量为2kGy的γ射线对黑曲霉D2-26进行诱变,获得1株产高温乳糖酶的高产突变株(A.nigerUCO-3)。对其进行显微观察发现,突变株菌落形态较原菌株略有改变,菌落呈整齐圆形年轮状,菌落背面只在接种处有明显的皱褶。突变株产乳糖酶能力显著提高,酶活力可达16.27U/mL。紫外线和Co60-γ射线的协同诱变效果好,突变株稳定性和产酶情况良好。