酿造酱油米曲霉产中性蛋白酶提取与酶学性质研究

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶的提取及部分性质进行了研究。结果表明：硫酸铵分级沉淀的饱和浓度范围为40％～80％；该中性蛋白酶的最适作用温度为60℃，最适pH值为7．0。40℃下酶稳定性较好，60℃下处理20min，粗酶中几乎检测不到酶活力；中性蛋白酶pH稳定范围为6．0～8．0。Km值为2．84mg／mL；最大反应速度Vmax为0．32mg／（min·mL）。Mg^2＋对酶活有激活作用，Cu^2＋、Fe^3＋、Zn^2＋、Mn^2＋不同程度抑制酶活性，其中Cu^2＋、Fe^3＋强烈抑制酶活性。

米曲霉F-81产中性蛋白酶的固定化条件及其特性

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化米曲霉F-81产中性蛋白酶,研究了固定化条件及固定化酶的性质。结果表明,固定化的最佳条件为:固定化时间1 h、海澡酸钠浓度4%、戊二醛浓度9%、CaCl2浓度0.7 mol/L。在此条件下固定化的中性蛋白酶活力为游离酶活力的68%。固定化酶的最适作用温度为65℃,最适作用pH值为7.0。60℃下酶稳定性较好,80℃下处理60 min,粗酶中几乎检测不到酶活力;中性蛋白酶pH稳定范围为6.5-9.5。Km值为24.83 mg/mL,最大反应速率Vmax为0.043 12 mg/min。

米曲霉F-81菌株产中性蛋白酶的分离纯化

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶进行分离纯化。经过硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl-S200凝胶过滤层析后,得到一种电泳纯的中性蛋白酶,纯化倍数为26.3倍,活性回收率为6.7%。经SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量约为73.4kD。