西沙马尾藻共附生真菌Aspergillus sp.SYPUF41304次级代谢产物的分离与鉴定

目的对西沙马尾藻共附生真菌Aspergillus sp.SYPUF41304的次级代谢产物进行分离与鉴定。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、中压反相柱色谱及半制备高效液相色谱等分离手段对马尾藻共附生真菌Aspergillus sp.SYPUF41304的液体发酵提取物进行分离纯化,并利用核磁共振、质谱等波谱学方法,结合文献对照,确定化合物结构。结果最终从提取物中分离得到10个化合物,经鉴定为吲哚-3-甲醛(1H-indole-3-carboxaldehyde)(1)、吲哚-3-乙酸甲酯(methyl indole-3-acetate)(2)、环(L-脯氨酸-L-缬氨酸)(cyclo-L-prolyl-L-valine)(3)、brevianamide F(4)、asperterreusine A(5)、talaisocoumarin A(6)、3-甲基-6-羟基-8甲氧基-3,4-二氢异香豆素(3-methyl-6-hydroxy-8-methoxy-3,4-dihydroisocoumarin)(7)、3-甲氧基-6,8-二羟基-3-甲基-3,4-二氢异香豆素(3-methoxy-6,8-dihydroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin)(8)、4-hydroxykigelin(9)和de-O-methyldiaporthin(10)。结论化合物按结构类型可分为生物碱和聚酮类等,化合物4~8均为首次从该属真菌中分离得到。所有化合物在4 mg·mL^(-1)浓度下,均未显示出抗细菌活性。

红树林内生真菌Aspergillus sp.085035次级代谢产物研究

目的:研究红树林内生真菌Aspergillus sp.085035的次级代谢产物。方法:采用柱色谱和半制备高效液相色谱技术对Aspergillus sp.085035的次级代谢产物进行分离纯化,并利用波谱数据和X-射线单晶衍射等方法鉴定化合物结构;采用MTT法对所得化合物进行细胞毒活性检测。结果:从红树林内生真菌Aspergillus sp.085035的乙酸乙酯粗提物中分离得到9个化合物,分别鉴定为:13R-fumigaclavine C(1)、8'-O-methylasterric acid(2)、1,2-secotrypacidin(3)、rhizoctonic acid(4)、chaetominine(5)、helvolic acid(6)、trypacidin(7)、emodin-8-methylether(8)和fumitremorgin C(9)。结论:化合物1为新天然产物,化合物1、8为首次从曲霉属中分离得到,所有化合物均为首次从该真菌中分离得到,化合物7对MDA-MB-435细胞株具有细胞毒活性。

海洋本草软珊瑚共附生真菌Aspergillus sp.EGF7-0-1中酚酸类化学成分研究(Ⅱ)

为寻找海洋来源结构新颖的次生代谢产物,采用大米培养基对海洋本草软珊瑚(Sinularia sp.)共附生真菌Aspergillus sp.EGF7-0-1进行规模发酵,利用高效液相色谱等多种柱色谱技术对其乙酸乙酯提取物进行分离纯化;采用核磁共振波谱、高分辨质谱、旋光光谱等现代光谱学方法,并结合文献数据比对等对其进行结构鉴定,获得10个简单芳香酚酸化合物,分别为4-hydroxy-3-(3'-methyl-2'-butenyl)phenylacetic acid(1)、asperulosin C(2)、对羟基苯乙酸(3)、对羟基苯乙酸甲酯(4)、4-hydroxy-3-prenyl-benzoic acid(5)、4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl)benzaldehyde(6)、对羟基苯甲醛(7)、对羟基苯甲酸甲酯(8)、间羟基苯乙酸(9)和2,2'-oxybis(1,4)-ditert-butylbenzene(10),其中化合物1是新发现的天然产物。抗肿瘤活性研究表明,化合物1~10对人结肠癌细胞、人乳腺癌细胞、人肝癌细胞、小鼠肝癌细胞、小鼠乳腺癌细胞、小鼠黑色素瘤细胞和小鼠皮肤黑色素瘤细胞等肿瘤细胞均无活性。

Aspergillus sp.DLCS-F18胞外嗜热嗜酸β-葡萄糖苷酶的酶学性质研究

β-葡萄糖苷酶作为纤维素彻底降解为葡萄糖的关键酶,被广泛运用于饲料、食品和生物燃料等行业。然而,许多菌株分泌的胞外β-葡萄糖苷酶活性低且热稳定性差,限制了其在纤维素生物质降解中的应用。本研究使用稻草秸秆作为碳源诱导菌株Aspergillus sp.DLCS-F18分泌胞外β-葡萄糖苷酶。结果表明:其最适反应pH和温度分别为4.0和60℃,在55℃和60℃下,孵育120 min后仍能保持95%以上的相对活性。此外,其表现出对金属离子的耐受性,在10 mmol/L的Ni^(2+)、Co^(2+)、Pb^(2+)和Cu^(2+)存在时,仍保持75%以上的相对活性,发酵96 h达到最高活性(2.5±0.1)U/mL。以上结果表明Aspergillus sp.DLCS-F18胞外β-葡萄糖苷酶为嗜热嗜酸β-葡萄糖苷酶,有较强的热稳定性,且产酶周期短。这预示着其在食品、饲料和纤维素乙醇生产方面有重要的潜在运用价值。

产自Aspergillus sp.DLCS-F18的嗜酸嗜热木聚糖酶及其酶学性质研究

本研究以大理苍山地区来源的曲霉属菌株Aspergillus sp.DLCS-F18为材料,使用稻草为唯一碳源进行发酵培养。结果表明:其所产生的胞外木聚糖酶最适pH和温度分别为5.0和60℃,在pH 3.6~8.0保持60%以上的活性,50℃处理120 min后还能保持100%的活性,在大多数金属离子和酶抑制剂存在的条件下活性表现稳定。菌株发酵72 h的上清液对木聚糖的最高活性为2.27 U/mL。这说明菌株DLCS-F18作为木聚糖酶高产菌株,其所分泌的木聚糖酶为嗜酸嗜热木聚糖酶,这预示着该菌株所产木聚糖酶在饲料和工业生产中具有广阔的应用前景。

海洋来源真菌Aspergillus sp.SCSIO 41501中含氮化合物

通过多种色谱柱层析(包括凝胶Sephadex LH-20、正相硅胶、中压液相色谱和高效液相色谱)分离手段,从来源于南海柳珊瑚Melitodessquamata的一株共附生真菌Aspergillus sp.SCSIO 41501的发酵液中分离纯化了11个含氮化合物,它们的化学结构通过核磁共振和质谱等技术分别鉴定为13-(S)-赭曲霉素A(1)、13-(S)-甲酯化赭曲霉素A(2)、13-(R)-赭曲霉素A(3)、4-(R)-OH-赭曲霉素A(4)、18-OH-赭曲霉素A(5)、transtorine(6)、quinolactacin C1(7)、marinamide(8)、methyl marinamide(9)、aspergilliamide(10)、anoectochine(11)。所有化合物进行了抗菌实验,其中化合物2对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌具有较强的活性,其MIC值分别为31.25、7.8、15.6μg/m L,化合物3显示中等抗菌活性,其MIC值分别为62.5、31.25、62.5μg/m L。

柳珊瑚来源真菌Aspergillussp．中吲哚生物碱类化学成分的研究

对中国南海西沙群岛柳珊瑚Dichotella gemmacea共附生真菌曲霉Aspergillus sp.的吲哚生物碱类化学成分进行研究,从中寻找活性次级代谢产物,并探讨它们之间的生源合成关系。采用多种色谱方法进行分离纯化,利用NMR、MS等波谱学方法,并与文献对照,鉴定化合物的结构;利用抗菌及卤虫致死生物活性模型,评价吲哚生物碱类化合物的生物活性。结果显示从乙酸乙酯相中分离得到8个吲哚生物碱类化合物,分别为notoamide E(1),notoamide D(2),notoamide K(3),notoamide I(4),notoamide R(5),notoamide F(6),notoamide A(7)和sclerotiamide(8)。其中化合物7和8显示了较强的卤虫致死活性,在浓度为5μg/mL时的致死率分别为63.0%和68.5%。

固定化Aspergillus sp.吸附Cr(Ⅵ)的实验研究

采用包埋法固定Aspergillussp.菌体制备成生物吸附剂,对水中的Cr6+进行吸附实验。通过比较几种不同的固定化载体,发现5%PVA+1%SA为最佳固定载体。还研究了pH值、Cr6+初始浓度、菌体浓度、吸附时间、共存离子等因素对Cr6+吸附的影响,并对Aspergillussp.菌体去除Cr6+的吸附机理进行了探讨。

α-蒎烯促进海洋真菌Aspergillus sp.产真菌毒素青霉酸的研究

采自南海软珊瑚Sarcophyton tortuosum的内生真菌Aspergillus sp.在由葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,酵母膏2 g/L,100%海水,pH为7.5的培养基(GPY)中能够产生真菌毒素青霉酸,产量为5.5 mg/L。在GPY培养基中添加200 mg/L的单萜α-蒎烯,能改变代谢产物的组成和含量,并显著促进该真菌产生青霉酸,产量可提高至29.15 mg/L。结果表明α-蒎烯在该菌的作用下主要得到系列氧化产物,并进一步发生氧化降解。单萜α-蒎烯可以作为一个有效的诱导子,引起微生物的氧化应激反应,改变膜上酶系的活性,使代谢活动得到调控,改变代谢产物组成或产量,在微生物发酵工业上有潜在应用。

几种藏香原料燃烧烟尘对青霉菌(Penicillium sp.)和曲霉菌(Aspergillus sp.)抑菌效果测定

为了解藏香原料对空气真菌皿内抑制作用,并为具有抑菌防病功效的藏香配制奠定理论基础。采用滤纸片吸附烟尘法,测定了9种藏香原料燃烧烟尘对青霉菌(Penicillium sp.)和曲霉菌(Aspergillus sp.)的皿内抑制效果。供试藏香原料对2种真菌均有不同程度的抑制效果;对青霉菌(Penicillium sp.)而言,竹黄抑菌效果最强,广香、肉蔻以及丁香次之,草红花和白寇最弱;竹黄和肉蔻对曲霉菌(Aspergillus sp.)抑菌效果最强,广香和丁香次之,白寇则最弱;竹黄、广香、肉寇以及丁香对青霉菌(Penicillium sp.)和曲霉菌(Aspergillus sp.)具有明显的皿内抑制作用。

银杏叶内生真菌Aspergillus sp．YXf3活性次生代谢产物的研究

采用多种柱层析技术,从银杏叶内生真菌Aspergillus sp.YXf3发酵液的乙酸乙酯提取物中分离得到5个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构分别为terreinol(1)、cyclo-(L-Leu-L-Trp)(2)、sphaeropsidin A(3)、sphaeropsidin B(4)和4-hydroxy-3-(3'-methyl-2'-butenyl)benzoic acid(5)。以上化合物均为首次从银杏内生真菌中分离得到。神经氨酸酶抑制剂活性测试结果表明,化合物2和4具有较强的抑制活性,其IC50分别为4.67和3.40μM。

Aspergillus sp. Li-38产脂肪酶发酵条件及催化反应的初步研究

对自行筛选的曲霉菌株Aspergillus sp.Li-38的发酵条件进行研究。通过考察不同碳源和氮源对产酶的影响,获得曲霉脂肪酶的优化摇瓶培养基成分,菜籽油1.5%(V/V),蛋白胨3%(W/V),NH4SO41%(W/V),K2HPO40.1%(W/V),MgSO4.7H2O,0.1%(W/V)。研究表明菜籽油对产酶具有明显的诱导作用,复合氮源比单一氮源更利于菌体产酶,优化后酶活可达42U/mL,与优化前相比提高了1.6倍。利用该脂肪酶催化棉籽油合成生物柴油研究表明,二步流加甲醇的反应体系其酯化率可达到59%。

南海软珊瑚共附生真菌Aspergillus sp.EGF15-0-3苯甲醛类化合物研究

本文研究了具有克服肿瘤耐药活性的软珊瑚共附生真菌Aspergillus sp.EGF 15-0-3苯甲醛类化学成分。采用硅胶柱层析、十八烷基硅烷键合硅胶层析、Sephadex LH-20层析、高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等多种方法进行分离纯化;通过核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)、质谱(mass spectrometry,MS)等现代波谱分析及物理常数对照等方法进行结构鉴定;采用MTT法对苯甲醛部位和单体化合物进行克服肿瘤耐药活性研究。从EGF15-0-3的苯甲醛部位共得到9个苯甲醛类化合物,结构依次为flavoglaucin(1)、tetrahydroauroglaucin(2)、isoaspergin(3)、isotetrahydroauro-glaucin(4)、dihydroauroglaucin(5)、isodihydroauroglaucin(6)、2-(1',5'-heptadienyl)-3,6-dihydroxy-5-(3''-methyl-2''-butenyl)benzaldehyde(7)、auro-glaucin(8)和2-(2',3-epoxy-1'-heptenyl)-6-hydroxy-5-(3''methyl-2''-butenyl)benzaldehyde(9)。体外克服肿瘤耐药活性研究表明,苯甲醛类化合物9具有较强的克服肿瘤耐药活性,可能是由于其结构2位烷基侧链与3羟基形成吡喃环所致。

海洋真菌Aspergillus sp.中的抗肿瘤成分

目的:研究一株分离自条斑紫菜丝状体上的真菌代谢产物的活性成分。方法:利用电镜观察真菌形态特征,利用MEA培养基进行大规模发酵,经硅胶层析、葡聚糖凝胶层析等各种层析手段分离化合物,通过波谱技术鉴定化合物结构,并利用MTT法测定化合物抗肿瘤活性。结果:该菌属于曲霉属,分离得到了两个化合物1和2,分别为cyclo(L-Trp-L-Phe)(1)和WIN64821(2)。MTT法测试结果表明,cyclo(L-Trp-L-Phe)和WIN64821对37株人体肿瘤细胞株具有中等细胞毒活性,其平均IC50分别为3.3和5.8μg·mL-1。结论:第一次报道这两种化合物的抗肿瘤活性。

产β-甘露聚糖酶Aspergillus sp. LQ21的分离、鉴定及发酵条件的研究

β-甘露聚糖酶是一类能够水解甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖的半纤维素酶类,广泛存在于动植物和微生物中,此酶在食品、医药、饲料、造纸、石油等方面已得到广泛应用;近年来,其作为食品和饲料添加剂方面倍受关注。对采自土壤和树皮的样品通过富集培养、平板初筛和摇瓶复筛,得到1株具产β-甘露聚糖酶能力的曲霉属菌株LQ21,结合形态特征、培养特征及18S rRNA基因序列分析,将该菌株鉴定为Aspergillussp.真菌。考察了培养时间、起始pH、培养温度、碳源和氮源对该菌株产酶的影响。初步确定了其最适产酶培养基组成:魔芋粉0.5%,蛋白胨1%,NaNO30.2%,K2HPO40.1%,KCl 0.05%,MgSO4.7H2O 0.05%,FeSO4.7H2O 0.001%;最适培养条件:初始pH4.5,温度35℃,转速200 r/min,培养60 h发酵液上清中酶活达到最高。

水母雪莲内生真菌Aspergillus sp.TPXq的次级代谢产物研究

目的研究藏药水母雪莲内生真菌Aspergillus sp.TPXq的次级代谢产物。方法菌种采用震荡培养箱扩大培养,经反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、开放ODS柱色谱、高效液相色谱等方法进行分离纯化;并根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定结构。结果从来自藏药水母雪莲的一株内生真菌Aspergillus sp.TPXq的培养液中分离得到8个环二肽和1个生物碱类化合物。分别鉴定为3-异丁基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅰ）、3-异戊基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅱ）、3-仲丁基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅲ）、3-苄基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅳ）、3-苄基-6-对羟基苄基-2,5二酮（Ⅴ）、3,6-二甲基哌嗪-2,5-二酮（Ⅵ）、3-异丁基-6-异丙基哌嗪-2,5-二酮（Ⅶ）、3-异丁基-6-苄基哌嗪-2,5-二酮（Ⅷ）、Chaetominine（Ⅸ）。结论其中化合物Ⅳ~Ⅷ为曲霉属Aspergillus.sp真菌中首次分离得到。细胞毒测试结果表明,以上化合物Ⅰ~Ⅷ对于A549和MCF-7肿瘤细胞均显示弱细胞毒活性（〉50μg/mL）,化合物Ⅸ对A549和MCF-7肿瘤细胞均具有显著的细胞毒活性,IC50值分别为0.18μg/mL和0.89μg/mL。

1株曲霉属真菌(Aspergillus sp.)固体发酵对金银花及叶的活性成分影响

木犀草苷具有很高的应用价值。为了提高金银花中木犀草苷的含量,利用从野生冬虫夏草周围环境中分离的1株曲霉属真菌GL625对金银花进行固体发酵,并分析测定金银花中主要活性成分木犀草苷等的变化。以大米-金银花、大米-金银花叶为底物进行固体发酵15 d后,将发酵产物用95%乙醇超声辅助提取。采用高效液相色谱(HPLC)分析金银花发酵前后指纹图谱差异性与活性成分的含量变化,通过双层平板打孔法比较金银花发酵前后95%乙醇提取物的抑菌活性差异。结果表明,金银花固体发酵后绿原酸和芦丁分别降低了20.14、1.73 mg/g,而木犀草苷发酵后增加了4.76 mg/g;物质a、b的含量也显著上升,在HPLC图中Rt=17.5 min后吸收峰明显丰富;金银花叶在发酵后绿原酸、芦丁同样分别降低了11.74、0.99 mg/g,而木犀草苷增加了5.07 mg/g;并且金银花发酵产物的95%乙醇提取物抑菌活性明显强于未发酵以及对照组。结果说明,GL625是一株能转化金银花提高木犀草苷的曲霉属真菌,且物质a、b含量的显著上升增强了抑菌活性。

海藻内生真菌Aspergillus sp.Jcma1F17化合物研究

通过硅胶和半制备液相方法从真菌Aspergillus sp.Jcma1F17发酵液中共分离得到6个化合物,经过质谱及核磁共振波谱鉴定,化合物分别为cis-4-hydroxymellein(1)、trans-4-hydroxymellein(2)、(R)-mellein(3)、penicillic acid(4)、aspyrone(5)和asperlactone(6)。化合物3对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑制作用,IC50为57.5μg/m L,其他化合物IC50均大于100μg/m L。

Aspergillus sp.1-13菌株β-木糖苷酶的提纯和部分性质

通过80 %饱和度硫酸铵沉淀、DEAE -SephadexA -50离子交换柱层析和SephadexG -100凝胶过滤柱层析等方法从Aspergillussp .1 -13菌株的白酒丢糟固体培养物的抽提液中分离纯化到一种 β-木糖苷酶。通过SDS -PAGE分析测定其分子量为110.9KD。该酶最适反应pH值为3.2～3.8之间,最适反应温度为70℃。该酶具有较宽的 pH稳定性 ,并且在60℃以下较稳定。

脂肪酶产生菌Aspergillus sp. FS132产酶条件的初步优化及其18S rRNA基因序列的比较分析

从新疆火焰山口土样中分离的一株脂肪酶产生菌FS132,菌落形态表明为霉菌。对其产酶条件的初步优化表明,产酶的最适培养时间为45h,培养基最适初始pH 7.0,最适培养温度36℃,最适摇瓶空气量25mL/250mL锥形瓶。为进一步鉴定该菌株,克隆测定了该菌18S rRNA基因序列。并对其进行系统进化树分析,结果表明该菌与已报道的Aspergillus tamarii具有最紧密亲缘关系。