盐碱胁迫下扁吻鱼幼鱼耐受性分析

【目的】研究塔里木河水系特有鱼类适应生物学,评估扁吻鱼幼鱼机体抗逆性能,分析其濒危机制,为扁吻鱼的苗种培育和驯化养殖提供参考。【方法】基于实验室生态学方法,测定扁吻鱼幼鱼盐碱耐受性及进行行为学分析。【结果】在pH值(7.78±0.09)、温度(21±1)℃条件下,扁吻鱼对照组幼鱼无明显应激反应,活动平缓,呼吸正常,对外界刺激(光、声音等)有正常反应,未出现死亡个体。实验组幼鱼初始接触实验水体应激过强,随盐碱浓度梯度升高,游动急躁,挣扎撺动,继而死亡,碱度浓度梯度下的行为特征与盐度实验类似。扁吻鱼幼鱼24、48、72、96 h的氯化钠(NaCl)盐度半致死浓度(LC_(50))分别为14.3021、13.7214、13.6144、13.5332 g/L,安全浓度(SC)为3.7891 g/L;碳酸氢钠(NaHCO_(3))碱度半致死浓度(LC_(50))分别为51.8561、39.5025、32.9515、31.7779 mmol/L,安全浓度(SC)为11.8508 mmol/L。【结论】盐碱胁迫下扁吻鱼幼鱼的安全浓度(SC)分别为3.7891 g/L、11.8508 mmol/L,与曾栖息水体环境理化指标相比,扁吻鱼受碱度较大胁迫,栖息水体盐碱的持续升高极大影响其生态位和栖息生境的选择致其濒危。

温度和水流对扁吻鱼胚胎发育的影响

探讨了温度及水流对扁吻鱼（Aspiorhynchus laticeps）胚胎发育的影响。结果表明：在水温15～25℃条件下，扁吻鱼胚胎发育均可以完成，并且温度x发育时间y呈负相关关系，y=667．72e^-0.0996x，R^2=0．9829；与积温的父系为y=-91．017x＋3662．3，R^2=0．7996。胚胎发育的适宜水温为15～23℃，最适水温为15～21℃。孵化期间辅助于一定的充气条件可缩短出苗时间、提高出苗率，降低畸形率。

扁吻鱼胚胎及仔鱼发育的形态学观察

2005年4月底在人工繁殖条件下,对扁吻鱼Aspiorhynchus laticeps精、卵的形态,胚胎和仔鱼发育进行观察。结果表明：扁吻鱼的成熟卵呈浅灰色,微黏性,成熟卵卵径为1.80-1.85 mm,受精后卵膜吸水膨胀,卵膜直径为3.30-3.45 mm。受精卵在水温21-22℃下,历经1 h40 min胚盘突起;2 h10 min出现第一次卵裂;历经7 h 15 min胚胎发育到多细胞期;12 h 4 min发育到囊胚期;16 h 36 min为原肠早期;30h 20 min发育到神经胚期;历经91 h 37 min器官形成,心脏搏动,胚体摆动;103 h后仔鱼孵出,全长为7.5 mm。孵出后的第6 d,全长为11.6 mm,卵黄囊基本吸收完毕,开口索食。孵出26 d后,全长为21.00mm,奇鳍、偶鳍发育完成,肌肉增生,但体尚未披鳞。观察发现：扁吻鱼受精卵不仅具有黏性,而且卵膜吸水膨胀,形成的膜径1.8倍于卵径,富有弹性;受精卵发育后期在微流水中能悬浮水中片刻,后逐渐沉水,因此加强水中氧量的供给有助于其发育;受精卵的胚盘隆起至第6次卵裂的时距大大快于青海湖裸鲤,且眼基和体节、嗅囊和尾芽同时发生;孵出前的胚体已超越卵膜内经,尾端超出头部的眼后。

扁吻鱼的生物学研究

2003～2005年对扁吻鱼的生物学进行调查研究,首次系统地获得第一手的扁吻鱼生物学资料。发现扁吻鱼依靠其上、下颌骨上附生着的特异“拟小齿”(Pseud-denti- cle),捕捉他种鱼类为食；泄殖孔和肛门包藏在“外腔”内,不外露；扁吻鱼的性成熟需6～7年,而扁吻鱼性腺发育的再成熟需两周年以上,绝对怀卵量平均为277 772±128 823粒,相对怀卵量平均为44．6±18．3粒/g；成熟卵为淡黄色,平均卵径为1．46±0．08mm,同步成熟,一次产卵。每年4月下旬至5月上旬正值河水上涨之始,即为扁吻鱼的产卵繁殖期。本扎提河—克孜尔水库中的扁吻鱼捕捞群体由2000年的平均体重2．67kg至2005年平均体重增达7．09kg,个体老龄化,资源严重衰退。并对扁吻鱼的生态环境进行调查。文章最后对扁吻鱼的濒危原因进行深入探讨,以及提出建立扁吻鱼自然保护区势在必行。

扁吻鱼鱼苗寄生虫病防治试验

2005年4～7月,在室内集约化培育扁吻鱼鱼苗期间,鱼苗相继受到多种寄生虫的侵袭。通过用甲醛、硫酸铜、氯化钠和硝酸亚汞等药物治疗。结果表明：水温16～19℃时硝酸亚汞治疗小瓜虫病的安全有效浓度为0.4～0.8 ppm。水温22～26℃时,为0.05 ppm；40 ppm-60 ppm福尔马林溶液可有效控制鞭毛虫和纤毛虫病；0.1 ppm硫酸铜10～15分钟有效杀灭纤毛虫。硫酸铜与硫酸亚铁合剂、氯化钠易引起鱼苗产生大量粘液而死亡。

扁吻鱼和塔里木裂腹鱼线粒体COI基因片段的比较研究

对扁吻鱼(Aspiorhynchus laticeps)和塔里木裂腹鱼(Schizothoraxbiddulphi)细胞色素c氧化酶亚基(COI)基因片段进行扩增。通过序列测定得到624bp的基因片段,无碱基的插入和缺失,A、T、G、C碱基中G含量最低,A+T含量高于G+C含量,与其它鱼类COI基因片段研究结果相一致。2个种间共检测到38处核苷酸替换,其中35处碱基转换,3处碱基颠换,蛋白质编码基因上的核苷酸替代主要是密码子第3位点上的同义替换。在编码的208个氨基酸中,仅发生2处氨基酸替代,替代率为0.96%。采用Kimura-2法计算种间平均遗传距离为0.06,以鲤作外群构建NJ系统树,扁吻鱼和塔里木裂腹鱼亲缘关系较近,而与新疆裸重唇鱼、斑重唇鱼亲缘关系较远。

扁吻鱼成鱼的采捕与运输

本文报道了扁吻鱼在采捕、储运过程中出现的问题,在经过反复研究后,自行设计、制作了“水道活鱼储运变形布箱”和“活口筒状抄袋”等工具,成活率由过去不足5.00%,提高到95.83%。

扁吻鱼人工繁殖技术研究

2006～2007年,利用人工驯化养殖3年以上的扁吻鱼(Aspiorhynchus laticeps)亲鱼,通过人工催产、流水刺激、人工采卵等方法,2年共采卵99万粒,授精率83.3%,孵化率67.8%,室内人工孵化出苗56万尾,初孵仔鱼全长0.7cm,水温17～19℃时,约6d后开口摄食,开口饵料为轮虫或卤虫无节幼体。

扁吻鱼微卫星的筛选及群体多样性分析

本文采用磁珠富集法筛选新疆扁吻鱼（Aspiorhynchus laticeps Day）的微卫星分子标记,获得13个位点,同时随机抽取1000对鲤引物检测扁吻鱼同源位点的多态性,获得具多态性位点18对。应用31对引物对扁吻鱼与塔里木裂腹鱼（Schizthorax biddulphi）进行遗传多样性分析,共检测到110个等位基因,每个位点的等位基因数为2~6个,扁吻鱼群体平均多态信息含量为0.5353,平均观测杂合度为0.5306,平均期望杂合度为0.6057。表明扁吻鱼群体多态性较高,遗传多样性处于中等偏上水平。群体间遗传距离为0.4763,遗传相似系数为0.6211,表明两个群体为同科不同属的群体。

扁吻鱼微卫星分子标记的筛选及特征分析

通过磁珠富集法筛选扁吻鱼的微卫星分子标记。利用限制性内切酶Sau3AI对扁吻鱼的基因组DNA进行酶切,并选取片段大小在250～750 bp间的片段,利用PCR技术进行全基因组扩增,采用生物素标记的(CA)8探针对微卫星片段进行富集。富集后的片段与T载体连接后利用DH5α大肠杆菌进行转化,然后以Sau3AI为引物对菌落进行PCR扩增,扩增后选片段大小符合条件的菌落挑取至测序板,进行测序。结果表明:PCR筛选共获得563个阳性克隆,其中测序192个阳性克隆后发现有53个微卫星序列;序列分析表明,完美型占67.92%,非完美型为22.64%;混合性标记占9.43%。根据测序结果设计微卫星引物24对,经PCR扩增筛选,琼脂糖凝胶电泳结果显示,其中22对引物可扩增出清晰的条带,其中具有多态性的13对。利用13对多态性引物对扁吻鱼野生群体进行扩增,PCR扩增结果显示,等位基因数为3～6,多态信息含量(PIC)为0.625 3,12个位点处于高度多态水平(PIC>0.5)。

几种孵化器对扁吻鱼孵化效果的比较研究

2006年～2008年进行扁吻鱼人工繁殖研究期间,比较了不同孵化方法的孵化效果。结果表明:孵化盘和网箱孵化的静水孵化效果最差,孵化率不足70%;桶式孵化器孵化率在63%～90%,随孵化密度的增大,孵化率明显下降;"新水孵化器"的孵化率在95%以上,并有效结合了水流和水温等问题,该孵化方法可为裂腹鱼类和其他名优鱼类的孵化提供借鉴,具有可控温、用水量少、管理方便、出苗整齐,制作简易、成本低等优点。

扁吻鱼的栖息地及其群落保护生物学研究

2003年以来,对扁吻鱼Aspiorhynchus laticeps(Day)唯一栖息地的生物饵料及鱼类群落环境进行了初步研究。结果显示,克孜尔水库有浮游植物7门、34种(属),平均密度145.7×104个/L,平均生物量1.225mg/L,硅藻密度及生物量均占优势;浮游动物35种(属),平均密度958.6个/L,原生动物占优势;平均生物量1.449mg/L,枝角类和桡足类占优势;底栖动物1种(属),平均密度9.1个/m2,平均生物量0.08g/m2;水生植物2种(属)。栖息地分布鱼类隶属2目、3科、19种,土著种10种,外来种9种;其中鲤科15种,占78.9%,鳅科3种,占15.8%,鰕虎鱼科1种,占5.3%。探讨了扁吻鱼所面临的生态环境问题。

濒危物种─—新疆大头鱼的生态和资源调查与保护对策的研究

１９９２年起对濒危物种──新疆大头鱼的生态进行了调查。调查的水域有：叶尔羌河、阿克苏河及其上游托什干河和库马里克河、塔里木河、博斯腾湖及上游开都河和天鹅湖、大西海子水库、渭干河水系及克孜尔水库和车尔臣河及新发现的喀依拉克湖等水域，行程１００００多ｋｍ。初步查清了新疆大头鱼的分布范围、生态要求及其数量演变。新疆大头鱼分布的海拔高程为８００～１２００ｍ之间，最高不超越１５００ｍ。栖息于水温较高的静水或缓流的湖泊中，仅为了产卵进行短距离的溯河徊游。现存有新疆大头鱼的水域仅为阿克苏河下游的艾西曼湖群、车尔臣河的喀依拉克湖和渭干河水系的克孜尔水库，并在库区下的河道中发现幼体。目前新疆大头鱼物种已极度濒危。新疆大头鱼系裂腹鱼亚科中生长快、个体大、性成熟年龄晚、繁殖力低的大型食肉性鱼类。运用Ｖｏｎ．Ｂｅｒｔａｌａｎｆｆｙ的理论生长方程求得的生长参数：－Ｋ＝０．０６３；ｔｏ＝０．２７５；Ｌ＝１１８．２ｃｍ；Ｗ＝２５８８４ｇ；ｔｉｐ＝１７．１龄；ｔｍａｘ＝４７．２龄。与历史上捕获的最大个体基本一致。并对新疆大头鱼的食性、繁殖、及其生态环境进行了初步研究。新疆大头鱼濒危的原因：１、新疆大头鱼生物学特性的本身决定它对环境要求苛刻?

塔里木盆地鱼类生物地理学初步解析

塔里木盆地与青藏高原地理位置邻近,但地形地貌、气候水文差别显著,而两地的鱼类区系组成却均以裂腹鱼和高原鳅为主。本文依据现代生物地理学研究方法,以裂腹鱼和高原鳅的起源与演化为线索,结合塔里木盆地的地质、气候变迁,探究塔里木盆地鱼类空间分布格局形成原因及过程,研究塔里木盆地与青藏高原两地间鱼类的关系。结果显示:中新世晚期至上新世末塔里木盆地出现的从外围山地向沙漠腹地流向的水文网雏形,使不同进化水平的裂腹鱼和高原鳅在以后不同的地质时期陆续随地表径流从青藏高原(昆仑山)、天山等塔里木盆地周边山地进入该盆地成为可能。扁吻鱼Aspiorhynchus laticeps(Day)、塔里木裂腹鱼Schizothorax(Racoma)biddulphi Günrher、叶尔羌高原鳅Triplophysa(Hedinichthys)yarkandensis yarkandensis(Day)、隆额高原鳅T.(T.)bombifrons(Herzenstein)和长身高原鳅T(Triplophysa)tenuis(Day)5种鱼类可能是裂腹鱼类和高原鳅类某些较为原始的类群在晚中新世-早更新世进入塔里木盆地,在地理隔离下,趋异进化适应辐射形成的物种。宽口裂腹鱼S.(Schizothorax)eurystomus(Kessler)、扁嘴裂腹鱼S.(R.)esocinus Heckel、厚唇裂腹鱼S.(R.)irregularis Day、重唇裂腹鱼S.(R.)barbatus Mcclelland、斑重唇鱼Diptychus maculatus steindachner、新疆裸重唇鱼Gymnodiptychus dybowskii(Kessler)、斯氏高原鳅T.(T.)stoliczkae(Steindachuner)7种鱼类可能发生在塔里木盆地周边的山地及青藏高原,第四纪陆续进入塔里木盆地。进入塔里木盆地的鱼类在环境的选择压力下、种间和种内的竞争中,受多重因子的共同作用,逐步形成近现代的区系及空间分布格局。塔里木盆地和青藏高原两地主要的鱼类起源的种类和时间基本一致,演化发生的地区地形、气候显著不同,形成了区系结构相似、种类组成各具地域性的特点。近50年来,受灌溉引水、筑坝发电等人为影响,塔里木盆地鱼类资源量迅速衰减,分布范围大幅缩小。

扁吻鱼人工繁殖试验

在扁吻鱼极度濒危,采捕、储运极其恶劣的环境中,利用人力拉行的三层流刺网和自行设计、制作的“水道活鱼储运变形布箱”和“活口筒形布袋”在河道中采捕扁吻鱼成鱼112尾,成活76尾,加上原有成鱼,现有扁吻鱼成鱼92尾。扁吻鱼的性腺发育的再成熟需两周年以上,经过三年的精心饲养、已有10尾雌体的性腺发育到Ⅳ期初和有10尾以上的成熟雄鱼,为2006年生产性人工繁殖打下物质基础。2005年4月25日采捕到成熟亲鱼,经过人工采卵受精,获得约5万粒受精卵,受精率为91.47％；孵化率为80．10％,出苗36 779尾。由于遭到小瓜虫等寄生虫的侵袭,饲养到5月21日的成活率为43．64％,培育到10月25日,平均体重为6．5g、成活率为40．80％。

茜素红S对扁吻鱼幼鱼的急性毒性试验

为了解茜素红S对扁吻鱼(Aspiorhynchus laticeps)幼鱼的急性毒性,在水温10℃下,采用半静态法对体重范围(5.8±0.6)g的扁吻鱼幼鱼进行了试验。结果表明,茜素红S浓度为400 mg/L时,96 h死亡率为0;当茜素红浓度为900 mg/L时,72 h全部死亡;茜素红S对扁吻鱼幼鱼的24、48、72、96 h的半致死浓度分别为788、718、651、618 mg/L,安全质量浓度为179 mg/L。说明茜素红S对扁吻鱼幼鱼的毒性为低毒性,适合其标记放流。实际工作中,建议选用浓度179～400 mg/L作标记,在保证存活率的基础上,取得较好的标记效果。

扁吻鱼胚胎发育及仔稚鱼形态与生长观察研究

文章采用干法受精获取受精卵的方法,对扁吻鱼(Aspiorhynchus laticeps)胚胎发育和仔稚鱼的形态变化进行观察。研究结果表明,扁吻鱼卵为沉性卵,卵细胞呈青灰色、微黏性。该次孵化共获取成熟卵21.45×104粒,受精率88.95%,孵化率93.27%。扁吻鱼成熟卵卵径(2.46±0.13)mm,受精卵吸水后膨胀,卵径(3.42±0.15)mm。根据胚胎发育的外部形态和典型特征将其分为受精卵、胚盘形成、卵裂、囊胚、原肠、神经胚、器官分化和孵化共8个阶段,整个胚胎发育耗时115.72 h,所需积温3765.42℃·h。初孵仔鱼全长(7.58±0.31)mm,从初孵到卵黄吸收完全历时9 d,全长特定生长率为(3.63±0.68)%。仔鱼后期历时36 d,全长特定生长率为(3.51±2.10)%。稚鱼期历时63 d,全长特定生长率为(1.32±0.17)%,与仔鱼前期和仔鱼后期差异显著(P<0.05)。1年后幼鱼全长(15.71±0.89)cm,体质量(28.29±6.15)g,体色和体型接近成鱼。

扁吻鱼烂鳃病病原分离鉴定及药敏试验

研究从患烂鳃病的扁吻鱼及其水样中分离到5株优势菌株,观察优势菌株的菌落形态及生长曲线,提取菌株16S rDNA进行分子生物学鉴定,并采用水产生产实践中常用抗生素对菌株进行药敏试验,同时探讨了培养基、培养时间、培养温度3个因素对菌株药敏性的影响。结果表明:编号33、37、38的菌株属于柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.),编号35、36的菌株属于气单孢菌属(Aeromonas sp.);生长曲线测定表明,5株细菌用MH培养基在18℃下培养时,0~18 h均处于适应期,33、37和38号菌株在培养28~32 h进入衰亡期,35和36号菌株在培养22~26 h进入衰亡期;综合培养基、培养时间、培养温度3个因素,最终判定,对土霉素敏感的菌株为33和38号,对恩诺沙星敏感的菌株为35和38号,对氟苯尼考敏感的菌株为33、35、36和38号,对多西环素敏感得菌株为33和38号,5个菌株对新霉素和甲氧苄啶均不敏感;培养时间对药敏试验结果的影响较小,而培养基和培养温度对药敏试验结果的影响较大。

新疆扁吻鱼的胚胎发育和仔鱼发育的初步观察

2006年4月首次利用人工驯化成熟的扁吻鱼亲鱼进行人工繁殖试验，并获得成功。试验期间观察了扁吻鱼的胚胎发育和仔鱼发育的形态特征及发育特点。该鱼的成熟卵呈圆球形，青灰色，沉性和具微黏性。卵径1．5—1．7mm，吸水膨胀后卵径达2．6—2．8mm。在水温幅度18℃-21℃时，受精卵1h40min形成胚盘,2h进入卵裂期，12h进入囊胚期，21h50min为原肠中期，30h进入神经胚期，44h17min肌肉开始收缩，64h后心跳开始，多数受精卵经95h后出膜。出膜仔鱼长7—8mm。第6d仔鱼全长约10mm，卵黄囊基本被吸收，鳔充气，鱼苗开始平游，并开口摄食。在水温幅度13℃-19℃时，受精卵经120-130h后出膜。

7种常用药物对扁吻鱼幼鱼的急性毒性试验

在常温静水条件下,以1月龄的扁吻鱼幼鱼为实验对象,进行高锰酸钾、硫酸铜、甲醛、敌百虫、溴氯海因、聚维酮碘、氯化钠7种药物的急性毒性试验,计算出半致死浓度和安全浓度。结果表明,扁吻鱼幼鱼对这7种药物的敏感性:敌百虫>硫酸铜>高锰酸钾>溴氯海因>甲醛>聚维酮碘>氯化钠,安全浓度(特伦堡公式)分别为0.043 mg/L,0.376 mg/L,0.436 mg/L,1.64 mg/L,14.2 mg/L,18.8 mg/L和3 480 mg/L。