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Murine calcium-activated chloride channel family member 3 induces asthmatic airway inflammation independently of allergen exposure
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作者 MEI Li HE Li +5 位作者 WU Si-si ZHANG Bo XUYong-jian ZHANG Zhen-xiang ZHAO Jian-ping ZHANG Hui-lan 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2013年第17期3283-3288,共6页
Background Expression of murine calcium-activated chloride channel family member 3 (mCLCA3) has been reported to be increased in the airway epithelium of asthmatic mice challenged with ovalbumin (OVA). However, it... Background Expression of murine calcium-activated chloride channel family member 3 (mCLCA3) has been reported to be increased in the airway epithelium of asthmatic mice challenged with ovalbumin (OVA). However, its role in asthmatic airway inflammation under no OVA exposure has not yet been clarified. Methods mCLCA3 plasmids were transfected into the airways of normal BALB/c mice. mCLCA3 expression and airway inflammation in mouse lung tissue were evaluated. Cell differentials and cytokines in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were analyzed. The expression of mCLCA3 protein and mucus protein mucin-5 subtype AC (MUC5AC) were analyzed by Western blotting. The mRNA levels of mCLCA3, MUC5AC and interleukin-13 (IL-13) were determined quantitatively. Results mCLCA3 expression was not detected in the control group while strong immunoreactivity was detected in the OVA and mCLCA3 plasmid groups, and was strictly localized to the airway epithelium. The numbers of inflammatory cells in lung tissue and BALF were increased in both mCLCA3 plasmid and OVA groups. The protein and mRNA levels of mCLCA3 and MUC5AC in the lung tissue were significantly increased in the mCLCA3 plasmid and OVA groups compared to the control group. The level of IL-13, but not IL-4, IL-5, IFN-y, CCL2, CCL5 or CCL11, was significantly increased compared with control group in BALF in the mCLCA3 plasmid and OVA groups. The level of IL-13 in the BALF in the mCLCA3 plasmid group was much higher than that in the OVA group (P 〈0.05). The level of mCLCA3 mRNA in lung tissue was positively correlated with the levels of MUC5AC mRNA in lung tissue, IL-13 mRNA in lung tissue, the number of eosinophils in BALF, and the content of IL-13 protein in BALE The level of IL-13 mRNA in lung tissue was positively correlated with the number of eosinophils in BALF and the level of MUC5AC mRNA in lung tissue. Conclusion These findings suggest that increased expression of a single-gene, mCLCA3, could simulate an asthma attack, and its mechanism may involve mCLCA3 overexpression up-regulating IL-13 expression. 展开更多
关键词 murine calcium-activated chloride channel family member 3 asthma INFLAMMATION
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非小细胞肺癌组织中CLCA4的表达情况及与病理和预后的关系
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作者 吴媛媛 刘科 +1 位作者 齐艳丽 童小华 《国际医药卫生导报》 2024年第6期903-907,共5页
目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中钙激活的氯离子通道A4(CLCA4)的表达情况及其与病理和预后的关系。方法前瞻性选取2019年4月至2022年4月商洛市中心医院收治的106例NSCLC患者进行研究,其中男性64例,女性42例,年龄(56.53±7.54)... 目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中钙激活的氯离子通道A4(CLCA4)的表达情况及其与病理和预后的关系。方法前瞻性选取2019年4月至2022年4月商洛市中心医院收治的106例NSCLC患者进行研究,其中男性64例,女性42例,年龄(56.53±7.54)岁。均行NSCLC根治性切除术,术后采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中CLCA4的阳性表达情况,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织及癌旁正常组织中CLCA4 mRNA的相对表达量。根据患者1年随访结局分为无病生存(DFS)组(48例)和非DFS组(58例)。采用t检验和χ^(2)检验对数据进行统计学分析,采用多因素logistic逐步回归模型、生存曲线Kaplan-Meier分析与对数秩检验对患者预后的影响因素进行分析,绘制受试者操作特征曲线(ROC)分析CLCA4与病理和预后的关系。结果癌组织中CLCA4阳性率[45.28%(48/106)]及CLCA4 mRNA的相对表达量[(0.61±0.14)]均低于癌旁正常组织[66.98%(71/106)、(1.07±0.23)](χ^(2)=10.134,P<0.001;t=17.589,P<0.001)。Ⅱ期患者的CLCA4 mRNA表达量高于ⅢA期患者[(0.69±0.15)比(0.61±0.13)](t=2.914,P=0.004)。非DFS组患者中ⅢA期的占比高于DFS组[82.76%(48/58)比33.33%(16/48)](χ^(2)=26.819,P<0.001),CLCA4 mRNA表达量低于DFS组[(0.54±0.13)比(0.69±0.17)](t=5.514,P<0.001)。TNM分期(OR=4.031,95%CI 1.429~11.364,P=0.003)、CLCA4 mRNA表达量(OR=0.310,95%CI 0.109~0.873,P=0.003)是NSCLC患者DFS的影响因素。CLCA4 mRNA表达预测NSCLC患者DFS的灵敏度为0.802(95%CI 0.715~0.893)、特异度为0.809(95%CI 0.721~0.904)、曲线下面积(AUC)为0.857(95%CI 0.782~0.935)。不同CLCA4 mRNA表达组患者的生存曲线比较,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=6.006,P=0.014)。结论NSCLC患者癌组织中CLCA4表达被抑制,且与病理进展及预后有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 钙激活的氯离子通道A4 病理 预后
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尼氟灭酸抑制哮喘小鼠气道黏液高分泌 被引量:2
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作者 宋立强 李妍 +2 位作者 戚好文 王吉村 张健 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第7期611-614,共4页
目的观察小鼠钙激活Cl-通道Ⅲ型(mCLCA3)阻断剂尼氟灭酸(NFA),对哮喘小鼠气道黏液高分泌的抑制作用。方法将BABL/c小鼠随机分为哮喘组、吸入NFA预防组和正常对照组。AB-PAS特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量及黏液分泌状况。RT-... 目的观察小鼠钙激活Cl-通道Ⅲ型(mCLCA3)阻断剂尼氟灭酸(NFA),对哮喘小鼠气道黏液高分泌的抑制作用。方法将BABL/c小鼠随机分为哮喘组、吸入NFA预防组和正常对照组。AB-PAS特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量及黏液分泌状况。RT-PCR法检测各组肺组织中黏蛋白MUC5AC mRNA和mCLCA3 mRNA水平。结果正常对照组小支气管只有少量散在分布的杯状细胞,管腔干净;而哮喘组出现大量簇状分布的杯状细胞,胞质内富含着色颗粒,管腔具有着色黏液;NFA预防组的杯状细胞数量与正常对照组相近。哮喘组的MUC5AC及mCLCA3 mRNA水平均显著高于正常对照组、NFA预防组;NFA预防组的MUC5AC mRNA水平与正常对照组接近,而mCLCA3 mRNA水平稍高于正常对照组。结论NFA能有效抑制哮喘小鼠气道杯状细胞数量的增加及黏蛋白的合成,这一效果是通过阻断mCLCA3活性和降低其表达水平来实现的。 展开更多
关键词 哮喘 尼氟灭酸 钙激活Cl^-通道 杯状细胞
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TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究 被引量:6
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作者 郝峰 白雪松 +6 位作者 鞠晓红 方芳 藏雨轩 朱杭飞 向国艳 张雲乔 袁忠海 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1633-1639,共7页
目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效... 目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素(blasticidin)进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFPH148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。 展开更多
关键词 跨膜蛋白16A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞
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哮喘气道上皮杯状细胞合成GM-CSF及其调控机制的研究 被引量:1
5
作者 宋立强 戚好文 +2 位作者 李妍 王吉村 张健 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期697-699,共3页
目的 观察哮喘小鼠气道上皮杯状细胞合成粒细胞 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)的能力 ,探讨钙激活Cl-通道(CLCA)在合成中的调控作用。方法 取成年雄性BALB/c小鼠 ,采用卵蛋白致敏法制备哮喘模型。AB PAS特染法检测哮喘小鼠小支气管... 目的 观察哮喘小鼠气道上皮杯状细胞合成粒细胞 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)的能力 ,探讨钙激活Cl-通道(CLCA)在合成中的调控作用。方法 取成年雄性BALB/c小鼠 ,采用卵蛋白致敏法制备哮喘模型。AB PAS特染法检测哮喘小鼠小支气管杯状细胞的分布 ;同一解剖部位采用免疫组化染色法检测GM CSF的表达。体外培养人气道黏液上皮细胞系NCI H2 92 ,采用含人hCLCA1的重组质粒pIRES2 EGFP/hCLCA1转染该细胞。筛选到稳定表达hCLCA1的细胞后 ,免疫组化法及RT PCR法检测该细胞GM CSF的表达、转录水平。设非转染细胞和CLCA阻断剂NFA干预的转染细胞为两个对照组。结果 哮喘小鼠气道杯状细胞GM CSF免疫组化染色为阳性。转染hCLCA1细胞的GM CSF表达与转录水平明显高于两个对照组 ;NFA能抑制转染细胞GM CSF的表达和转录。结论 哮喘气道上皮杯状细胞能合成GM CSF ,特定CLCA表达升高是促进GM CSF合成的机制之一。 展开更多
关键词 哮喘 气道 杯状细胞 钙激活Cl^-通道
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钙激活Cl-通道基因疫苗对哮喘小鼠气道高反应性的预防作用 被引量:1
6
作者 宋立强 李妍 +2 位作者 戚好文 王吉村 张乐宁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1735-1738,共4页
目的:探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道高反应性(AHR)的影响。方法:构建重组真核表达载体pSecTag-2A/hCLCA1,将其作为DNA疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠(每2周1次),并采用间接ELISA法检测血清抗体。卵蛋白致敏法复制接种小鼠的哮喘模型。引... 目的:探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道高反应性(AHR)的影响。方法:构建重组真核表达载体pSecTag-2A/hCLCA1,将其作为DNA疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠(每2周1次),并采用间接ELISA法检测血清抗体。卵蛋白致敏法复制接种小鼠的哮喘模型。引喘5d后,测定小鼠气道压力峰值-时间指数(APTI)和离体气管环收缩最大张力,并计数肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞的数量。设接种空载体pSecTag-2A对照组、生理盐水组和正常小鼠对照组。结果:间接ELISA法证实疫苗接种3次后,小鼠产生能结合mCLCA3胞外肽段的血清抗体,其滴度为1∶800-1∶1000。疫苗组、空质粒组和生理盐水组的APTI、气管环收缩张力和BALF中嗜酸性粒细胞含量均明显高于正常小鼠(P<0.01);但疫苗组的这些指标显著低于空载体组(P<0.01)。空载体组与生理盐水组结果相似。结论:人源hCLCA1基因疫苗能诱导小鼠产生结合自身mCLCA3的交叉抗体,并因此阻断了上皮对哮喘AHR的促进作用,从而在一定程度上抑制了哮喘AHR的发生。 展开更多
关键词 哮喘 气道高反应件 疫苗 DNA 氯化物通道 钙激活
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钙激活Cl^-通道阻断剂对哮喘气道黏液高分泌的抑制研究 被引量:1
7
作者 胡俊鸿 宋立强 +2 位作者 段炜 彭国华 田耘 《武警医学》 CAS 2007年第4期253-256,F0003,共5页
目的观察小鼠钙激活Cl-通道阻断剂尼氟灭酸(Niflumic acid,NFA)对哮喘小鼠气道黏液高分泌的抑制作用。方法将BABL/c小鼠随机分为哮喘组、吸入NFA预防组和正常对照组。AB-PAS特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量及黏液分泌状况。RT... 目的观察小鼠钙激活Cl-通道阻断剂尼氟灭酸(Niflumic acid,NFA)对哮喘小鼠气道黏液高分泌的抑制作用。方法将BABL/c小鼠随机分为哮喘组、吸入NFA预防组和正常对照组。AB-PAS特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量及黏液分泌状况。RT-PCR法检测各组肺组织中黏蛋白MUC5AC mRNA和mClCA3 mRNA水平。结果正常对照组小支气管只有少量散在分布的杯状细胞,管腔干净;而哮喘组出现大量簇状分布的杯状细胞,胞质内富含着色颗粒,管腔具有着色黏液;NFA预防组的杯状细胞数量与正常对照组相近。哮喘组的MUC5AC及mClCA3 mRNA水平均显著高于正常对照组;NFA预防组的MUC5AC mRNA水平与正常对照组接近,而mClCA3 mRNA水平稍高于正常对照组。结论NFA能有效抑制哮喘小鼠气道杯状细胞数量的增加及黏蛋白的合成,这一效果是通过阻断mCLCA3活性和降低其表达水平来实现的。 展开更多
关键词 哮喘 钙激活Cl^-通道阻断剂 杯状细胞
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小鼠气道杯状细胞钙激活氯离子通道胞外段基因的克隆及表达
8
作者 宋立强 李妍 +1 位作者 戚好文 王吉村 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期340-343,共4页
目的 :克隆并表达小鼠气道杯状细胞的特定钙激活Cl 通道(mCLCA3)。方法 :根据GenBank(No.NM 0 174 74 )的信息 ,设计针对mCLCA3的 3个胞外段基因的引物。以重组质粒pcD NA3.1(- ) /mCLCA3为模板 ,PCR法扩增 3个胞外段的基因。将N端和C... 目的 :克隆并表达小鼠气道杯状细胞的特定钙激活Cl 通道(mCLCA3)。方法 :根据GenBank(No.NM 0 174 74 )的信息 ,设计针对mCLCA3的 3个胞外段基因的引物。以重组质粒pcD NA3.1(- ) /mCLCA3为模板 ,PCR法扩增 3个胞外段的基因。将N端和C端胞外段基因分别亚克隆到原核表达载体pRSET A中 ,中间胞外段基因则亚克隆入原核表达载体pGEX T1中。分别转化大肠杆菌BL2 1(DE3)感受态细胞 ,使用IPTG诱导表达。结果 :酶切鉴定和序列分析表明 ,克隆的mCLCA3的 3个胞外段基因序列与GenBank中登录的完全一致。将这些基因亚克隆到相应表达载体 ,经IPTG诱导在大肠杆菌中获得表达 ,并且表达产物主要以包涵体的形式存在。结论 :获得了mCLCA3抗原分子胞外段基因及其原核表达产物 ,对进一步制备单克隆抗体 ,探讨mCLCA3的通道调控机制具有重要意义。 展开更多
关键词 钙激活氯离子通道 哮喘 气道 杯状细胞
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钙激活氯离子通道在气道杯状细胞合成黏蛋白中的促进作用
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作者 宋立强 戚好文 +2 位作者 李妍 王吉村 林爱华 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第16期1470-1473,共4页
目的 :探讨人激活Cl 通道I型 (hCLCA1 )在气道杯状细胞合成黏蛋白中的调控作用 .方法 :以人气道黏液上皮细胞系NCI H2 92作为杯状细胞特性研究的体外模型 ,构建携带荧光蛋白标签的真核表达质粒 pIRES2 EFGP/hCLCA1 ,转染NCI H2 92细胞 ... 目的 :探讨人激活Cl 通道I型 (hCLCA1 )在气道杯状细胞合成黏蛋白中的调控作用 .方法 :以人气道黏液上皮细胞系NCI H2 92作为杯状细胞特性研究的体外模型 ,构建携带荧光蛋白标签的真核表达质粒 pIRES2 EFGP/hCLCA1 ,转染NCI H2 92细胞 ,用G4 1 8筛选稳定表达hCLCA1的细胞NCI H2 92 /hCLCA1 .对被转染细胞采用荧光显微镜和RT PCR法检测hCLCA1mRNA .根据NFA(hCLCA1阻断剂 )干预与否 ,将细胞分为 4组 :①NCI H2 92 ;②NCI H2 92 /hCLCA1 ;③NCI H2 92 +NFA ;④NCI H2 92 /hCLCA1 +NFA .MTT法检测各组细胞的增殖活性 ;PAS特染法检测各组细胞黏液糖蛋白的表达状况 ,RT PCR法检测黏蛋白MUC5ACmRNA水平 .结果 :经过 5 0 0 g/L的G4 1 8筛选 ,证实获得NCI H2 92 /hCLCA1细胞 .对各组细胞检测结果表明 ,NCI H2 92 /hCLCA1细胞的增殖活性、黏液糖蛋白表达量及MUC5ACmRNA水平均显著高于亲本细胞 ,并且NFA能有效抑制NCI H2 92 /hCLCA1的这些生物活性改变 .结论 :hCLCA1能有效促进气道杯状细胞的增殖能力及黏蛋白合成 。 展开更多
关键词 哮喘 气道 上皮细胞 杯状细胞 氯化物通道
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Ano2是钙激活氯离子通道的分子基础
10
作者 藏雨轩 方芳 +4 位作者 朱杭飞 向国艳 张雲乔 李瑷彤 郝峰 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第11期1477-1481,共5页
目的探讨Ano2是否为钙激活氯离子通道的分子基础。方法用RT-PCR技术扩增Ano2编码基因,将Ano2连接到真核表达载体p EGFP-N3;通过脂质体介导将Ano2转染至FRT细胞,抗生素筛选获得稳定表达Ano2的细胞系;倒置荧光显微镜下观察Ano2在FRT细胞... 目的探讨Ano2是否为钙激活氯离子通道的分子基础。方法用RT-PCR技术扩增Ano2编码基因,将Ano2连接到真核表达载体p EGFP-N3;通过脂质体介导将Ano2转染至FRT细胞,抗生素筛选获得稳定表达Ano2的细胞系;倒置荧光显微镜下观察Ano2在FRT细胞中的表达和分布,Western blot检测Ano2的表达;全细胞膜片钳技术研究Ano2的电生理学特性。结果成功构建p EGFP-Ano2真核表达载体;Ano2表达在FRT细胞膜上;Ano2电流呈Ca2+、时间和电压依赖性,电流和电压关系呈外向整流。结论 Ano2是钙激活氯离子通道的分子基础。 展开更多
关键词 Ano2 FRT细胞 转染 钙激活氯离子通道
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钙激活氯通道与哮喘黏液过度分泌及气道炎症的关系
11
作者 姜轶飞 沈华浩 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1863-1866,共4页
哮喘的一个重要特征是杯状细胞增生和黏液过度分泌,大量黏液难以清除引起小气道阻塞并导致气道高反应性,急性哮喘死亡患者尸检显示大小气道均有杯状细胞增生和黏液过度分泌,这种黏液过度分泌导致的气道阻塞是重症哮喘主要死因之一,... 哮喘的一个重要特征是杯状细胞增生和黏液过度分泌,大量黏液难以清除引起小气道阻塞并导致气道高反应性,急性哮喘死亡患者尸检显示大小气道均有杯状细胞增生和黏液过度分泌,这种黏液过度分泌导致的气道阻塞是重症哮喘主要死因之一,有研究证实黏液过度分泌是第1秒用力呼气容积(FEV1)下降加速的独立危险因素。 展开更多
关键词 钙激活氯通道 小鼠 哮喘
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钙激活CI^-通道阻断剂尼氟灭酸对哮喘小鼠气道高反应性的抑制作用
12
作者 胡俊鸿 宋立强 +1 位作者 段炜 田耘 《武警医学院学报》 CAS 2006年第2期115-118,共4页
【目的】观察钙激活CI-通道(CICa)阻断剂尼氟灭酸(NFA)对支气管哮喘气道高反应性的抑制作用。【方法】将小鼠分为哮喘组(A组),吸入NFA预防组(B组)和正常对照组(C组),每组15只。用多道生理记录仪记录气道压力峰值-时间指数(APTl)的差异,... 【目的】观察钙激活CI-通道(CICa)阻断剂尼氟灭酸(NFA)对支气管哮喘气道高反应性的抑制作用。【方法】将小鼠分为哮喘组(A组),吸入NFA预防组(B组)和正常对照组(C组),每组15只。用多道生理记录仪记录气道压力峰值-时间指数(APTl)的差异,并比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中内皮素1(ET-1)和一氧化氮(NO)的含量。观察在梯度浓度乙酰甲胆碱(mACh)的激发下,50μmol/L NFA预处理对气管环收缩张力的影响。【结果】A组APTl与B组比较,差异有显著性(P<0.01);BALF中ET-1和NOA组与B组比较差异有显著性(P<0.01);离体气管环收缩张力实验显示,A1组与C1组、A1组与A2组比较差异有显著性(P<0.01)。表明NFA能显著降低A1组的张力。【结论】NFA对哮喘气道高反应性有显著抑制作用。通过阻断气道上皮特异性ClCa,导致上皮细胞产生ET-1和NO减少,是NFA发挥抑制效应的机制之一。 展开更多
关键词 钙激活CI^-1通道阻断剂 支气管哮喘 气道高反应性
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气道上皮细胞紧密连接在小鼠哮喘中的病理学改变 被引量:3
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作者 李凡 吴琦 +7 位作者 孙昕 李宽 张颖超 李雪 李玉 张秋阳 徐龙 陈怀永 《天津医药》 CAS 2016年第1期23-25,129,共4页
目的探讨小鼠支气管哮喘(哮喘)中气道上皮紧密连接的病理学改变。方法 10只小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。哮喘组于第0、7天腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)溶液,在第14、15、16天以雾化的OVA熏诱小鼠,1 h/次、1次/d;对照组用PBS溶液替... 目的探讨小鼠支气管哮喘(哮喘)中气道上皮紧密连接的病理学改变。方法 10只小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。哮喘组于第0、7天腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)溶液,在第14、15、16天以雾化的OVA熏诱小鼠,1 h/次、1次/d;对照组用PBS溶液替代OVA;2组小鼠在第18天回收肺组织,采用免疫荧光染色法评价小鼠哮喘模型的有效性,荧光定量PCR检测紧密连接相关蛋白基因Claudin 1、Claudin 3、Claudin 4、Claudin 5、Claudin 7、Clau-din 10在肺组织中的表达。结果哮喘组Claudin 3、Claudin 4、Claudin 10 m RNA水平较对照组低(P<0.05),而Clau-din 1、Claudin 5、Claudin 7 m RNA水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘病理过程中气道上皮细胞紧密连接松散,提示气道上皮屏障破坏。 展开更多
关键词 哮喘 连接蛋白类 气道上皮黏膜 钙激活氯离子通道蛋白3 紧密连接蛋白 CLAUDIN 3
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钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞分化过程中的表达及其钙激活氯通道电生理特性变化 被引量:3
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作者 田香勤 谭朝阳 +5 位作者 李娜娜 常玉巧 张爱梅 周颖 马克涛 司军强 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期358-362,I0002,共6页
目的:研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法:以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激... 目的:研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法:以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征。结果:刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显。结论:ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 钙激活氯通道 ANO1 全细胞膜片钳 心肌纤维化
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平滑肌细胞膜的钙激活Cl^-通道
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作者 王泽君 于德洁 +1 位作者 邓艳春 鲍光宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期487-491,共5页
在多种平滑肌上都已发现Ca2+激活Cl-通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道[IK(Ca)]和氯通道[ICl(Ca)]。平滑肌细胞上激活ICl(Ca)的[Ca2+... 在多种平滑肌上都已发现Ca2+激活Cl-通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道[IK(Ca)]和氯通道[ICl(Ca)]。平滑肌细胞上激活ICl(Ca)的[Ca2+]i阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的[Ca2+]i得出激活IK(Ca)的最小[Ca2+]i应大于70~80μmol·L-1,比激活ICl(Ca)的最低浓度180μmol·L-1要小,因此认为IK(Ca)要比ICl(Ca)对[Ca2+]i更敏感。胞外钙通过电压依赖性钙通道进入胞内,[Ca2+]i升高也能激活氯通道。G蛋白与某些受体偶联激活胞内第二信使IP3而激活氯通道。钙激活氯通道的电导很小,从全细胞电流分析应小于10pS。平滑肌细胞上的氯平衡电位(ECl)正于静息膜电位,因此Cl-通道开放Cl-外流驱动膜电位向ECl方向靠近,形成膜的去极化。Ca2+激活Cl-通道开放使细胞膜去极化并引起细胞的兴奋,这种通道在由激素或神经递质引起平滑肌细胞的兴奋过程中起重要作用。 展开更多
关键词 平滑肌细胞 钙激活 氯通道
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基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca^(2+) 被引量:1
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作者 肖云萍 解宇浩 +4 位作者 张嘉琪 郭佳琦 丁旭 郝峰 王国庆 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期311-316,共6页
目的建立一种基于钙激活氯离子通道(CaCC)可敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFPH148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察... 目的建立一种基于钙激活氯离子通道(CaCC)可敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)的细胞模型。方法构建氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFPH148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;应用膜片钳技术研究CaCC生理特性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂;荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca^(2+)浓度。结果倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中;该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性;成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型;该模型可筛选CaCC调节剂,荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系;荧光变化斜率值可反映胞质内Ca^(2+)浓度,该模型可敏感检测胞质内Ca^(2+)浓度。结论此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca^(2+)浓度,为Ca^(2+)信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。 展开更多
关键词 钙激活氯离子通道 细胞模型 第二信使 Ca^(2+)浓度 流式细胞术
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基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立 被引量:1
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作者 肖云萍 解宇浩 +3 位作者 张嘉琪 洪啟元 郝峰 王国庆 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1032-1039,共8页
目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测... 目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况。应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性。加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选。结果RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4。倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型。荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。结论成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型。 展开更多
关键词 瞬时受体电位香草酸亚型4 钙激活氯离子通道 YFP-H148Q/I152L 高通量筛选细胞模型
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ANO1稳定转染细胞模型的构建及生理特性
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作者 徐连秀 狄文慧 +4 位作者 吴明达 刘雪莹 王国庆 胡江 郝峰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期52-57,共6页
为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微... 为了构建稳定转染钙激活氯离子通道(CaCCs)细胞模型并研究其生理特性,本试验采用脂质体转染和抗生素筛选获取共表达阴离子通道1(ANO1)蛋白和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞;用倒置荧光显微镜观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在FRT细胞的表达情况;用流式细胞仪检测细胞模型纯度;用荧光淬灭动力学试验检测细胞模型功能;用细胞模型或膜片钳技术研究ANO1生理特性,包括转运阴离子的特性、不同激活剂及抑制剂对ANO1的调控作用、ANO1电流受Ca^(2+)调控作用等。结果显示,倒置荧光显微镜下可观察到清晰的荧光信号;荧光淬灭动力学试验证明,此细胞模型可用于ANO1生理特性的研究;ANO1具有转运阴离子的特性;钙激活氯离子通道激活剂可以使ANO1开放且呈剂量依赖关系;钙激活氯离子通道抑制剂可抑制ANO1开放且具有剂量依赖关系;ANO1电流呈现钙依赖的特性;高浓度Ca^(2+)引起Run-down现象。结果表明,本试验成功构建ANO1细胞模型,ANO1具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性。 展开更多
关键词 阴离子通道1 细胞模型 膜片钳 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞 钙激活氯离子通道
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基于CaCC的P2ry2调节剂细胞筛选模型的建立及应用
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作者 郭佳琦 肖云萍 +3 位作者 丁旭 解宇浩 张嘉琪 郝峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2105-2112,共8页
目的:构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的高通量P2Y2嘌呤受体(P2ry2)调节剂细胞筛选模型。方法:采用RT-PCR方法验证Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRT细胞)中P2ry2的mRNA表达水平,切胶回收PCR扩增产物并进行序列测序和比对,进一步应用We... 目的:构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的高通量P2Y2嘌呤受体(P2ry2)调节剂细胞筛选模型。方法:采用RT-PCR方法验证Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRT细胞)中P2ry2的mRNA表达水平,切胶回收PCR扩增产物并进行序列测序和比对,进一步应用Western blot检测FRT细胞的P2ry2蛋白表达水平。构建钙激活氯离子通道ANO1和对卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染、抗生素筛选和有限稀释,获取共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。采用倒置荧光显微镜观察共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L细胞的情况,并应用荧光淬灭动力学实验验证模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型是否可筛选P2ry2调节剂,并应用Fura-2/AM荧光探针法检测细胞内游离钙的变化,探究胞内Ca2+浓度与P2ry2调节剂的剂量依赖关系;用Z'因子评价本模型的稳定性和可重复性。结果:FRT细胞内源性表达P2ry2;倒置荧光显微镜中观察到ANO1在细胞膜上表达绿色荧光,YFP-H148Q/I152L在胞浆中表达绿色荧光,成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的细胞模型;荧光淬灭动力学实验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂,应用Fura-2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca2+浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系;Z'因子为0.75,说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。结论:成功构建了一种经济简便快捷高效的P2ry2调节剂细胞筛选模型,适用于P2ry2调节剂的发现与评价。 展开更多
关键词 P2Y2嘌呤受体 钙激活氯离子通道 高通量筛选 FRT细胞
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异种同源钙激活Cl^-通道DNA疫苗抑制哮喘小鼠气道黏液高分泌的研究 被引量:4
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作者 宋立强 李妍 +2 位作者 戚好文 刘新平 王吉村 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期329-333,共5页
目的 钙激活Cl-通道 (CLCA)家族中小鼠mCLCA3与人hCLCA1是异种同源蛋白 ,两者表达于气道上皮杯状细胞。拟探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道黏液高分泌状况的影响。方法 构建重组真核表达质粒pSecTag2B/hCLCA1,将其作为疫苗肌注法接种... 目的 钙激活Cl-通道 (CLCA)家族中小鼠mCLCA3与人hCLCA1是异种同源蛋白 ,两者表达于气道上皮杯状细胞。拟探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道黏液高分泌状况的影响。方法 构建重组真核表达质粒pSecTag2B/hCLCA1,将其作为疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠 (隔 2周 1次 ,共4次 )。当酶联免疫吸附法 (ELISA)证实血清中有能结合mCLCA3胞外肽段 (ED)的抗体产生时 ,卵蛋白致敏法制备接种小鼠的哮喘模型。引喘 5d后 ,PAS特染黏蛋白法观察气道杯状细胞数量及分泌功能 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测黏蛋白MUC5ACmRNA水平的变化。设接种pSecTag2B/mCLCA3、空载体pSecTag2B和生理盐水为对照组。结果 ELISA证实疫苗接种 3次后的小鼠血清抗体 ,能有效结合mCLCA3的 3个ED。其中抗体与N 端和C 端ED的结合滴度大于与中间ED的结合滴度。与同样被诱发哮喘的对照组相比 ,疫苗接种组小鼠气道的杯状细胞数量和黏液分泌量明显减少 ,MUC5ACmRNA转录水平下降。结论 hCLCA1DNA疫苗能诱导小鼠产生结合自身mCLCA3胞外肽段的抗体 ,并因此有效减轻了哮喘气道黏液高分泌。 展开更多
关键词 钙激活Cl^-通道 DNA疫苗 哮喘 小鼠 气道黏液 气道上皮杯状细胞
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