黄芪甲苷、β-榄香烯对小鼠树突状细胞免疫功能的影响

目的:通过观察黄芪甲苷、β-榄香烯对小鼠树突状细胞(DC)免疫功能的影响,探讨黄芪甲苷、β-榄香烯是否能够通过增强小鼠DC功能从而提高机体的免疫功能,为阐明黄芪、莪术的抗肿瘤机制提供实验依据。方法:将小鼠DC细胞株D2SC细胞分5组:空白对照组、脂多糖(LPS)组、黄芪甲苷组、β-榄香烯组、黄芪甲苷组+β-榄香烯组,分别加入相应药物,LPS组及中药组药物终浓度为10μg.ml-1。采用流式细胞仪和ELISA法分别检测小鼠DC细胞株D2SC细胞表面分子(MHCⅡ、MHCⅠ、CD40、CD80、CD86)及细胞因子(IL-6、IL-12)的表达。结果:黄芪甲苷组、β-榄香烯组细胞表面分子MHCⅡ、MHCⅠ、CD40、CD80、CD86的表达水平均高于空白对照组及LPS组,其中黄芪甲苷组MHCⅡ水平明显高于空白对照组(P<0.05),β-榄香烯组CD80、CD86表达明显高于LPS组(P<0.05);黄芪甲苷组+β-榄香烯组MHCⅡ和CD40表达明显高于LPS组(P<0.05),MHCⅠ和CD86表达明显高于空白对照组(P<0.05)。黄芪甲苷、β-榄香烯处理D2SC细胞后,其上清IL-12和IL-6水平均高于空白对照组及LPS组,其中黄芪甲苷组和β-榄香烯组IL-12、IL-6水平明显高于空白对照组(P<0.05);黄芪甲苷+β-榄香烯组IL-12和IL-6表达均明显高于LPS组(P<0.05)。结论:黄芪甲苷、β-榄香烯及其联合应用可以增强DC细胞表面MHC分子和免疫共刺激因子表达,并促进IL-12、IL-6等细胞因子的分泌,以发挥抗原提呈及诱导T细胞应答的功能,这为临床黄芪和莪术配伍的益气活血法治疗消化道肿瘤提供了免疫学依据。

黄芪甲苷和三七的三种有效成分配伍对小鼠脑缺血/再灌注后氧化应激和Nrf2/HO-1途径的影响

目的研究黄芪的主要有效成分黄芪甲苷分别与三七的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍对小鼠脑缺血/再灌注后氧化应激和核转录因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1途径的影响。方法C57BL/6小鼠随机分组,连续给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24 h。测定脑组织丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH),HO-1mRNA表达,脑组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达。结果①脑缺血/再灌注后,脑组织MDA、NO含量明显升高,SOD活性和GSH含量明显降低。黄芪甲苷可降低脑组织MDA、NO含量,人参皂苷Rg1能降低脑组织NO含量。黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1均能明显降低脑组织MDA和NO含量,且黄芪甲苷与人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍的效应大于人参皂苷Rb1单用和三七皂苷R1单用。②脑缺血/再灌注后,脑组织胞核和胞质中Nrf2蛋白含量及核转位率升高,同时HO-1mRNA和蛋白表达增强。各给药组能不同程度地降低胞质Nrf2蛋白含量,升高胞核Nrf2含量,使Nrf2核转位率升高,且黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1的作用强于各有效成分单用。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1可使脑组织HO-1mRNA和蛋白表达明显增加,黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1脑组织HO-1mRNA和蛋白的增加明显高于各有效成分单用。且黄芪甲苷+人参皂苷Rg1升高胞核Nrf2蛋白、提高Nrf2核转位率的作用强于黄芪甲苷+人参皂苷Rb1,增加HO-1基因和蛋白表达的作用强于黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1。结论黄芪甲苷分别与三七的3种有效成分配伍可增强其抗脑缺血/再灌注后氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化基因HO-1等的表达有关,黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍的效应更为明显。

黄芪甲苷联合葛根素对高糖诱导的H9c2细胞内质网应激及相关凋亡因子的影响

目的:探讨黄芪甲苷联合葛根素对高糖诱导的H9c2细胞内质网应激及其凋亡相关因子的影响。方法:将对数生长期的H9c2细胞随机分为对照组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)组、毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)组、高糖+黄芪甲苷+葛根素组;CCK-8法检测H9c2细胞活力;Western blot检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)表达。RT-qPCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、肌醇酶1α(inositol-re‐quiring enzyme 1α,IRE1α)、调控X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)、转录因子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、p53上调凋亡调节因子(p53 up-regulate modulator of apoptosis,PUMA)mRNA和蛋白的表达。结果:与对照组相比,高糖组Bax/Bcl-2比值显著增加(P<0.01),高糖组和TG组GRP78、IRE1α、XBP1、CHOP和PUMA表达增加(P<0.05),4-PBA或黄芪甲苷联合葛根素均可降低高糖诱导的GRP78、IRE1α、XBP1、CHOP和PUMA的高表达和Bax/Bcl-2比值(P<0.05)。结论:黄芪甲苷联合葛根素对高糖诱导的H9c2细胞内质网应激及凋亡相关因子有抑制作用。

HPLC-ELSD法测定肾八味胶囊中黄芪甲苷的含量

目的:建立HPLC-ELSD法测定肾八味胶囊中黄芪甲苷的含量。方法:色谱柱:Hypersil SB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:室温;流动相:乙腈:水(32:68);流速:1 ml·min^(-1);蒸发光散射检测器参数:漂移管温度:105℃;雾化温度:50℃;载气:氮气(0.99999%),流量:2.0 L·min^(-1)。结果:黄芪甲苷的线性范围为0.25～8.00μg,r=0.999 6;平均回收率为98.3%,RSD为2.0%(n=6)。结论:本方法简便,结果准确可靠,可作为控制肾八味胶囊质量的方法。

黄芪甲苷对3,4苯并芘介导内皮祖细胞损伤的保护作用及机制

目的观察黄芪甲苷对3,4苯并芘(BaP)介导内皮祖细胞(EPCs)损伤的保护作用并探讨其机制。方法采用密度梯度离心法收集人脐血单个核细胞,贴壁培养法培养EPCs,消化收集第4代细胞,随机分为5组,正常对照组:不作任何处理;Bap组:予BaP,浓度为20μmol/L;3种浓度黄芪甲苷各组(先加入浓度分别为2、10、50μg/ml的黄芪甲苷,2h后再加入浓度为20μmol/L的Bap)。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,黏附能力测定实验检测细胞黏附能力,transwell小室检测细胞迁移能力。取各组细胞培养上清液检测其超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,免疫荧光染色检测各组细胞活性氧(ROS)的表达。结果与正常对照组相比,BaP组细胞的增殖、黏附以及迁移能力均明显降低(均P<0.01),黄芪甲苷预保护可呈浓度依赖性地提高EPCs增殖、黏附及迁移能力(均P<0.05);BaP组培养上清液中MDA含量与正常对照组相比明显升高(P<0.01),SOD含量明显下降(P<0.01),ROS表达明显上升(P<0.01),不同浓度的黄芪甲苷可降低培养上清液中MDA含量(P<0.05),提高SOD含量(P<0.05),并且呈浓度依赖性地降低细胞ROS表达(P<0.01)。结论黄芪甲苷对BaP介导的EPCs损伤具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激有关。

HPLC-ELSD法测定肠腑康胶囊A中黄芪甲苷的含量

目的建立HPLC-ELSD法测定肠腑康胶囊A中黄芪甲苷含量。方法色谱柱:Welch UltimateXB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水(38∶62);流速:1.0 ml/min;柱温:30℃,漂移管温度83℃,氮气作为载气,流速:2.5 ml/min。结果肠腑康胶囊A中黄芪甲苷为1.48~8.40μg时,峰面积对数与进样量质量对数呈良好的线性关系,平均回收率为102.81%,RSD为3.51%。结论建立的方法具有操作简单、准确度高、专属性强等优点,可以用于肠腑康胶囊A中黄芪甲苷的含量测定。

HPLC法测定补气生血口服液中三种组分的含量

目的建立以高效液相色谱测定补气生血口服液中黄芪甲苷、二苯乙烯苷和阿魏酸含量的方法。方法三组分均采用phenomenex C_（18）（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;黄芪甲苷测定的流动相为水-乙腈（60：40）;柱温：30℃;流速：1.0 mL/min;进样量：10μL;ELSD检测器;漂移管温度：105℃;气流速度：2.5 L/min。二苯乙烯苷与阿魏酸测定流动相为乙腈-水（20：80）;流速1.0 mL/min;检测波长：248 nm;柱温30℃。结果补气生血口服液中黄芪甲苷在0.22~5.72μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率为91.2%。在相同色谱条件下,二苯乙烯苷与阿魏酸分离度好,二苯乙烯苷在9.83~393.00μg/m L范围内、阿魏酸在1.015~50.756μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率分别为90.7%和92.8%。结论该方法简便、快捷、专属性强,为其质量控制与含量测定提供了重要参考。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定芪胶膏中的黄芪甲苷含量

目的建立测定芪胶膏中黄芪甲苷含量的高效液相色谱法。方法采用Waters Symmetry Shield TM RP色谱柱C18(5μm 4.6 mm×250 mm,柱子编号:186000112),以乙腈-水(34∶66)为流动相,流速1.0 ml/min,柱温40℃,漂移管温度60℃,载气压力30 psi。结果黄芪甲苷进样量在1.9046～13.9674μg范围内时,与峰面积积分值有良好的线性关系(r=0.9991,n=6),平均加样回收率为98.52%,RSD=3.7%(n=6)。结论高效液相色谱-蒸发光散射检测法灵敏、简便、重复性好,可用于芪胶膏的质量控制。

生血康口服液黄芪甲苷含量测定方法学研究

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定生血康口服液中黄芪甲苷含量的方法。方法:选用Diamonsil C_(18)(5μm,250mm×4.6mm)色谱柱,流动相为乙腈:水(35:65),检测波长:200nm,流速1.0mL/min,柱温:室温。结果:黄芪甲苷的量在0.03021～0.19206mg/ml范围内,浓度同峰面积呈良好的线形关系。平均加样回收率为93.6%,RSD=2.98%。结论:所建立的方法可靠,可用于生血康的质量控制。

闪式与回流提取黄芪皂苷工艺比较

目的:考察闪式与回流提取对黄芪皂苷提取工艺的影响。方法:以黄芪甲苷提取率和出膏率作为考察指标,采用HPLC-ELSD法作为测定方法,以Welc C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈:水(40∶60)为流动相,流速1 mL.min-1,漂移管温度80℃,气流量50 psi,考察闪式与回流提取对黄芪皂苷提取工艺的影响。结果:闪式提取所得黄芪甲苷含量高于回流提取。结论:闪式提取黄芪皂苷不仅提取率高,而且耗时短,节省能源,可望广泛地应用在制药工业上。

复方刺五加颗粒的质量控制

目的:建立复方刺五加颗粒的质量标准。方法:采用薄层色谱法对方中的西洋参、麦冬、黄芪进行定性鉴别;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定方中黄芪甲苷的含量。结果:薄层色谱斑点清晰,分离效果较好,且阴性无干扰;黄芪甲苷在0.56～5.60μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率为99.13%,RSD为0.56%(n=5)。结论:该方法准确可靠、专属性强、重复性好,可用于复方刺五加颗粒的质量控制。