草木樨状黄芪变异系中甲硫氨酸代谢相关cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用mRNA差异显示技术 differentialdisplay 从草木樨状黄芪耐甲硫氨酸变异系中分离到一差异cDNA片段,命名为tm03 360bp .mRNA杂交结果显示,该片段只在变异苗中表达,初步确定其与甲硫氨酸代谢相关.测序后在Genebank搜寻,未发现有同源序列.进一步分析表明,该cDNA克隆可编码完整的蛋白.在该基因片段两端分别合成含Hind 和BamH 酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到pRSETA表达载体,转化宿主菌JM109 DE3 ,经IPTG诱导表达了N′端含6个组氨酸的蛋白质,分子量约为14kD,为进一步研究该蛋白的结构和生物学功能奠定基础.

草木樨状黄芪抗甲硫氨酸变异系的离体筛选及鉴定

通过组织培养体系进行了草木樨状黄芪(Astragalus melilotoides Pall.)抗甲硫氨酸变异系的筛选。无菌苗幼茎切段诱导的愈伤组织经NaN_3诱变后,经过筛选获得了抗14mmol/L甲硫氨酸的变异细胞系,并分化出大量植株。再生植株已经在大田中开花结实。经分析表明:抗性细胞系脱离选择压6个月后,放在含15mmol/L甲硫氨酸的培养基上培养25天后,其相对增长率是对照的10.2倍。抗性系再生植株游离甲硫氨酸是对照的2.12倍,并且天冬族氨基酸都有明显增加。SDS-PAGE及过氧化物酶同工酶分析表明:在蛋白质及同工酶酶谱上抗性系再生植株均出现与对照不同的差异。