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转AtDME1基因‘84K’杨的获得及目的基因诱导表达分析
1
作者
吴晓娟
鲁俊倩
+3 位作者
常英英
钟姗辰
苏晓华
张冰玉
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期26-32,共7页
【目的】DNA甲基化是一种重要的表观遗传标记,在植物生长发育、环境响应等过程中发挥重要作用。本研究将拟南芥去甲基化基因AtDME1导‘84K’杨基因组中,通过化学诱导表达实验,研究AtDME1基因在转基因杨树中的诱导表达特性,为建立杨树甲...
【目的】DNA甲基化是一种重要的表观遗传标记,在植物生长发育、环境响应等过程中发挥重要作用。本研究将拟南芥去甲基化基因AtDME1导‘84K’杨基因组中,通过化学诱导表达实验,研究AtDME1基因在转基因杨树中的诱导表达特性,为建立杨树甲基化诱导变异体系,进而实现杨树品种改良等奠定良好基础。【方法】以白杨派优良品种84K杨无菌苗叶片为受体材料,采用农杆菌介导法将化学诱导启动子与AtDME1基因导入‘84K’杨;经过潮霉素筛选、常规PCR检测及DNA测序等方法对抗性植株进行鉴定。通过化学诱导剂17-β-雌二醇对随机挑选的1个转基因株系离体叶片进行诱导处理,处理时间为0、3、6、12、24、48、96、144 h,采用qRT-PCR检测处理叶片中外源基因AtDME1的表达量变化。【结果】本研究中,潮霉素分化筛选共获得了抗性芽224个,经生根筛选获得6株抗性植株,经分子检测证实这6株抗性植株均为转AtDME1基因植株,扩繁后分别标号为转基因AD-1~6。qRT-PCR检测结果显示,化学诱导剂17-β-雌二醇处理3 h时,目的基因AtDME1的表达量基本达到最大值,效果持续至12 h后逐渐减弱。【结论】化学诱导剂17-β-雌二醇能迅速有效地调控转基因杨树中AtDME1基因的表达,为进一步研究DME1基因在杨树基因组甲基化调控方面的作用机制奠定基础,也为杨树化学诱导表达特性的研究做好了铺垫。
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关键词
84K杨
转基因植株
去甲基化基因
化学诱导表达
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职称材料
题名
转AtDME1基因‘84K’杨的获得及目的基因诱导表达分析
1
作者
吴晓娟
鲁俊倩
常英英
钟姗辰
苏晓华
张冰玉
机构
林木遗传育种国家重点实验室
出处
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期26-32,共7页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项重点项目子项目“杨树工业用材新型品种选育研究”(CAFYBB2017ZA001-3)
国家自然科学基金项目“基于DNA甲基化变异的杨树种质创制基因工程技术体系构建”(31770710)。
文摘
【目的】DNA甲基化是一种重要的表观遗传标记,在植物生长发育、环境响应等过程中发挥重要作用。本研究将拟南芥去甲基化基因AtDME1导‘84K’杨基因组中,通过化学诱导表达实验,研究AtDME1基因在转基因杨树中的诱导表达特性,为建立杨树甲基化诱导变异体系,进而实现杨树品种改良等奠定良好基础。【方法】以白杨派优良品种84K杨无菌苗叶片为受体材料,采用农杆菌介导法将化学诱导启动子与AtDME1基因导入‘84K’杨;经过潮霉素筛选、常规PCR检测及DNA测序等方法对抗性植株进行鉴定。通过化学诱导剂17-β-雌二醇对随机挑选的1个转基因株系离体叶片进行诱导处理,处理时间为0、3、6、12、24、48、96、144 h,采用qRT-PCR检测处理叶片中外源基因AtDME1的表达量变化。【结果】本研究中,潮霉素分化筛选共获得了抗性芽224个,经生根筛选获得6株抗性植株,经分子检测证实这6株抗性植株均为转AtDME1基因植株,扩繁后分别标号为转基因AD-1~6。qRT-PCR检测结果显示,化学诱导剂17-β-雌二醇处理3 h时,目的基因AtDME1的表达量基本达到最大值,效果持续至12 h后逐渐减弱。【结论】化学诱导剂17-β-雌二醇能迅速有效地调控转基因杨树中AtDME1基因的表达,为进一步研究DME1基因在杨树基因组甲基化调控方面的作用机制奠定基础,也为杨树化学诱导表达特性的研究做好了铺垫。
关键词
84K杨
转基因植株
去甲基化基因
化学诱导表达
Keywords
Populus alba × Populus glandulosa ’84K’
transgenic plant
atdme1
chemical-inducible expression
分类号
S792.11 [农业科学—林木遗传育种]
S722.5 [农业科学—林木遗传育种]
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1
转AtDME1基因‘84K’杨的获得及目的基因诱导表达分析
吴晓娟
鲁俊倩
常英英
钟姗辰
苏晓华
张冰玉
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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