绿萝组织培养和遗传转化条件优化

为优化绿萝离体再生条件,建立更高效的遗传转化体系,分别以绿萝叶片和叶柄为外植体,比较不同植物生长物质对绿萝不定芽诱导和植株离体再生的影响。并通过PCR技术克隆拟南芥AtFALDH基因,利用农杆菌介导法对绿萝愈伤组织进行遗传转化,比较不同转化条件下绿萝愈伤组织抗性不定芽诱导率。结果表明,绿萝叶柄愈伤组织和不定芽诱导效果均优于叶片。绿萝叶片愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D,该培养基下诱导率大约为61.5%;叶柄愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA,该培养基下诱导率达到97.8%。绿萝叶片不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,该培养基下诱导率接近100%;叶柄不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,该培养基下诱导率约为100%,但叶柄来源的愈伤组织诱导产生的不定芽数量较多,而且生长更旺盛。生根最适培养基为1/2 MS+0.05 mg/L NAA,该培养基下生根率接近100%。当农杆菌的OD600值为0.5、侵染10 min、共培养2 d时,绿萝愈伤组织产生抗性不定芽的数量较多,转化效果较好。研究优化了绿萝离体再生条件,在此基础上,将AtFALDH基因导入绿萝细胞中,经抗生素筛选,初步获得了具有抗性的转基因植株。