AtIPS1与细胞程序化死亡相关蛋白ATXR5/6的相互作用

【目的】对拟南芥肌醇磷酸合酶AtIPS1进行亚细胞水平定位,并验证AtIPS1与细胞程序化死亡(PCD)相关蛋白ATXR5或ATXR6的相互作用。【方法】构建pAtIPS1::AtIPS1-GFP融合基因表达载体,并分别转化烟草BY-2细胞和拟南芥植株,共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白GFP的分布。采用双分子荧光互补(BiFC)技术分析AtIPS1与ATXR5/6的相互作用,并观察突变体atips1的表型。【结果】AtIPS1定位于细胞质和细胞核。AtIPS1与ATXR5和ATXR6之间存在相互作用,且互作位点与AtIPS1的细胞定位一致。突变体atips1叶片上自然产生细胞死亡的表型,外源增加肌醇或AtIPS1超表达可恢复突变体的野生型表型,叶片不再出现坏死斑。【结论】AtIPS1突变可导致植物细胞死亡;AtIPS1定位于细胞质和细胞核;AtIPS1通过与ATXR5/6互作参与了植物PCD的调控。

ATIP1和ATIP3a对口腔恶性肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨过表达MTUS1/ATIPs对口腔恶性肿瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法:应用RT-PCR检测舌鳞癌(TSCC)细胞UM1、腺样囊性癌组织(ACC)和唾液腺腺样囊性癌细胞(SACC-83)中MTUS1/ATIP表达水平及亚型分布。应用含ATIP1和ATIP3a片段的质粒转染口腔恶性肿瘤细胞UM1和SACC-83,48 h后以MTT检测细胞的增殖能力。采用流式细胞仪技术和细胞免疫荧光技术检测细胞周期和细胞凋亡率,Western免疫印迹检测细胞中ATIP1、ATIP3a、ERK1/2、pERK1/2、Caspase3的表达水平。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学处理。结果:RT-PCR结果显示,ATIP1、ATIP3a、ATIP3b是MTUS1的主要亚型,在口腔恶性肿瘤细胞(TSCC细胞系UM1、ACC组织和SACC-83细胞)中表达显著降低。转染MTUS1/ATIP1和MTUS1/ATIP3a后,舌鳞癌细胞的增殖能力受到显著抑制。转染ATIP1后,UM1细胞的抑制率分别为38.8%(24 h)和57.3%(48 h);转染ATIP3a后,UM1细胞的抑制率分别为48.1%(24 h)和56.5%(48 h);同时转染ATIP1和ATIP3a后,UM1细胞的抑制率分别为93.5%(24 h)和88.8%(48 h)。同样,在SACC-83细胞中也出现类似效果(P<0.05)。细胞周期分析发现,高表达MTUS1/ATIP1后,UM1及SACC-83细胞阻滞在G1/G0期;而ATIP3a则诱导细胞阻滞在G2/M期(P<0.05)。Western免疫印迹检测显示,转染MTUS1/ATIP1和MTUS1/ATIP3a后,ERK表达升高,磷酸化ERK表达下降,Caspase 3表达升高。结论:MTUS1/ATIP是一个潜在的抑癌基因,可通过ERK途径,调控口腔恶性肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。

MTUS1/ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨过表达MTUS1/ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法检测人舌鳞癌系UM1、SCC-9、SCC-15、Tca8113细胞株中MTUS1的表达水平。应用含ATIP1片段的质粒转染舌鳞癌细胞,48 h后MTT检测舌鳞癌细胞的增殖能力;应用流式细胞仪技术和细胞免疫荧光技术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测舌鳞癌细胞中MTUS1、p53、ERK1/2的表达情况。结果转染MTUS1/ATIP1后细胞的增殖明显受到抑制,其抑制率约为40%(t=0.023,P<0.05);高表达MTUS1/ATIP1可导致舌鳞癌细胞株G1期阻滞(G1期:t=0.032,G2期:t=0.036,S期:t=0.027,P<0.05)并诱导细胞凋亡率的明显升高,差异具有统计学意义(t=0.005,P<0.05)。Western blot检测显示,转染MTUS1/ATIP1后ERK的表达升高,磷酸化的ERK表达下降,p53的表达升高。结论 MTUS1可抑制舌鳞癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。