农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化(英文)

[目的]采用正交设计L25（56）优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度（OD600）、乙酰丁香酮（AS）浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为：预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4～6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6％;最终获得4株转AtMYB118基因植株.[结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.

OPRM1(A118G)基因多态性与阿片类药物镇痛效果的系统性评价

目的系统评价OPRM1(A118G)基因多态性与阿片类药物镇痛效果之间的关系。方法通过检索自建库至2024年3月中国知网、万方、维普数据库和PubMed、Web of Science、Cochrane Library、Embase数据库的相关临床研究,严格按照纳入和排除标准筛选文献,提取数据后采用Rev-Man 5.4软件进行Meta分析。结果纳入19项研究共3097例患者。Meta分析结果显示:AA型的患者术后24 h的VAS评分与AG型比较差异无统计学意义(SMD=-0.04,95%CI:-0.10~0.03,P=0.26);AA型的患者术后24 h的VAS评分与GG型比较差异无统计学意义(SMD=-0.58,95%CI:-1.29~0.13,P=0.11);AG型的患者术后24 h的VAS评分与GG型比较差异无统计学意义(SMD=-0.59,95%CI:-1.29~0.11,P=0.10)。AA型的患者术后24 h的阿片类药物消耗量与AG型比较差异有统计学意义(SMD=-0.32,95%CI:-0.63~-0.02,P=0.04);AA型的患者术后24 h的阿片类药物消耗量与GG型比较差异有统计学意义(SMD=-1.05,95%CI:-1.66~-0.44,P=0.0007);AG型的患者术后24 h的阿片类药物消耗量与GG型比较差异有统计学意义(SMD=-0.77,95%CI:-1.22~-0.33,P=0.0007)。结论OPRM1(A118G)基因多态性会降低阿片类药物的镇痛效果,其与术后24 h的VAS评分无关,但与术后24 h阿片类药物的消耗量有关,G等位基因携带的患者术后24 h阿片类药物的消耗量更大。

裂殖壶藻SlMYB118基因的克隆及生物信息学分析

裂殖壶藻是一种含有丰富DHA的海洋微藻。本课题组前期发现裂殖壶藻的SlMYB118基因与脂肪酸的合成密切相关,是潜在的DHA合成调控的转录因子。本文通过PCR的方法克隆裂殖壶藻的SlMYB118基因的cDNA全长序列,运用生物信息学的方法对其分析。结果预测SlMYB118蛋白质的等电点为8.75,分子量为84.81 kDa,定位于细胞核,且其具有106个潜在的磷酸化位点。SlMYB118基因的结合位点是探索转录调控机制、建立DHA合成相关转录调控网络的关键,本研究为后续确定其结合位点奠定了理论基础。

GA118-8B国产遗传分析仪的性能质量评定方法研究

研究GA118-8B国产遗传分析仪性能质量的评定方法,使用国产毛细管8通道毛细管阵列,应用等位基因靶点及Gene ScanT M-500LIZ,研究温度均一性分布情况、基因座片段大小的精确度,以及分型情况等。实验数据表明,DNA国产遗传分析仪实现了空间校正及光谱校正通过,单碱基分辨力为1bp,总长度为500bp的筛分过程,等位基因分型数据通过,恒温箱温度均一性良好,机器基线噪声值低,每个基因座的片段大小分子量标准差值小于0.1。通过该分析仪的性能质量评定方法,也为其质量鉴定和精确度性能要求提供了数据支撑。

AtMYB73基因正调控拟南芥对盐胁迫的响应

为明确拟南芥R2R3-MYB转录因子家族第22亚族基因AtMYB73在拟南芥抵抗盐胁迫过程中的功能,本研究将拟南芥野生型Col-0、AtMYB73基因的T-DNA插入突变体myb73和超表达突变体OE进行NaCl胁迫处理,检测突变体在NaCl胁迫下的种子萌发率、存活率及抗盐相关基因的表达情况。结果发现,在NaCl胁迫下,myb73突变体的种子萌发率、幼苗的存活率、成株时期的存活率及拟南芥抗盐相关基因MYB44、SOS2和SOS3的表达均明显低于野生型和超表达突变体,表明AtMYB73基因正调控拟南芥对盐胁迫的响应。

绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因orf118的克隆及序列分析

从甘肃景泰疑似羊痘患病绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,利用PCR技术,克隆糖蛋白orf118基因.比较分析表明,该基因由516个核苷酸组成,编码171个氨基酸,相对分子质量为19500,其碱基组成极不平衡,其中A+T含量占72.48%,G+C含量仅占27.52%.甘肃景泰株orf118基因同绵羊痘病毒TU-V02127株之间的核苷酸同源性最高达99.8%,氨基酸的同源性为100%;与疙瘩皮肤病病毒肯尼亚株和山羊痘病毒G20-LKV株之间的同源性分别为96.5%和94.8%.结构预测结果显示,orf118蛋白为分泌蛋白,具有2个N键连结糖基化位点和1个跨膜区.以上结果表明,orf118蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗和诊断价值.

汉坦病毒76-118株G2基因的克隆及其在甲基营养型酵母中的表达

目的 获得汉坦病毒囊膜蛋白G2体外表达产物。方法 应用RT -PCR方法扩增汉坦病毒 76 -118株M片段编码的G2蛋白基因 ,并将扩增产物分别插入pPIC9K和pHIL -S1载体 ,命名为pPIC9K -G2和pHIL -S1-G2 ,分别与酵母的α因子信号肽和PH0 1信号肽 3’端融合 ,处于醇氧化物酶 (AOX1)启动子下游。这 2个载体经线性化后分别转化甲基营养型酵母菌株GS115和SMD116 8,筛选后分别得到His+ Muts 转化子和His+ Mut+ 转化子 ,诱导表达后 ,用Dot ELISA检测。结果 Dot-ELISA检测为阳性。结论 成功地表达了汉坦病毒G2囊膜蛋白 ,为进一步研究其结构功能以及生物学特性奠定了良好基础。

转AtMYB44基因小麦的获得和检测

为了评价拟南芥转录因子AtMYB44基因对小麦抗病能力的影响,以小麦幼胚诱导的愈伤组织为转化受体,以磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)基因作为选择标记,通过基因枪介导法将带有At-MYB44基因的表达质粒AF234296-44导入小麦品种扬麦158.经过2～3次甘露糖筛选后,获得75株再生苗.通过氯酚红(chlorophenol red,CPR)染色获得40株CPR阳性再生苗,进一步通过标记基因PMI和目的基因AtMYB44的PCR检测,获得22株PCR阳性植株,转化率为0.306%.结果初步表明AtMYB44基因已整合到小麦基因组中,获得了生物安全标记的转AtMYB44基因小麦.

延边地区朝鲜族及汉族男性μ阿片受体基因A118G多态性与酒精性肝病及酒精依赖之间的关系

[目的]探讨延边地区朝鲜族及汉族男性μ阿片受体(OPRM1)基因A118G基因型和等位基因频率及其与酒精性肝病和酒精依赖之间的关系.[方法]采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性((PCR-RFLP)方法检测延边地区朝鲜族及汉族男性酒精性肝病患者(109名)、酒精依赖患者(103名)和健康对照人群(95名)OPRM1基因A118G单核苷酸多态性,计算和比较各组基因型和等位基因的频率.[结果]朝鲜族男性酒精性肝病组、酒精依赖组和健康对照组OPRM1基因A118G变异基因型GG的频率分别为7.1%,8.6%,4.0%,其等位基因118G出现的频率分别为19.6%,19.0%,13.0%,三者A118G位点多态分布间差异无统计学意义(P>0.05).汉族男性酒精性肝病组、酒精依赖组和健康对照组OPRM1基因A118G变异基因型GG的频率分别为3.8%,2.2%,0%,其等位基因118G出现的频率分别为14.2%,14.4%,13.3%,三者A118G位点多态分布间差异无统计学意义(P>0.05).分别比较朝鲜族及汉族健康对照组、酒精依赖组、酒精性肝病组,见A118G位点多态分布间差异均无统计学意义(P>0.05).[结论]OPRM1基因A118G多态性与延边地区朝鲜族及汉族男性酒精依赖及酒精性肝病的发生无相关性;OPRM1基因A118G多态分布在延边地区朝鲜族及汉族男性中无差异.

新疆地区维吾尔族与哈萨克族和汉族疼痛敏感性与A118G基因多态性的相关性研究

目的探讨新疆地区维吾尔族、哈萨克族和汉族阑尾手术患者疼痛敏感性与A118G基因多态性的相关性。方法完全随机选取2016年1月至2017年11月在新疆维吾尔自治区人民医院接受阑尾手术麻醉的维吾尔族、哈萨克族、汉族患者各50例。采集患者静脉血,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测技术检测A118G基因多态性;通过压力刺激检测患者试验性疼痛中的压力痛阈和压力耐痛阈;采用疼痛视觉模拟量表(VAS)评分记录患者术后6、12、24、48 h评分并记录术后48 h内不良反应发生情况。结果维吾尔族患者G等位基因频率明显高于哈萨克族和汉族患者[41. 0%(41/100)比26. 0%(26/100)、19. 0%(19/100)](均P <0. 05)。3组患者压力痛阈比较差异无统计学意义(P=0. 621),维吾尔族和哈萨克族患者压力耐痛阈总均值均低于汉族患者(均P <0. 05),3组中GG基因型携带者压力痛阈和压力耐痛阈均低于AA基因型和AG基因型携带者(均P <0. 05)。术后6 h维吾尔族与哈萨克族患者VAS评分总分均高于汉族患者[(8. 13±0. 87)、(8. 32±1. 07)分比(7. 92±0. 62)分](均P <0. 05),维吾尔族与汉族携带GG基因型患者术后6、12、24、48 h的VAS评分均明显高于同族其他基因型患者(均P <0. 05)。3组患者术后48 h内不良反应发生率比较差异无统计学意义(P=0. 816)。结论 A118G基因多态性与新疆地区维吾尔族、哈萨克族和汉族阑尾手术患者疼痛敏感性相关,G等位基因突变可能是增加疼痛敏感性的直接因素。

广西壮族人群pMCT118基因座多态性分析

目的 为了解广西壮族人群D1S80位点群体遗传资料。方法 使用PCR结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术 ,对 30 0名广西壮族无关个体 pMCT118基因座进行多态性分析。结果 观察到 2 3个等位基因 ,74个基因型 ,杂合度、非父排除率、个体识别力及多态信息含量分别为 0 82 4、0 76 3、0 96 8、0 875。其基因型频率分布符合Hardy -Weinberg定律。对 5个家系相关个体分析符合孟德尔定律。结论 pMCT118基因座为高度多态的遗传标记 ,在群体遗传、个体识别和移植方面均有重要价值。

拟南芥AtMYB61基因的克隆及表达载体构建

文章以拟南芥幼苗提取的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得AtMYB61基因的全长cDNA片段,再克隆到pUCm-T载体上,菌落PCR、酶切鉴定和cDNA测序结果表明成功克隆了拟南芥AtMYB61基因。从AtMYB61-pUCm-T载体上,用BstEⅡ和BglⅡ全双酶切切下目的基因片段,将此基因片段连接到植物表达载体pCAMBIA2301中。菌落PCR和酶切鉴定结果表明成功构建了植物表达载体pCAMBIA2301-AtMYB61。利用电转化法将重组表达载体导入根癌农杆菌中,获得了携带AtMYB61基因的根癌农杆菌株,为转基因改良植物抗逆性和进一步研究AtMYB61基因的抗逆分子机理奠定了基础。

OPRM1 A118G基因多态性对阿片类药物治疗疼痛的影响研究进展

疼痛是绝大多数手术患者难以避免的痛苦体验,也是目前临床上面临的棘手问题。阿片类药物是治疗中度和重度疼痛的首选药物,其主要通过与OPRM1编码的μ-阿片受体结合发挥镇痛作用。临床大量研究发现,阿片类药物镇痛效果和不良反应的发生存在一定个体差异,而这种个体差异与OPRM1 A118G密切相关。本文就OPRM1 A118G基因多态性与阿片类药物镇痛效应与不良反应的相关研究作一综述。

OPRM1(A118G)基因多态性对阿片类药物镇痛效应影响的研究进展

疼痛是中晚期癌症患者的常见症状,阿片类药物是治疗中重度癌痛的主要药物之一,主要通过μ-阿片受体基因(OPRM1)编码的μ-阿片受体发挥镇痛作用。临床发现,阿片类药物镇痛效果、不良反应及阿片耐受的发生存在一定个体差异。许多研究表明,这种个体差异与OPRM1基因A118G位点密切相关,本文就OPRM1(A118G)基因多态性与阿片类药物镇痛效应的相关研究作一综述。

石家庄地区汉族人群DIS80(pMCT118)位点VNTR基因频率分布调查

本文采用ＰＣＲ技术对石家庄地区２１６名无关个体ＤＩＳ８０（ｐＭＣＴ１１８）位点扩增片段长度多态性的等位基因频率进行调查。ＰＣＲ扩增产物采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分型及溴化乙锭染色，共检出７０种基因型，２５个等位基因，其中以１８、２４、３０三个等位基因频率最高。将本文结果与日本人群在ＤＩＳ８０（ｐＭＣＴ１１８）位点多态性结果进行比较，石家庄地区汉族人群ＤＩＳ８０（ｐＭＣＴ１１８）位点基因频率分布符合ＨａｒｄｙＷｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律，该位点非父排除率为０．７１，个体识别率为０．９，杂合度为０．８５。

急性呼吸窘迫综合征患者OPRM1(A118G)基因多态性与预后的相关性

目的探讨急性呼吸窘迫综合征患者OPRM1(A118G)基因多态性与预后的相关性。方法 2015年9月到2020年6月选择在本院重症监护病房诊治的急性呼吸窘迫综合征患者98例作为研究对象,检测OPRM1(A118G)基因多态性,调查患者的一般资料、预后并进行相关性分析。结果 98例患者28 d死亡22例,死亡率为22.4%。死亡组的血清CRP、PCT含量与SOFA评分、APACHEⅡ评分都高于存活组(P<0.05)。死亡组的OPRM1(A118G) GG基因型与GG等位基因频率都高于存活组(P<0.05)。Spearman分析显示OPRM1(A118G) GG基因型、GG等位基因、SOFA评分、APACHEⅡ评分都与预后死亡存在相关性(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示OPRM1(A118G) GG基因型、GG等位基因、SOFA评分、APACHEⅡ评分都为导致患者预后死亡的重要危险因素(P<0.05)。结论急性呼吸窘迫综合征患者伴随有OPRM1(A118G)基因多态性,OPRM1(A118G) GG基因型、GG等位基因与SOFA评分、APACHEⅡ评分与患者预后死亡存在相关性。

不同民族疼痛敏感性与A118G基因多态性相关研究

目的:探讨不同民族疼痛敏感性与A118G基因多态性的相关性。方法:纳入满足标准的开腹手术患者150例,根治民族不同分成3组,其维吾尔族组50例,哈萨克族50例,汉族50例,采用聚合酶链式反应——限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,对OPRMI基因Al18G多态性位点进行检测分析,探讨不同民族Al18G基因多态性与热刺激疼痛的关系。结果:3组患者热痛阈(PPT)差异无统计学意义(P>0.05),维吾尔族患者热耐痛阈(PTO)总均值最低,且维吾尔族和哈萨克族患者PTO总均值均低于汉族患者,差异有统计学意义(P<0.05);维吾尔族患者G等位基因频率40%明显高于哈萨克族患者27%和汉族患者20%,差异有统计学意义(P<0.05),同组患者GG基因型携带者PTO和PPT均低于其他基因型携带者。结论:A118G基因多态性与不同民族疼痛敏感性相关,G等位基因突变可能是影响增加疼痛敏感性的直接因素。

OPRM1 A118G基因多态性对肝门部胆管癌患者舒芬太尼术后镇痛效应的影响

目的探讨OPRM1 A118G基因多态性对肝门部胆管癌患者舒芬太尼术后镇痛效应的影响。方法50例静吸复合全麻下行肝门部胆管癌患者,术后采用病人自控镇痛舒芬太尼注射液2μg·kg-^1·h^-1。记录患者术后24 h、48 h的舒芬太尼用量及不良反应,并检测患者OPRM1A118G基因型,评估不同基因型患者舒芬太尼的镇痛效应。结果50例患者中,AA、AG及GG基因型比例分别为44%、40%及16%,A、G等位基因的频率分别为64%和36%。与AA基因型患者24 h、48 h的舒芬太尼用量47.12±11.39μg,88.76±19.27μg,相比,AG基因型患者均明显增加60.02±21.45μg,103.92±27.66μg,差异均有统计学意义(P<0.040,P<0.009),GG基因型患者分别为77.93±31.87μg及121.90±29.88μg,差异亦有统计学意义(P=0.031,P=0.002),恶心、呕吐及呼吸抑制发生率三组间无差异。结论OPRM1 A118G基因多态性影响肝门部胆管癌患者对舒芬太尼的镇痛效果。