POMC基因5′上游近端片段的转录调控作用初探

目的 建立阿片黑皮质素原 (POMC)基因 5′上游近端转录调控体系并初步探讨其作用特点。方法 采用 DNA重组技术构建一系列受大鼠 POMC基因 5′上游近端不同长度片段介导的荧光素酶报告基因质粒 ,以lipofectam ine 包裹质粒转染垂体 ACTH瘤细胞系 (At T2 0 ) ,然后测定荧光素酶活性。结果 成功地构建了含POMC基因 - 34 / +6 3bp、- 16 5 / +6 3bp、- 32 3/ +6 3bp和 - 480 / +6 3bp片段的 4种报告基因质粒 ,其荧光素酶相对表达活性分别为 1、2 .1± 0 .3、3.3± 0 .3和 3.7± 0 .5 ,阳性对照为 4.8± 0 .8。结论 POMC基因的核心启动子比较弱 ,提示 POMC基因可能存在多个转录起始位点 :At T2 0细胞中 POMC基因持续表达的近端组织特异性调控元件主要集中于 - 34 / - 16 5 bp范围内。

R-(α)-甲基组胺对AtT20垂体瘤细胞Pomc及其转录因子表达的影响

[目的]研究R-(α)-甲基组胺[R-(α)-MeHA]对AtT20垂体瘤细胞Pomc及其转录因子表达的影响。[方法]以小鼠垂体瘤细胞(AtT20)为实验对象,分别采用0.02~12.5μmol/L R-(α)-MeHA干预AtT20细胞24h,通过MTT检测药物对细胞增殖的影响;采用0.1μmol/L R-(α)-MeHA干预AtT20细胞30min、1、2、4、8、12h等相应时间,运用ELISA方法检测细胞分泌至培养液的促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,RT-q PCR方法检测相关基因mRNA表达,Western blot方法检测相关蛋白表达。[结果]0.02~12.5μmol/L的R-(α)-MeHA对AtT20细胞的增殖无抑制作用更无毒性作用。0.1μmol/L R-(α)-MeHA对AtT20细胞ACTH分泌功能无明显作用。与对照组比较,0.1μmol/L R-(α)-MeHA干预AtT20细胞4h后,可增强阿片促黑素皮质素原(Pomc)基因表达、0.5μmol/L R-(α)-MeHA促进Pomc蛋白表达;此外0.1μmol/L R-(α)-MeHA干预AtT20细胞30min^12h不同时点后Pou1f1基因表达均显著上调,其中以4h最为明显,上调达3倍(P<0.05);同样,0.1μmol/L R-(α)-MeHA作用4h也显著促进Egr1基因表达上调约2倍(P<0.05);作用1h显著增强了Prop1基因表达,上调近4倍(P<0.05);干预4h、8h均显著上调Foxl2基因表达,上调约3倍(P<0.05),对Neurod1、Pitx1和Tbx19基因表达无明显影响。[结论]R-(α)-MeHA具有促进Pomc基因以及其转录因子Pou1f1、Egr1、Prop1和Foxl2的表达作用。