光合细菌沼泽红假单胞菌Atp2蛋白对水稻生长及抗逆的影响

【目的】探究光合细菌沼泽红假单胞菌PSB06 Atp2蛋白对水稻生长、防御酶活性及防御相关基因转录水平的影响,为生防菌在水稻上的推广应用提供理论依据。【方法】以水稻品种CO-39为试验材料,用0(蒸馏水,CK)、20和50μg/mL Atp2蛋白3种处理液对水稻种子和叶片进行处理,对生长14d的水稻体内叶绿素a/b和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量,以及过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱氨肽还原酶(GR)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)等水稻防御酶活性进行检测;运用实时荧光定量PCR检测水稻体内防御相关基因(OsWRKY70、OsLOX1、OsAOS2、OsPR1a、OsCHT1和OsPAL1)的转录水平。【结果】与CK相比,Atp2蛋白处理水稻叶片后,其体内叶绿素a/b显著(P<0.05,下同)或极显著(P<0.01,下同)升高,而处理种子后叶绿素a/b无显著变化(P>0.05);Atp2蛋白处理后水稻体内H_(2)O_(2)含量均升高,其中处理叶片后H_(2)O_(2)含量极显著升高;Atp2蛋白处理后水稻体内POD和CAT活性显著或极显著下降;Atp2蛋白处理后水稻体内SOD、GR和PAL活性均极显著升高;Atp2蛋白处理种子后水稻体内PPO活性显著或极显著升高,而处理叶片后PPO活性显著或极显著下降。Atp2蛋白处理后水稻防御相关基因OsWRKY70、OsLOX1、OsAOS2(50μg/mL Atp2蛋白处理水稻叶片外)、OsPR1a和OsCHT1表达均上调,其中OsWRKY70、OsLOX1和OsCHT1基因表达显著或极显著上调;Atp2蛋白处理种子后OsPAL1基因表达极显著上调,而处理叶片后OsPAL1基因表达极显著下调。【结论】沼泽红假单胞菌PSB06 Atp2蛋白对水稻有较好的促生抗逆效果,具有推广应用潜力。

ATP结合盒蛋白G超家族成员2在肺癌中的表达及意义

肺癌细胞的干性及耐药性是重要的恶性指标。ATP结合盒蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)是细胞表面的ATP结合盒蛋白家族的成员之一,依赖ATP可将药物排到细胞外。ABCG2定位于人多种肿瘤细胞的膜上,它的表达与肿瘤化学治疗多药耐药性紧密相关,目前被认为是肺癌干细胞鉴定的辅助群体标志物。此外,ABCG2的一些单核苷酸多态性与肺癌多药耐药性存在显著相关性。该文就最新ABCG2相关研究进展进行总结和归纳,重点介绍ABCG2基因的表达调控、ABCG2与肺癌干性的关系以及ABCG2的单核苷酸多态性与肺癌耐药性的相关性研究,以期为肺癌患者的临床治疗提供新的策略。

苓泽合剂对痛风性肾病大鼠模型ABCG2、GluT9及URAT1蛋白表达影响

目的考察苓泽合剂对痛风性肾病模型大鼠ATP结合盒转运蛋白G2(ATP-binding cassette protein2,ABCG2)、葡萄糖转运蛋白9(Facilitated glucose transporter 9,GluT9)及尿酸转运体1(Urate Transporter1,URAT1)蛋白表达的影响,探讨其治疗痛风性肾病的机理。方法 SD大鼠随机分为7组,分别为空白组,模型组,苯溴马隆片组(西药阳性对照),痛风定胶囊组(中药阳性对照药),苓泽合剂高、中、低剂量组(66.6、33.3、16.7 g·kg-1)。利用酵母粉联合腺嘌呤制备大鼠痛风性肾病模型,28 d后,测定其24 h尿量及尿蛋白、肾系数、血清尿酸、肌酐、尿素氮、尿激酶、β2-微球蛋白、胱抑素(Cys C)、尿N-乙酰-β-D葡萄糖苷酶(NAG)含量,蛋白质印迹(Western blot)法检测肾病组织中ABCG2、GluT9及URAT1蛋白表达。结果与模型组比较,苓泽合剂各组尿量、尿蛋白、肾系数、尿酸、肌酐、尿素氮、β2-微球蛋白、CysC及NAG减少,尿激酶增加,肾组织病理改变均有一定减轻,ABCG2蛋白的表达明显增加,GluT9及URAT1蛋白的表达明显降低。结论苓泽合剂对痛风性肾病大鼠具有较好肾保护作用,可能与其上调肾组织中ABCG2,下调GluT9及URAT1蛋白表达有关。

miR-144-3p通过调控ABCG2信号通路对膀胱癌细胞的影响

目的探究miR-144-3p通过调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)信号通路对膀胱癌细胞影响。方法选取2023年5月黑龙江省医院泌尿科实验室1株人膀胱癌T24细胞株为研究对象,细胞培养后接种6孔板中,将其随机分为A组、B组、C组,每组细胞均设置3个平行样本,每个样本细胞检测均设置3个复孔(每组共计12个样本量)。A组转染miR-144-3p模拟物,B组转染miR-144-3p抑制剂,C组转染无意义序列,另选正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞株为D组,以实时定量联合酶链式反应(quantification real-time polymerase chian reaction,qRT-PCR)法检测4组细胞中miR-144-3p表达情况,以CCK-8法检测4组细胞增殖活力,以Transwell检测细胞迁移数量,检测ABCG2通路蛋白表达情况;以双荧光素酶报告基因实验预测miR-144-3p与ABCG2靶向结合关系。结果转染前,T24细胞中miR-144-3p表达水平较SV-HUC-1细胞低,ABCG2水平较SV-HUC-1细胞高,差异有统计学意义(t=8.145、13.928,P<0.05);转染48 h时,miR-144-3p水平由低至高依次为B组、C组、A组,差异有统计学意义(P<0.05),ABCG2表达水平由低至高依次为A组、C组、B组,差异有统计学意义(P<0.05);转染48 h后,细胞增殖能力(A值)由低至高依次为A组、C组、B组,细胞凋亡率由低至高依次为B组、C组、A组,细胞迁移能力(个数)由低至高依次为A组、C组、B组,ABCG2表达水平由低至高依次为A组、C组、B组,差异有统计学意义(P<0.05);经在线数据库TargetScan预测,测得ABCG23’UTR与miR-144-3p存在结合靶点;共转染48 h时检测,3’-UTR-WT miR-144-3p组荧光素酶活性较3’-UTR-Wut miR-144-3p组低,差异有统计学意义(P<0.05);3’-UTA-WT NC组、3’-UTR-Mut NC组荧光素酶活性相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ABCG23’UTR与miR-144-3p存在结合靶点,miR-144-3p表达上调可抑制ABCG2表达,并抑制细胞迁移、增殖,促进细胞凋亡。

lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。

阿霉素诱导食管癌耐药细胞中ABCG2的表达及其意义

目的研究阿霉素(ADM)药物诱导食管癌细胞(Eca109)产生耐药细胞株(Eca109/ADM)中ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达及其意义。方法通过逐步增加培养液中阿霉素的浓度,长期筛选培养,建立食管癌耐药细胞株Eca109/ADM。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药细胞中ABCG2mRNA的表达量,流式细胞术(FCM)和蛋白印迹(Westernblot)方法检测耐药细胞中ABCG2蛋白的表达量及细胞定位。FCM方法检测Eca109/ADM细胞药物外排作用,MTT方法检测Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数。结果Eca109/ADM细胞与Eca109细胞相比,ABCG2表达显著性增高(P<0.05)。Eca109/ADM细胞药物外排作用较Eca109细胞增加,Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数为3.29。结论成功建立耐药细胞株Eca109/ADM。Eca109/ADM细胞是一个理想的耐药细胞模型。Eca109/ADM细胞中ABCG2的表达量增高,提示ABCG2参与食管癌细胞耐药的形成。

利多卡因下调ABCG2抑制人乳腺癌细胞的活性和耐药性

目的探究利多卡因体外下调ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP binding cassette transporter G family member 2,ABCG2)抑制人乳腺癌细胞的活性及顺铂耐药性的可能机制。方法选取MDA-MB-231、MCF-7细胞,使用CCK-8、EdU、TUNEL法染色验证利多卡因对细胞增殖活性、顺铂干预增敏作用,RT-PCR和Western印迹法检测利多卡因对ABCG2以及凋亡蛋白、耐药蛋白表达及PI3K/Akt蛋白磷酸化的影响;CCK-8法、TUNEL法验证过表达ABCG2对利多卡因联合顺铂干预乳腺癌细胞系增殖活性、凋亡率。结果0.5 mmol/L干预时乳细胞存活率及EdU阳性细胞数显著降低(P<0.05);与对照组相比,利多卡因组和顺铂组细胞存活率、Bcl-2表达显著降低,细胞凋亡率、Cleaved-PARP、Cleaved-caspase-3、Bax表达量显著升高,联合处理后变化更显著(P<0.05);利多卡因处理后,癌细胞系中ABCG2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,顺铂+利多卡因组ABCG2、P-gp、MRP1、MRP2蛋白表达显著降低(P<0.05);与顺铂组比较,利多卡因组细胞存活率、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与空质粒组比较,ABCG2过表达组细胞存活率、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论利多卡因可能通过抑制ABCG2表达及PI3K/AKT信号通路的激活抑制乳腺癌细胞增殖活性及提高对顺铂敏感性。

苦参碱对高表达ABCG2人耐药鼻咽癌细胞NKG2D配体表达的诱导作用

目的：探讨苦参碱对高表达三磷酸腺苷（ATP）结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）人耐药鼻咽癌细胞CNE2／DDP（简写作ABCG_2H^High CNE2／DDP）NKG2D配体表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的机制。方法：利用免疫磁珠技术分离ABCG_2^High CNE2／DDP细胞及NK细胞，流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率，LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG_2^High CNE2／DDP细胞对NK细胞的杀伤敏感性。结果：ABCG_2^High CNE2／DDP细胞分离后ABCG2表达率为（91．40±2．32）％，分选后NK细胞CD3^-CD16^＋CD56^＋细胞的纯度达90％以上，经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率，由药物处理之前的（2．92±0．33）％、（4．27±0．33）％、（5．80±0．62）％、（11．10±3．15）％、（7．75±1．14）％分别上升到（11．30±0．89）％、（14．29±2．61）％、（12．56±1．06）％、（43．24±4．43）％、（12．77±1．06）％。在效靶比为10：1、20：1时，NK细胞对苦参碱处理前后ABCG^2^High CNE2／DDP细胞的杀伤率分别为（15.32±1．34）％、（27．26±6．81）％及（28．53±1．37）％、（42．72±2．80）％。处理前后杀伤率有显著性差异（F=29．05，P=0．000）。结论：苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体（MICA/B、ULBP1-3），使肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强。

ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中的表达及意义

目的:探讨干细胞标志物ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中表达的意义.方法:应用免疫组化SP方法检测ABCG2在30例肝细胞性肝癌组织和8例癌旁肝硬化组织中的表达、分布,并采用细胞免疫荧光技术检测ABCG2在两种肝癌细胞株HepG2、PLC/PRF/5中的表达,采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例.结果:免疫组化中,ABCG2阳性染色定位于癌细胞胞膜,部分病例胞质也有分布.免疫组化显示ABCG2在肝细胞性肝癌组织和癌旁肝硬化组织中的表达阳性率分别为63.33%(19/30)和25%(2/8).ABCG2蛋白在HepG2、PLC/PRF/5这两个肝癌细胞株中均有表达,HepG2中,ABCG2阳性染色定位于细胞胞质中,而在PLC/PRF/5中,ABCG2阳性染色定位于细胞胞质和细胞膜上.PLC/PRF/5细胞株中,通过流式细胞仪能检测出表达ABCG2的细胞(P<0.05),而在HepG2细胞株中,通过流式细胞仪不能检测出表达ABCG2的细胞.结论:ABCG2在肝细胞性肝癌的发生发展过程中可能起着非常重要的作用,有可能成为临床治疗肝细胞性肝癌的分子靶标.

苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性

目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%。在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%。处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000)。结论苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

PC-3悬浮成球细胞中ABCG2表达及其对化学治疗耐药性的实验研究

目的:探讨人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3悬浮成球细胞中ATP结合盒膜转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达及其对化学治疗的耐药性。方法:体外无血清悬浮培养PC-3细胞,逆转录定量-PCR检测PC-3悬浮成球细胞中ABCG2 mRNA的表达,采用MTT法检测PC-3悬浮成球细胞对顺铂的耐药性,计算半数抑制浓度(IC50),并与PC-3贴壁细胞作对比。结果:PC-3悬浮成球细胞可以在无血清培养条件下生存并形成悬浮细胞球,PC-3悬浮成球细胞中ABCG2 mRNA的相对表达水平是PC-3贴壁细胞的33.98倍(P<0.05),其IC50是PC-3贴壁细胞的4.26倍(P<0.05)。结论:人PC-3悬浮成球细胞中ABCG2表达水平较高,该类细胞对化学治疗具有较强耐药性。

分子靶向药物诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达

目的:探讨不同分子靶向药物对高表达与低表达ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette super-family Gmember 2,ABCG2)的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(分别简写为ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP)表面NKG2D配体(natural killer group 2 member Dligands,NKG2DLs)表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的影响。方法:免疫磁珠法分选ABCG2highCNE2/DDP、ABCG2lowCNE2/DDP细胞及NK细胞。流式细胞术检测分选细胞的纯度和不同分子靶向药物(硼替佐米、索拉非尼、舒尼替尼)处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达率。LDH释放法检测不同药物处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性。结果:ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞表面ABCG2的表达率分别为(91.40±2.32)%和(1.70±0.24)%。分选后NK细胞中CD3-CD16+CD56+细胞的比例达90%以上。药物处理前,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3呈弱表达;经不同分子靶向药物处理后,5种NKG2DLs的表达率均明显上升(P<0.01),以舒尼替尼处理后NKG2DLs的表达率升高最明显。随着NKG2DLs表达的上调,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性也随之升高。结论:不同分子靶向药物可诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,以舒尼替尼的诱导作用最强,且肿瘤细胞NKG2DLs的表达与其对NK细胞杀伤敏感性之间存在线性关系。

ABCG_2在肝细胞癌组织中的表达及临床病理意义

目的探讨干细胞标记物ABCG2(ATP结合转运蛋白G超家族成员2)在肝细胞癌组织中表达的意义。方法应用免疫组化SP法检测ABCG2在130例肝细胞癌组织和相应癌旁肝硬化组织中的表达、分布情况。结果免疫组化显示ABCG2阳性染色定位于癌细胞的胞膜,部分病例胞浆也有表达。ABCG2在肝细胞癌组织和相应癌旁肝硬化组织中的表达阳性率分别为83%(108/130)和17%(22/130)。ABCG2的表达与患者性别、年龄、临床分期、是否有乙肝后肝硬化、肿瘤大小均未显示明显相关性(P>0.05)。与无脉管癌栓组比较,有脉管癌栓组ABCG2呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ABCG2在肝细胞癌的发生发展过程中可能起着一定的作用,它有可能成为肝癌干细胞标记物之一。

ABCG2在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用研究

目的研究ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用,对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌治疗提供依据。方法培养人肺腺癌吉非替尼敏感细胞株A549及吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞系A549/GR,A549/GR细胞的耐药性检测应用MTT法。用蛋白质印迹法(Western Blot)检测被吉非替尼作用的A549/GR细胞及A549细胞中的ABCG2、p-AKT蛋白的表达情况。分别加入磷醇酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及抑制剂LY294002,分析作用于上述两种细胞的p-AKT、ABCG2蛋白表达情况。应用流式细胞仪测定A549及A549/GR细胞株中的ABCG2外排情况。收集2015年4月～2017年4月我院收治的非小细胞肺癌患者及健康人血清,分为非小细胞肺癌非耐药组(20例)、非小细胞肺癌吉非替尼耐药组(20例)和健康者组(20例)。应用ELISA法检测三组的ABCG2表达。结果随着剂量的增加,吉非替尼对A549细胞及A549/GR细胞的抑制作用均增强(P<0.05)。A549/GR的耐药指数为13.4。Western Blot检测耐药相关蛋白,结果显示,耐药细胞A549/GR中的ABCG2和p-AKT均高于亲代细胞A549。IGF-1作用的A549细胞,p-AKT、ABCG2蛋白表达均提高(P<0.05)。LY294002作用A549/GR细胞,p-AKT、ABCG2均下调(P<0.05)。IGF-1作用A549细胞后,较未加入激活剂的A549细胞,其外排作用增强(P<0.05)。LY294002作用A549/GR细胞后,较未加入激活剂的A549/GR细胞,其外排作用减少(P<0.05)。健康人的ABCG2表达明显低于非小细胞肺癌非耐药组患者(P<0.05),非小细胞肺癌吉非替尼耐药组患者的ABCG2表达均高于非小细胞肺癌非耐药组患者及健康人(P<0.05)。结论在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中ABCG2起到了重要的作用,逆转ABCG2介导的NSCLC靶向耐药主要通过调节PI3K/AKT信号通路。

奥沙利铂、氟尿嘧啶筛选前后胃癌SGC7901细胞株中CD44v6/ABCG2表达变化

目的观察奥沙利铂、氟尿嘧啶筛选前后胃癌SGC7901细胞株中CD44v6/ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)表达变化。方法取对数生长期的胃癌SGC7901细胞株,分别用0、4、12、20、28、36μg/m L的奥沙利铂及0、30、50、70、90、110μg/m L的氟尿嘧啶进行干预,MTT法得到奥沙利铂、氟尿嘧啶作用于实验细胞株的最适浓度分别为30、28μg/m L。以最适浓度作用于实验细胞株分离出胃癌干细胞,以免疫细胞化学法、半定量RTPCR法、Western blotting法检测以上两种药物筛选前后细胞株中CD44v6/ABCG2的阳性表达率。再以单细胞悬浮成瘤实验、免疫细胞化学法检测次代干细胞级别的实验细胞株中CD44v6/ABCG2的阳性表达率。结果奥沙利铂、氟尿嘧啶筛选的干细胞级别的实验细胞株中CD44v6/ABCG2阳性表达率明显上调,能在低浓度血清培养基中形成悬浮肿瘤球,免疫细胞化学检测其次代细胞中CD44v6/ABCG2的阳性表达率又回到筛选前水平。结论奥沙利铂、氟脲嘧啶筛选后的细胞株中CD44v6/ABCG2阳性表达率明显上调,细胞株具有干细胞的特性。

稳定表达ABCG2细胞模型的建立及其在筛选ABCG2抑制剂中的应用

本研究构建了一种稳定表达ATP结合盒转运蛋白2(ATPbinding cassette subfamilyGmember 2,ABCG2)并可用于筛选ABCG2抑制剂的细胞模型。首先,利用脂质体lipo3000将表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2转染至HEK293细胞,经G418筛选阳性克隆株后,采用qRT-PCR与Western-blot方法进行ABCG2稳转细胞株(稳转株)的鉴定;随后,利用差速离心法提取膜囊泡,通过14C-尿酸同位素摄取实验筛选ABCG2抑制剂。结果表明,ABCG2稳转株的mRNA及蛋白质表达水平分别为野生型的1717.5倍和2.64倍;经其提取的囊泡摄取14C-尿酸的能力为对照囊泡的3.73倍。利用上述工具细胞,研究评价了临床常用的降尿酸药物对ABCG2的抑制活性。结果显示,苯溴马隆抑制ABCG2的IC50值为(3.45±1.09)μmol/L,RDEA3170抑制ABCG2的IC50为(9.90±2.11)μmol/L。综上所述,本实验成功构建了ABCG2抑制剂体外筛选模型,并首次发现RDEA3170具有ABCG2抑制作用。

miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路对胃癌细胞侵袭和迁移的影响

目的研究miR-144-3p靶向调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding transporter G family member 2,ABCG2)对胃癌(gastriccancer,GC)HGC-27细胞侵袭和迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法通过qRT-PCR检测人GCHGC-27细胞株和人胃黏膜上皮GES-1细胞株中miR-144-3p和ABCG2的表达情况;通过靶基因预测软件预测miR-144-3p和ABCG2靶向结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向结合关系;通过qRT-PCR检测miR-144-3p mimic或miR-144-3p inhibitor转染GC细胞后miR-144-3p及ABCG2的表达水平;通过明胶酶谱实验检测对转染ABCG2 siRNA的GC细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)活性的影响;通过Transwell侵袭和迁移实验检测转染miR-144-3p mimic、miR-144-3p inhibitor、ABCG2 siRNA对GC细胞侵袭和迁移能力的影响.结果与正常细胞组人胃黏膜上皮GES-1细胞株相比, GC细胞组人GCHGC-27细胞株中miR-144-3p的表达量明显降低, ABCG2的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);靶基因预测miR-144-3p和ABCG2 3’UTR存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实了miR-144-3p和ABCG2靶向结合关系;与对照组相比,转染miR-144-3p mimic组GC细胞中miR-144-3p的表达明显升高, ABCG2的表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),转染miR-144-3p inhibitor则表现出相反的作用;明胶酶谱实验检测结果表明ABCG2 siRNA转染可显著抑制GC细胞中MMP-2和MMP-9蛋白活性,抑制GC细胞侵袭和迁移能力,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 MiR-144-3p能够抑制GC细胞侵袭和迁移能力,其作用机制与靶向调控ABCG2-MMP-2/9信号通路有关.

海绵来源的smenospongine通过抑制非小细胞肺癌细胞中的EGFR-Akt-ABCG2信号通路抑制顺铂耐药

目的·研究海绵来源的倍半萜胺醌类化合物smenospongine(SME)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549及其顺铂耐药株A549/DDP的抗肿瘤活性及作用机制。方法·利用2种细胞(母本细胞A549和顺铂耐药细胞A549/DDP)作为研究模型,采用CCK-8实验检测2株细胞对一线化学治疗药物的半抑制浓度(half maximum inhibitory concentration,IC50)以验证A549/DDP多药耐药的情况;通过克隆形成实验检测SME对母本及耐药细胞增殖的影响,同时采用Transwell侵袭实验以及蛋白质印迹法(Western blotting)检测SME对A549/DDP上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响;应用Western blotting和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测2株细胞中受到SME调节的多药耐药基因的蛋白和mRNA表达水平,探讨其耐药分子机制;进一步采用Western blotting检测SME对多药耐药蛋白ATP结合盒蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)上游蛋白的影响;通过流式细胞技术检测SME对母本细胞和顺铂耐药株细胞周期的影响,同时应用TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-end labeling)染色以及Western blotting检测SME对2株细胞凋亡的影响。结果·与母本细胞相比,顺铂耐药株A549/DDP细胞对顺铂表现出显著耐药性,同时对多种临床一线肺癌化学治疗药物表现出多药耐药的特征;SME显著抑制A549和A549/DDP的增殖、克隆形成,同时抑制耐药株的EMT;通过筛选多药耐药蛋白发现,SME显著下调ABCG2的蛋白以及mRNA表达;SME可抑制ABCG2上游的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt)信号通路,进而下调ABCG2,并上调FoxO1;SME诱导母本细胞和耐药株细胞周期阻滞在G0/G1期,同时诱导2株细胞凋亡。结论·SME作为抑制NSCLC耐药的新小分子化合物通过抑制EGFR-Akt信号通路,下调ABCG2蛋白、上调FoxO1蛋白,进而抑制A549和A549/DDP的细胞活力,抑制耐药株的EMT,最终促进细胞凋亡。

SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性

目的分析SCNN1B基因、Yes相关蛋白1(YAP1)、ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)在非小细胞肺癌组织中的表达、相关性及联合检测对此病的预测价值。方法选取2019年7月—2020年7月秦皇岛市第一医院收治的120例非小细胞肺癌患者,取癌组织标本,另外纳入通过手术切除的肺组织良性病变标本120例,分析SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中的表达、相关性及三者联合检测对非小细胞肺癌的预测价值。结果与肺良性病变组织相比,癌组织中SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量均较高(P<0.05)。SCNN1B、YAP1、ABCG2表达与非小细胞肺癌患者性别、年龄、病理类型无关,差异无统计学意义(P>0.05);SCNN1B、YAP1、ABCG2表达与非小细胞肺癌患者肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、分化程度相关,肿瘤直径≥3cm、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移、中低分化患者SCNN1B、YAP1、ABCG2表达量较高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,SCNN1B与YAP1之间呈正相关(r=0.301,P<0.001);SCNN1B与ABCG2之间呈正相关(r=0.277,P=0.002);YAP1与ABCG2之间呈正相关(r=0.372,P<0.001)。ROC曲线分析SCNN1B、YAP1、ABCG2对非小细胞肺癌的预测价值显示,与SCNN1B、YAP1、ABCG2单项相比,三项联合对非小细胞肺癌的预测价值较高(P<0.05)。结论SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小细胞肺癌组织中表达升高,且三者呈正相关,联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值较高。

ATP结合盒家族G蛋白亚家族2单核苷酸多态性与高尿酸血症的关系

目的 研究在不同年龄、性别中ATP结合盒家族G蛋白亚家族2（ABCG2）单核苷酸多态性rs2231142（C〉A）与高尿酸血症的相关性.方法 选北京协和医院职工体检人群为研究对象,男性血尿酸〉416.4μmol/L、女性血尿酸〉359.6μmol/L者纳入高尿酸血症组,另选血尿酸水平正常者为对照组.采用扩增耐突变系统-聚合酶链反应检测ABCG2基因型,分析ABCG2 rs2231142与高尿酸血症的相关性,以及基因与性别的交互作用.结果 高尿酸血症组ABCG2 rs2231142A等位基因频率高于对照组（38.38%比26.62%,P〈0.001）,OR=2.89（95%CI 1.91-4.37,P〈0.001）,调整高血压、高血糖、高血脂后,OR=2.99（95%CI 1.94-4.62,P〈0.001）.亚组分析显示,男性高尿酸血症的相对风险高于女性,OR值分别为3.83（95%CI 2.03-7.24,P〈0.001）、2.30（95%CI 1.32-4.00,P=0.003）.年龄≥55岁者,男性和女性ABCG2 rs2231142 A等位基因携带者发生高尿酸血症的相对风险相仿;而年龄〈55岁者,男性ABCG2 rs2231142 A等位基因携带者发生高尿酸血症的相对风险高于女性,OR值分别为4.11（95%CI 1.92-8.79,P〈0.001）、1.73（95%CI 0.80-3.76,P=0.165）,交互性分析未达统计学意义.结论 我院职工体检人群中,ABCG2 rs2231142 A等位基因是发生高尿酸血症的独立危险因素.