苍术酮通过调节Nrf2-NLRP3通路减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤实验研究

目的研究苍术酮调节核因子NF-E2相关因子(Nrf2)-NLRP3通路对LPS诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用。方法构建ALI小鼠模型,实验分为对照组、模型组、地塞米松组及苍术酮低、中、高剂量组。ELISA测定各组小鼠血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平;通过测定肺组织湿/干质量比重(W/D),评估其水肿程度,检测肺组织抗髓过氧化物酶抗体(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二酮(MDA)含量以评估其体内抗氧化损伤的作用;HE染色法检查肺损伤情况,并进行评分;RT-qPCR测定各组小鼠肺组织Nrf2、HO-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA水平。结果苍术酮对LPS诱导的小鼠ALI具有较好的保护作用,可降低小鼠血清及肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和W/D比值、肺组织MPO、MDA及NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA水平,提高血清IL-10水平及肺组织GSH-Px、SOD及Nrf2、HO-1 mRNA水平,明显改善肺组织学病理表现,降低肺组织病理评分,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论苍术酮可通过调节炎症因子及氧化应激以缓解ALI小鼠肺损伤,其机制可能与调节Nrf2-NLRP3通路有关。

HPLC法测定参苓白术散中三种成分的含量

目的:建立参苓白术散中苍术酮、白术内酯Ⅰ和甘草苷的定量检测方法。方法:采用HPLC法,以C_(18)色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),乙腈作为流动相A,测定了参苓白术散中苍术酮、白术内酯Ⅰ、甘草苷的含量。结果:苍术酮在0.0082~0.1308 mg/mL浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率97.8%(RSD=0.7%,n=6);白术内酯Ⅰ在0.0016~0.0256 mg/mL浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率103.4%(RSD=1.8%,n=6);甘草苷在0.0153~0.2444 mg/mL浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率104.2%(RSD=0.5%,n=6)。结论:本研究成功建立了参苓白术散中苍术酮、白术内酯I和甘草苷的检测方法,且方法专属性强,精密度、重复性良好。

苍术抗流感病毒有效成分的筛选

目的从苍术中筛选抗流感病毒的有效成分。方法采用水提、超临界二氧化碳流体(SFE-CO2)提取,并利用硅胶柱层析法进行成分分离,得到苍术的各种提取物和有效成分单体,再用流感病毒甲型H3N2、H5N1(禽流感病毒)和乙型流感病毒进行狗肾传代细胞株(MDCK)组织培养筛选。结果含苍术酮的苍术SFE-CO2提取物及苍术酮,对流感病毒有杀灭作用;而苍术素、苍术的水提液对流感病毒无抑制作用。结论苍术酮是苍术中抗流感病毒的有效成分。

微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮

采用微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮。采用美国Micro-tech Ultra plusⅡTM微管柱通用型二元梯度高效液相色谱仪和Microsil C18微管色谱柱(150mm×1.0mm),以甲醇-乙腈-水(A相体积比为90∶5∶5;B相体积比为55∶5∶40)为流动相,梯度洗脱,流速50μL/min,在220nm波长下检测。在上述色谱条件下,3种组分分离良好,在相应的进样质量范围内具有良好的线性关系。白术内酯Ⅲ、Ⅰ和苍术酮的加标回收率分别为96.86%,97.13%和98.06%;相对标准偏差分别为1.63%,1.31%和0.39%。该法简便、快捷,能够用于白术的质量控制。

HPLC法同时测定白术药材中白术内酯Ⅰ等4种有效成分的含量

目的建立同时测定白术药材中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮含量的HPLC法。方法采用Dikma Diamonsil C8色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长为220和275 nm,流速为1.0 m L·min-1,柱温为30℃。结果白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和苍术酮质量浓度分别在1.304～3.912 mg·L-1、1.126～3.378 mg·L-1、1.740～5.220 mg·L-1和47.60～142.8 mg·L-1内线性关系良好。平均加样回收率分别为96.9%、95.4%、96.7%和95.8%,RSD分别为1.2%、1.7%、1.6%和1.3%（n=9）。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于白术药材的质量控制。

白术挥发油中苍术酮氧化反应的动力学

利用GC/MS法跟踪分析了苍术酮纯品的分解过程,得到5种分解产物——与文献报道的苍术酮转变成2种产物存在较大的差异;研究了苍术酮的氧化反应机理:苍术酮与水易进行1,4加成反应,生成半羧醛羟基。水的存在使半羧醛羟基开环并导致C—O键断裂,生成羰基,羰基进一步被氧化成羧基。由于羧基上的碳原子为sp2杂化,羟基可从杂化轨道平面两侧进攻羧基,并与羧基进行分子内脱水反应,故而可生成白术内酯Ⅰ及表白术内酯Ⅰ,而白术内酯Ⅰ的7位C上的—H很活泼,易被—OH取代而生成白术内酯Ⅲ,白术内酯Ⅲ不稳定,易使分子内脱水生成白术内酯Ⅱ。此外,白术内酯Ⅲ与白术内酯Ⅰ可进行分子间脱水反应,生成双白术内酯。通过定量分析纯品和白术原药材中苍术酮在氧化过程中的相对含量,计算反应的动力学参数,得出苍术酮纯品的反应速率方程为Rate1=k′1[x]1.84,活化能为58.05kJ/mol;原药材中苍术酮的反应速率方程为Rate2=k′2[x]1.89,活化能为63.17kJ/mol。

TLCS法测定白术炮制前后苍术酮的含量

目的:比较白术药材炮制前后苍术酮的含量变化。方法:采用薄层扫描法比较3批不同产地白术炮制前后苍术酮的峰面积变化。结果:3批不同产地的白术麸炒品中苍术酮的含量均低于生品。结论:炮制后苍术酮的含量有所降低,为白术炮制前后质量控制提供依据。

改良的白术药材薄层色谱鉴别研究

目的:建立新的白术薄层色谱鉴别方法。方法:以苍术酮、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ为对照品,分别以石油醚(60～90℃)与乙酸乙酯(10∶0.2)和正己烷-醋酸乙酯(3.5∶1)为展开剂,进行二次展开,10%硫酸乙醇显色后在波长365nm下检识。结果白术药材薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。结论该方法准确可靠,能够为白术的质量控制提供参考。

苍术酮对急性肺损伤小鼠血清细胞因子和TLR7信号通路的影响

目的观察苍术酮对急性肺损伤(ALI)小鼠血清细胞因子和TRL7信号通路的影响。方法通过呼吸道感染甲型流感病毒,诱导小鼠ALI模型。将144只雄性SPF级ICR小鼠,随机分为正常组24只,模型组120只。模型组在乙醚麻醉下通过鼻内接种IAV诱导感染,这种病毒在小鼠中引起肺炎,然后随机平均分为5组,每组24只,分别为模型对照组,利巴韦林治疗组,苍术酮低剂量、中剂量和高剂量治疗组。在造模2 h后,阳性药物组给予利巴韦林50 mg/kg灌胃给药,苍术酮高、中、低剂量治疗组分别给予苍术酮40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg灌胃给药,每日1次,连续5 d。5 d后处死动物,采集血清以及肺组织样本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IFN-β、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;PCR法测定小鼠肺组织中TLR-7、My D88、TRAF6、IFN-βm RNA表达水平;Western blot法检测NF-κB p65蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠血清中IFN-β、IL-6、TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较,利巴韦林组和苍术酮组IL-6、TNF-α、IL-1β炎症因子水平均显著下降,而IFN-β水平显著升高(P<0.01),苍术酮高、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组相比,苍术酮治疗组TLR7及其下游基因My D88,TRAF6和IFN-β的m RNA表达显著上调(P<0.01)。此外,Western印迹分析结果显示,模型对照组的核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达水平与正常组相比显著增加(P<0.01);与模型组相比,利巴韦林及苍术酮各剂量组的蛋白表达显着减少(P<0.01)。结论苍术酮能够明显减轻ALI小鼠的肺部炎症,其作用机制依赖于TLR7信号通路的激活,诱导I型干扰素的产生和对NF-κB p65表达的抑制。

白术微管液相色谱含量测定方法及在种质资源调查中的应用

目的:采用微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮,并应用于全国白术种质资源调查。方法:采用微管液相色谱仪,Microsil C18微管色谱柱(150mm×1.0mm),以甲醇-乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速:50μL/min,检测波长220nm,采用该方法,对全国20多个地区的白术种质样品进行了测定。结果:建立了同时分离白术中的白术内酯Ⅲ、Ⅰ和苍术酮的测定方法,测定了全国主产区白术种质的含量,初步得到了优质种源。结论:该方法准确、简便,在白术种质资源调查中起到了很好的作用。

组织培养白术和天然白术化学成分的比较

自术(Atractylodes macrocephala Koidz.)是菊科苍术属药用植物,其根茎可以入药,有补脾、健胃、和中化湿等功效。我们曾报道了白术侧芽组织培养的方法。但是,白术侧芽组织培养试管苗长成的白术根状茎的化学成分与天然白术比较是否有变化,国内外没有报道。为配合白术组织培养技术的推广和运用,我们除按中国药典(1985年版—

高效液相色谱法测定白术挥发油中苍术酮的含量

目的建立白术挥发油中主要活性成分苍术酮的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,Alltima HPC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温为室温,流动相为甲醇-水(95∶5),流速:1.0mL·min-1,检测波长为220nm。结果在上述色谱条件下,苍术酮在0.24～2.04μg具有良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.62%,RSD=1.4%。结论该方法简便、准确、快速,可用于白术挥发油及其制剂的质量控制。

白术挥发油中苍术酮的稳定性研究

目的:考察不同条件下白术挥发油中苍术酮的稳定性。方法:采用高效液相色谱法测定挥发油中苍术酮及白术内酯含量,以苍术酮及白术内酯的相对含量作为衡量苍术酮变化的指标。结果:白术挥发油纯品中的苍术酮在室温日光条件下,第6天分解率达到12%以上,在室温避光条件下基本不变。挥发油吐温-80溶液在室温避光条件下,苍术酮在第5天的分解率达到30%以上,在冷冻避光条件下基本不变。挥发油中的苍术酮在人工胃液及人工肠液中均不稳定,其变化符合一级动力学过程。结论:在不同条件下,白术挥发油中苍术酮的稳定性不同,稀溶液中48小时内比较稳定,苍术酮较其纯品稳定性好。

钴-60射线辐照对白术药材中4种有效成分的影响研究

目的:研究不同剂量钴-60(60Co)射线辐照对白术药材4种有效成分含量的影响。方法:采用HPLC-DAD梯度洗脱-波长切换法;以Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,柱温35℃,检测波长为220 nm(白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及苍术酮)和275 nm(白术内酯Ⅰ),进样量为10μl。分别选择剂量为5,8,10 k Gy对白术药材进行辐照,比较辐照前后4种有效成分含量的变化。结果:白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、苍术酮分别在0.011~0.217μg,0.011~0.212μg,0.012~0.243μg,0.094~1.885μg范围内有良好线性,平均加样回收率分别为101.3%,100.6%,100.7%和100.5%。经过5,8,10 k Gy辐照后,白术药材所含的白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及苍术酮均有变化。超过5 k Gy后,苍术酮辐照前后含量变化差异有统计学意义(P<0.05)。结论:所建立的白术有效成分测定方法回收率高,重复性好,简单实用,可用于白术的质量控制。在60Co辐照剂量不超过5k Gy时,各成分变化不显著,可为白术药材辐照灭菌手段提供参考。

正交试验法优选白术挥发油提取工艺

目的苍术酮的提取工艺。方法以苍术酮含量为检测指标,采用L9(34)正交试验,考察固液比、提取时间和提取温度3个影响因素,采用高效液相色谱法进行苍术酮含量测定。结果苍术酮的最佳提取工艺条件为提取温度75℃,固液比1∶16,提取时间3h。结论用正交试验法优选得到的工艺稳定、方法可行。

白术挥发油脂质体的制备及质量考察

目的制备白术挥发油脂质体并考察其性质。方法采用薄膜分散法制备白术挥发油脂质体,正交设计优化处方,低温高速离心法分离脂质体和游离药物,HPLC测定脂质体的包封率,并测定其zeta电位和粒径,考察其稳定性。结果白术挥发油脂质体包封率为62.7%,zeta电位为-36.65 mV,平均粒径为206.9 nm。结论薄膜分散法制得的白术挥发油脂质体包封率高,粒径分布均一,稳定性较好。

白术挥发油提取工艺的优化及其化学成分研究

目的:确定水蒸气蒸馏法提取白术挥发油的最佳工艺并研究其化学成分。方法:采用正交试验设计对提取条件进行优化,并通过气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析挥发油化学成分。结果:以得油率为指标,结合经济省时的原则评价其最佳工艺为浸泡时间1 h,蒸馏时间5 h,加水量5倍,得油率为4.23‰。GC-MS分析所得挥发油,共分离出47个成分,鉴定了其中32个成分。结论:本实验优化了水蒸气蒸馏法提取白术挥发油的提取工艺,并通过GC-MS分析了所提挥发油的化学成分,为白术挥发油的开发利用提供可靠参考。

高效液相色谱法测定不同产地麸炒白术中苍术酮、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量

目的采用高效液相色谱法测定不同产地麸炒白术中苍术酮、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量,对不同产地麸炒白术进行质量评价。方法色谱柱为Dikma Diamonsil C8(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈(梯度洗脱),流速1.0 mL/min,检测波长为220和275 nm,柱温30℃,进样量20μL。结果在上述色谱条件下,苍术酮、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ浓度分别在47.600~142.800、1.304~3.912、1.126~3.378、1.740~5.220 mg/L内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.98%、99.63%、99.15%、99.79%,相对标准偏差(RSD)分别为0.03%、1.70%、1.57%、1.10%。结论该方法分离度好、专属性强、重现性好、简单易行,可作为不同产地麸炒白术饮片的质量控制方法;测定结果表明,浙江磐安产麸炒白术饮片中4种成分含量相对较高。

不同采收时期白术的质量测定

目的:探讨不同采收时期白术的质量,并进行统计及比较。方法:选取浙江产白术,将其根据采收时期的不同进行分组,并根据其采收时期及生长年限,应用高效液相色谱法对白术进行白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ及苍术酮含量的测定,并将测定结果进行统计及比较。结果:经研究比较发现,随着年份的增加,白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ及苍术酮的含量均呈现上升趋势,而且11月上旬采摘的白术的白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ及苍术酮的含量高于其他月份,经比较,P均<0.05,差异均有统计学意义。结论:不同采收时期白术的质量明显不同,购买时以3年生11月上旬采摘者质量最佳。

关苍术根茎中苍术酮含量及变化规律研究

以不同生长年限和环境条件下的关苍术根茎为试材,分析苍术酮的含量、变化规律以及与高温耐性的关系,为耐高温关苍术育种及提升有效成分含量提供理论指导。结果表明:苍术酮含量随着关苍术营养生长逐渐增加,进入生殖生长期出现小高峰,随着生殖生长期的进程其含量又出现减少的趋势,最后随种子成熟又逐渐回升;适当的高温逆境可促使关苍术根茎中苍术酮含量的增加,其幅度为3~4 mg·g^(-1);3年生关苍术所含的苍术酮含量显著高于2年生关苍术,二者相差7~8 mg·g^(-1)。