Chemical Synthesis and Cloning of Overlapping Concatenated Human Atrial Natriuretic Factor Gene with Gene Engineering

Eight oligonucleotide fragments were designed with the aid of a computer and synthesizedaccording to the amino add sequcnce of human atrial natriuretic factor(ANF).By means of an-nealing and ligation,these fragments were assembled into an overlapping concatenator consisting oftwo ANF genes ligated by TGATG for termination and initiation of translation.Theconcatenator was omserted into plasmid pRC23 and the recobinant DNA was transformed into E.coli strain TAP106.Analysis by restriction enzyme mapping,hybridization and DNA sequenongshowed that the orientation and reading frame of the gene were correct.

The dynamic changes of angiotensin Ⅱ and atrial natriuretic factor levels in hypothalamus and infarct volume of rats with focal cerebral ischemia

Changes of hypothalamus angiotensin Ⅱ (A Ⅱ) and atrial natriuretic factor (ANF) levels and infarct volume were measured in hypertension and normotension rats at different time after focal cerebral ischemia. The results showed that the hypothalamus ANF lev

血清PDGF联合BNP预测非体外循环冠状动脉搭桥术患者术后新发心房颤动的临床价值

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)联合血清脑钠肽(BNP)预测非体外循环冠状动脉搭桥术(OPCABG)患者术后新发心房颤动(房颤)的临床价值。方法选取2021年1月至2023年1月于邯郸市中心医院心血管外科收治的197例择期行OPCABG术的患者作为研究对象。所有患者于术前检测血清PDGF水平(酶联免疫吸附法)和血清BNP水平(放射免疫法)。根据患者术后住院期间是否发生房颤分为新发房颤组(n=37)和非新发房颤组(n=160)。采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清PDGF、BNP对OPCABG患者术后是否新发房颤的预测价值;采用多因素Logistic回归分析探讨OPCABG患者术后新发房颤的影响因素。结果新发房颤组血清BNP、PDGF水平高于非新发房颤组(P<0.05)。新发房颤组患者年龄、右冠状动脉狭窄率、术后主动脉内球囊反搏(IABP)辅助比例、机械通气时间、空腹血糖(FPG)、左心房容积指数(LAVI)均高于非新发房颤组,左室射血分数(LVEF)低于非新发房颤组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,右冠状动脉近段狭窄≥75%(OR=2.090,95%CI:1.495~2.922)、BNP≥287.64 pg/ml(OR=2.746,95%CI:1.798~4.193)、PDGF≥398.57μg/L(OR=2.601,95%CI:1.765~3.835)是OPCABG患者术后发生房颤的影响因素(P<0.05)。血清BNP、PDGF预测OPCABG患者术后新发房颤的AUC(95%CI)分别为0.781(0.756~0.818)、0.825(0.797~0.861),两者联合预测的AUC(95%CI)为0.901(0.874~0.935)。结论OPCABG术后新发房颤患者血清PDGF、BNP水平均升高,二者可作为OPCABG患者术后新发房颤的预测指标,且联合检测预测效能更高,可为临床早期治疗提供依据。

ANF基因转染人血管平滑肌肉瘤细胞及其表达的实验研究

通过对体外传代培养的人血管起源平滑肌肉瘤细胞进行直接和脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的人心钠素（ＡＮＦ）基因表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ转染，并以非同位素地高辛标记的ＲＮＡ分子探针对转染细胞中的ＡＮＦｍＲＮＡ水平进行ＲＮＡＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测，同时利用放射免疫方法测定转染细胞培养上清中的ＡＮＦ含量。结果显示，与未经脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ直接进行细胞转染及低浓度脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ进行细胞转染相比，脂质体Ｔｆｘ－５０与ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ以３∶１（荷质比）进行包裹，并当ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ在细胞数为１０５达到２．０μｇ时，细胞中ＡＮＦｍＲＮＡ表达阳性，转染细胞培养上清中ＡＮＦ含量达到５８．０ｎｇ／Ｌ。表明通过脂质体Ｔｆｘ－５０介导可以提高ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ的转染效率，并使细胞表达ＡＮＦ显著增加。

ACI患者治疗前后血浆ET-1与血清ANF、BNP和TXB_2检测的临床意义

目的:探讨了急性脑梗死(ACI)患者治疗前后血浆ET-1和血清ANF、BNP和TXB2水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析对33例ACI患者进行了治疗前后血浆ET-1和血清ANF、BNP和TXB2检测,并与35名正常人作比较。结果:ACI患者在治疗前血浆ET-1、血清ANF、BNP和TXB2水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),经治疗后3个月与正常人组比较仍有差异(P<0.05)。结论:检测ACI患者治疗前后血浆ET-1和血清ANF、BNP和TXB2水平的变化对疗效观察、预后判断均具有重要的临床价值。

心力衰竭患儿治疗前后血清APN、BNP、ANF检测的临床意义

目的:探讨了心力衰竭患者治疗前后血清APN、BNP、ANF水平的变化及临床意义。方法:应用放免法和酶联法对30例心力衰竭患者进行了治疗前后血清APN、BNP和ANF检测,并与35名正常健康人作比较。结果:心力衰竭患者在治疗前血清APN水平非常显著地低于正常人组(P<0.01),而血清BNP、ANF水平则非常显著地高于正常人组(P<0.01),经治疗1个月后与正常人组比较仍有显著差异(P<0.05)。结论:检测心力衰竭患者血清APN、BNP和ANF水平的变化对疗效观察、预后判断均具有重要的临床价值。

血浆ET与ANF在急性胰腺炎早期发病中的作用及意义

目的:探讨内皮素(ET)与心钠素(ANF)在急性胰腺炎(AP)早期发病中的作用及临床意义。方法:采用放射免疫分析测定急性发病期(24～48)h轻症急性胰腺炎(MAP)35例,重症急性胰腺炎(SAP)17例和正常对照组(NC)30例的血浆内皮素与心钠素的含量。Imrie评分>3分,APACHEⅡ评分≥8分者为SAP。结果:SAP患者Imrie评分和APACHEⅡ评分明显高于MAP患者(P<0.05,P<0.01)。SAP患者血浆ET水平(59.20±10.69)pg/ml明显增高,MAP患者血浆ET水平(34.20±9.44)pg/ml明显降低,两组之间比较以及与NC组比较具有非常显著差异(P<0.001)。SAP和MAP患者血浆ANF分别为(155.76±34.24)pg/ml,(181.59±58.15)pg/ml,与NC组(165.51±57.16)pg/ml比较无明显变化(P>0.05)。结论:ET可能参与了SAP早期胰腺微循环障碍,对胰腺组织具有内源性损伤作用。提示早期给予拮抗ET或ET-A受体的药物,可能有利于减轻胰腺组织损害,改善胰腺微循环,防止胰腺出血坏死性改变。ANF可能对AP早期的胰腺血循环无明显影响。

CHF患者cAMP cGMP和NE ANF的变化及临床意义

通过放免法和高压液相色谱－电化学法，测定了９２例充血性心力衰竭（ＣＨＦ）患者血浆环核苷酸（ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ）、心钠素（ＡＮＦ）和去甲肾上腺素（ＮＥ）水平。结果表明：血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ和ＡＮＦ、ＮＥ浓度随着心衰程度加重而显著增加，ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值下降，与病因无关；心衰纠正后，上述指标明显恢复。血浆ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ与ＮＥ、ＡＮＦ水平显著相关。提示：血浆环核苷酸浓度同ＮＥ、ＡＮＦ一样，可作为评价ＣＨＦ患者心功能和观察疗效的一种生化指标。

葛根素对兔心肌缺血再灌注损伤时SOD、ANF含量的变化

目的观察葛根素对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护效果。方法20只兔随机分为生理盐水组(A组)、葛根素治疗组(B组)。采用放免法检测血清超氧化物岐化酶(SOD)、血浆心钠素(ANF)。结果与A组比较,B组血清SOD活性、血浆ANF含量明显增高(P<0.01)。结论葛根素可明显减轻家兔心肌缺血再灌注损伤。

血清B型脑钠肽、胰岛素样生成因子结合蛋白-3水平与非酒精性脂肪肝患者心房颤动的关系

目的探讨非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清B型脑钠肽(BNP)、胰岛素样生成因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平与心房颤动发生的关系。方法选取105例NAFLD患者纳入观察组,另选取105例健康体检者纳入对照组。收集患者的临床资料,比较2组血清BNP、IGFBP-3水平,分析NAFLD患者发生心房颤动的影响因素,探讨血清BNP、IGFBP-3的交互作用对NAFLD患者心房颤动发生风险的影响,评估血清BNP、IGFBP-3水平对NAFLD患者心房颤动的预测价值。结果观察组血清BNP、IGFBP-3水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者1年内发生心房颤动30例,心房颤动患者的体质量指数(BMI)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、BNP和IGFBP-3水平均高于未发生心房颤动患者,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于未发生心房颤动患者,差异有统计学意义(P<0.05);BMI、TC、TG、HDL-C、LDL-C、BNP和IGFBP-3均为NAFLD患者发生心房颤动的影响因素(P<0.05);BNP、IGFBP-3存在交互作用,且NAFLD患者心房颤动发生风险中有50.47%归因于两者交互作用;血清BNP、IGFBP-3联合预测的曲线下面积为0.928,显著大于BNP、IGFBP-3单独预测的曲线下面积0.753、0.821(P<0.05)。结论BNP、IGFBP-3在NAFLD患者血清中的表达水平显著升高,两者联用可有效预测患者心房颤动的发生。

ANF和ACTH对体外培养的人正常肾上腺组织分泌醛固酮的影响

将体外培养的人正常肾上腺组织,用不同浓度的心钠素(atrial natriuretic factor,ANF)和ACTH作用不同时间,观察其醛固酮分泌的变化。结果表明:ANF10~mol/L作用0.5h能刺激正常肾上腺组织分泌醛固酮,而作用24h则呈现抑制作用;同浓度ANF能抑制同时有ACTH10^(-8)mol/L参与作用的醛固酮分泌。ACTH10^(-8)moL/L单独作用不能刺激正常肾上腺组织分泌醛固酮,当浓度增加到3×10^(-8)或5×10^(-8)mol/L时才能使醛固酮分泌增加。以相同浓度的ANF和ACTH(3×10^(-8)或5×10^(-8)mol/L)同时作用于肾上腺组织,ANF不能完全抑制由ACTH引起的醛固酮分泌增加的作用。提示体外培养的正常肾上腺组织分泌醛固酮的反应与ANF和ACTH的剂量及作用时间有关。

ANF、AII水平在不同鼠龄SHR下丘脑和血浆中的变化

采用放射免疫分析法测定了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）３、５、７月龄及局部脑缺血后下丘脑和血浆中ＡＮＦ、ＡＩ含量的变化；用ＴＴＣ染色经过图像分析系统测定了局部脑缺血后梗塞灶大小。结果发现３、５、７月龄ＳＨＲ下丘脑ＡＮＦ水平明显低于同龄对照组鼠（Ｐ＜０．０５和０．０１），ＡＩ水平在５、７月龄时明显升高（均Ｐ＜０．０５）。在血浆中，ＡＩ在３个不同时期与对照组无差异，ＡＮＦ却明显高于同龄Ｗｉｓｔａｒ鼠组（均Ｐ＜０．０１）。局部脑缺血后，ＳＨＲ的梗塞灶较对照组略大，除对照组下丘脑ＡＩＩ无变化外，其余均显著增加。认为中枢较低水平的ＡＮＦ和较高水平的ＡＩＩ参与了ＳＨＲ高血压的形成和发展，局部脑缺血后两者的变化，可能是机体的应激代偿反应。

ANFRIA药盒在儿科临床中的应用

采用心钠素放射免疫分析（ＡＮＦＲＩＡ）药盒进行了四批实验测定。结果表明：３月－１４岁健康儿童血浆ＡＮＦ含量与性别、年龄无关，参考值为１７０．４±３４．６ｎｍｏｌ／ｌ；急性支气管肺炎、支气管哮喘、左向右分流型先天性心脏病患儿的血浆ＡＮＦ含量明显增高。分析结果显示了ＡＮＦＲＩＡ药盒稳定、灵敏、可靠、操作简便。

原发性高血压病患者治疗前后血浆ET、BNP、ANF检测的临床意义

目的:探讨了原发性高血压病患者治疗前后血浆ET、BNP和ANF水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析对53例原发性高血压病患者进行了治疗前后血浆ET、BNP和ANF测定,并与35名正常健康人作比较。结果:原发性高血压病患者在治疗前血浆ET、BNP和ANF水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),经治疗一个月后与正常人组比较仍有显著性差异(P<0.05)。结论:检测原发性高血压病患者血浆ET、BNP和ANF水平的变化对疗效观察、预后判断均具有重要的临床价值。

心房颤动患者NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15水平及其对MACE发生的预测价值

目的探讨心房颤动(简称房颤)患者血清N端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、超敏肌钙蛋白(hs-cTnT)和生长分化因子15(GDF-15)水平及其对主要心血管不良事件(MACE)发生的预测价值。方法选取2022年1-12月该院收治的264例房颤患者作为房颤组,根据房颤类型又分为持续性房颤组(141例)和阵发性房颤组(123例);另选取同期该院90例健康体检者作为对照组。检测房颤组入院时及对照组体检时血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15水平,并比较持续性房颤组和阵发性房颤组血清指标水平差异。对房颤组进行随访,观察1年内患者MACE发生情况,将房颤组又分为MACE组和非MACE组。采用多因素Logistic回归分析房颤患者MACE发生的独立危险因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15对房颤患者MACE发生的预测价值。结果房颤组血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。持续性房颤组血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15水平均高于阵发性房颤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。264例房颤患者随访1年发生MACE者46例,发生率为17.42%,其中心源性死亡6例,脑卒中18例,心肌梗死22例。MACE组血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15水平均高于非MACE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15水平升高是房颤患者随访1年MACE发生的独立危险因素(P<0.05)。房颤患者血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT、GDF-15联合检测预测随访1年房颤患者MACE发生的曲线下面积(AUC)为0.833,高于4项单独评估的AUC(0.696、0.738、0.708、0.718)。结论房颤患者血清NT-proBNP、Lp-PLA2、hs-cTnT和GDF-15水平升高,且持续性房颤患者高于阵发性房颤患者,其水平升高与患者预后密切相关,可作为房颤患者MACE发生的预测因素。

AⅡ受体拮抗剂与ACEI对慢性肾衰患者血浆ANF及RAS的影响

目的 了解血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 (ATRA)和转换酶抑制剂 (ACEI)对慢性肾衰 (CRF)高血压患者血浆心钠素 (ANF)和肾素 血管紧张素系统 (RAS)的影响。方法 受试者口服氯沙坦 (Los组 )或福辛普利 (Fos组 )连续 12周 ,于治疗前和治疗后第 4、8及 12周测定坐位舒张压 (SiDBP)、血清尿素氮 (BUN)、血清肌酐 (SCr)、ANF、血管紧张素Ⅰ (AⅠ )和血管紧张素Ⅱ (AⅡ )。用SPSS 7.0软件作统计分析。结果 经 12周治疗 ,两组患者SiDBP均降至目标值。Fos组 :与治疗前比较 ,AⅡ下降 ,ANF和Scr升高 (P <0 .0 1)。Los组 :AⅡ明显升高 (P<0 .0 1) ,ANF在短暂升高后降至治疗前水平 ,Scr无变化。结论 ACEI可能对CRF高血压患者肾内灌注压有影响 ,ANF动态改变可作为肾内灌注压变化的指标之一。ATRA对肾内灌注压影响小于ACEI。

血浆心钠素(ANF)放免分析试剂盒的研制

采用氯胺Ｔ（Ｃｈ－Ｔ）法对人心钠素（α－ｈＡＮＦ，以下简称ＡＮＦ）进行１２５Ｉ标记，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０柱分离纯化，得到比活度＞１０ＭＢｑ／μｇ、放化纯度＞９０％、与过量抗体结合率为（７８—８１）％的１２５Ｉ－ＡＮＦ。建立了稳定的冻干系列标准及简便、快速的分析方法。试剂盒的标准曲线范围为６５—３２５０ｐｍｏｌ／Ｌ，在曲线范围内测定人血浆的平均回收率为（９３．４—１１５）％，高值血浆稀释相关系数ｒ＝０．９９９２—０．９９９８，灵敏度为１７ｐｍｏｌ／Ｌ，批内变异系数为（３．２—４．５）％，批间变异系数为（３．１—６．２）％，非特异结合率为（１．９—４．５）％。健康人血浆的ＡＮＦ含量正常值为１２２．０±２４．８ｐｍｏｌ／Ｌ（ｘ±ｓ，ｎ＝９７）。

不同鼠龄SHR及局部脑缺血后下丘脑和血浆中ANF、AⅡ含量的测定

目的：探讨ＡＮＦ、ＡⅡ在高血压形成和发展中的作用和意义以及局部脑缺血后对其两者的影响。方法：用尾筒法测ＳＨＲ血压，ＲＩＡ测定ＡＮＦ、ＡⅡ水平并与同龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠对比，并用ＴＴＣ染色结合图像分析测定局部脑缺血后梗塞灶大小．结果：３、５和７个月龄ＳＨＲ下丘脑ＡＮＦ水平均明显低于同龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠，ＡⅡ水平明显升高。在血浆中，ＡⅡ水平无何差异，ＡＮＦ明显高于同龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠。局部脑缺血后，ＳＨＲ梗塞灶较Ｗｉｓｔａｒ大鼠的略大，ＡＮＦ、ＡⅡ水平显著增加。结论：中枢较低水平的ＡＮＦ和较高水平的ＡⅡ参与了ＳＨＲ高血压的形成和发展。

心房快速起搏和链霉素对兔心房电重构和心房钠尿肽影响的研究

目的探讨心房快速起搏(RAP)和牵张激活性离子通道(SAC)阻断剂链霉素对兔心房电重构和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)的影响。方法选用新西兰白兔18只,随机分为RAP组和RAP+链霉素组[起搏前静脉推注链霉素30 mg/kg,然后以25μg/(kg·h)维持静脉滴注],每组9只。检测2组心房有效不应期(AERP),采用ELISA法测定起搏前和起搏后15 min、30 min和1 h血浆ANP水平及环磷酸鸟苷(cGMP)浓度。结果与基线比较,RAP组起搏后1 h的AERP200和AERP150明显缩短(P<0.05),RAP+链霉素组起搏后15 min的AERP200和AERP150明显延长(P<0.05)。与RAP组比较,RAP+链霉素组在起搏后30 min和1 h的AERP200和AERP150明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。RAP组AERP频率适应性与RAP时间呈负相关(r=-0.287,P<0.05)。RAP组房颤诱发率明显高于RAP+链霉素组,差异有统计学意义(33%vs 0,P<0.05)。与基线比较,随着起搏时间延长,RAP组15 min、30 min、1 h ANP、cGMP浓度明显增加(P<0.05)。与RAP组比较,RAP+链霉素组在起搏后15 min ANP、cGMP浓度有所降低(P>0.05),起搏后30 min和1 h ANP[(97.4±9.5)pg/ml vs(174.1±16.8)pg/ml,P=0.039;(81.3±9.6)pg/ml vs(263.2±34.6)pg/ml,P=0.001]、cGMP[(1.1±0.2)pmol/ml vs(2.2±0.3)pmol/ml,P=0.029;(1.0±0.1)pmol/ml vs(2.4±0.2)pmol/ml,P=0.004]明显降低。结论SAC阻断剂链霉素能显著抑制心房急性电重构,抑制RAP引起的血浆ANP及cGMP浓度的增加。

血浆NO、ET、ANP、PRA、AT在慢性肾功能衰竭患者透析前后的变化及其意义

[目的]探讨慢性肾功能衰竭(CRF)患者血浆一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、心房利钠多肽(ANP)、肾素活性(PRA)、血管紧张素(AT)在透析前后的变化及其临床价值.[方法]选取在两院进行血液透析的CRF患者(CRF组,n=40)以及健康体检者(正常对照组,n=40)作为研究对象.比较两组及CRF组透析前后血浆NO、ET、ANP、PRA、AT变化情况.[结果]CRF组患者透析前血浆NO、ET、ANP、PRA、AT水平均显著高于正常对照组(P<0.05);CRF组患者透析后血浆NO、ANP水平显著低于透析前,血浆PRA、AT水平显著高于透析前,且差异均有统计学意义(P<0.05),两组透析前后血浆ET水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]血液透析治疗会导致CRF患者血浆NO和ANP水平下降,PRA和AT水平升高,同时ET水平有略微下降,表明CRF患者血浆NO、ET、ANP、PRA、AT水平变化会随着透析治疗发生较大的改变,且各指标间影响情况较为复杂,临床应用中需要参考各指标具体诊断.