包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的制备及佐剂活性

重组CTA1-DD蛋白具有与完整CT分子相当的全身性和黏膜佐剂功能,但在复杂的生理环境中易被酶或酸降解。本研究以同样具有佐剂活性的O-羧甲基壳聚糖(OCS)和硫酸葡聚糖(DS)为载体,通过离子交联形成纳米颗粒,将CTA1-DD蛋白嵌入其中,使其得到稳定保护。包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的粒径为50~150 nm,Zeta电位约-50 mV,质量浓度1.0 mg/ml的CTA1-DD蛋白投入制备的包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒载药率25.33%,包封率86.56%。体外模拟释放试验结果显示CTA1-DD蛋白可在7 d内缓慢释放。将CTA1-DD蛋白与PRV灭活抗原混合后,接种至小鼠鼻腔,结果表明,包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒能够同时诱导更高的血清IgG抗体和黏膜IgA抗体表达,证明了其作为黏膜佐剂的高效性。

三子利水颗粒对心衰肺水肿大鼠肺组织液体转运相关蛋白表达的影响

目的通过观察三子利水颗粒对心衰肺水肿大鼠肺组织病理组织学、AQP1、AQP5、ENaC蛋白及mRNA表达的影响探讨其治疗心衰肺水肿的机制。方法选择雄性SD大鼠,通过结扎腹主动脉、腹腔注射氯化铵造成心衰急性肺水肿模型,随机分为模型组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组、中药低剂量+西药组、中药高剂量+西药组。给药1周后观察各组大鼠肺组织含水率、病理组织学及AQP1、AQP5、ENaC蛋白及mRNA表达水平。结果与模型组比较,各给药组肺含水量均减少(P<0.05);组织细胞间的炎性浸润和肺泡间的充血症状均改善。AQP1、AQP5蛋白表达均不同程度地升高,中药低剂量组AQP1差异有统计学意义(P<0.05),AQP5差异无统计学意义(P>0.05),其余给药组差异有统计学意义(P<0.01)。ENaC蛋白表达均不同程度地升高,空白对照组、中药低剂量组+西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.05),其余各组差异无统计学意义(P>0.05)。AQP1、AQP5mRNA表达均不同程度地升高,中药低剂量组+西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.01)。ENaC mRNA表达均不同程度地升高,中药低剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.05),西药组、中药高剂量组+西药组差异有统计学意义(P<0.01)。中药低、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论三子利水颗粒可通过升高AQP1、AQP5、ENaC蛋白表达及mRNA表达含量来改善上皮细胞病理组织形态,达到清上焦肺水,缓解心衰肺水肿体征的目的。

大豆分离蛋白对大豆肽纳米颗粒Pickering乳液性能的影响

为提高大豆肽纳米颗粒(SPN)Pickering乳液稳定性,以大豆肽聚集体为原料,采用超声法制备SPN,对超声时间进行了优化;在SPN体系中引入大豆分离蛋白(SPI)构建复合乳化剂,研究不同乳化剂质量浓度下SPI对SPN界面活性和乳化稳定性的影响。结果表明:选取超声时间10 min制备SPN;随着乳化剂质量浓度的增大,乳液粒径逐渐减小,当乳化剂质量浓度较低(5 mg/mL)时,乳液出现桥联,乳化剂质量浓度过高(30 mg/mL)时则出现絮凝;界面蛋白吸附率随着乳化剂质量浓度的增加呈现先升高后降低的趋势。在相同乳化剂质量浓度下,添加SPI的SPN乳液(SPI-SPN乳液)的粒径分布峰左移,其粒径、界面蛋白吸附率显著小于SPN乳液的;在储存过程中,SPN乳液粒径逐渐增大,SPI-SPN乳液粒径没有显著变化;SPI-SPN乳液的乳析指数小于相同乳化剂质量浓度的SPN乳液,当乳化剂质量浓度为30 mg/mL时,储存15 d SPI-SPN乳液未出现分层现象。综上,SPI可以提高SPN的界面活性和SPN乳液储存过程中的絮凝稳定性和分层稳定性。

妊娠期高血压病患者血清内皮微颗粒、内皮素-1、单核细胞趋化蛋白-1及NO水平与病情严重程度相关

目的:探讨妊娠期高血压病患者循环内皮微颗粒(EMPs)水平和内皮细胞功能的改变及临床意义。方法:收集妊娠期高血压病患者120例的临床资料,按照疾病严重程度分为妊娠期高血压组34例、轻度子痫前期组45例、重度子痫前期组41例。选取同期正常妊娠孕妇30例为对照组。比较4组的内皮细胞功能、血清EMPs、脉压水平的差异,进行Spearman相关性分析。结果:妊娠期高血压组、重度子痫前期组、轻度子痫前期组脉压、血清EMPs、血清内皮素-1(ET-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平高于对照组,NO水平低于对照组(P均<0.05)。与妊娠期高血压组、轻度子痫前期组比较,重度子痫前期组患者血清ET-1、MCP-1水平较高,NO水平较低(P均<0.05)。相关性分析显示,妊娠期高血压患者病情严重程度与脉压、血清EMPs、ET-1、MCP-1水平呈正相关,与血清NO水平呈负相关(P均<0.05)。结论:妊娠期高血压病患者脉压水平、EMPs明显升高且存在内皮功能障碍;随着患者病情加重,脉压及血清EMPs、ET-1、MCP-1水平逐渐升高,而血清NO水平逐渐降低。

醒脾养儿颗粒与孟鲁司特钠联合治疗小儿牛奶蛋白过敏的效果分析

目的分析醒脾养儿颗粒与孟鲁司特钠联合治疗小儿牛奶蛋白过敏的效果。方法94例牛奶蛋白过敏患儿,使用随机数字表法分为对照组与研究组,每组47例。对照组采用孟鲁司特钠咀嚼片治疗,研究组在对照组的基础上应用醒脾养儿颗粒治疗。比较两组患儿的临床疗效以及炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、免疫因子(CD8^(+)、CD4^(+))水平。结果在总有效率比较中,研究组95.74%高于对照组的80.85%(P<0.05)。治疗后,研究组IL-6、TNF-α水平分别为(7.65±2.03)、(6.28±1.50)pg/ml,较对照组的(15.20±3.05)、(13.23±2.45)pg/ml低(P<0.05)。治疗后,研^(+)^(+)究组CD4水平(48.68±5.50)%较对照组的(44.50±4.86)%高,CD8水平(25.05±2.02)%较对照组的(28.64±3.05)%低(P<0.05)。结论醒脾养儿颗粒与孟鲁司特钠联合治疗小儿牛奶蛋白过敏效果确切,可以有效抑制患儿的炎症反应,提高其免疫功能,适于临床应用。

钙蛋白颗粒(CPPs(T50))在预测维持性血液透析患者血管钙化的作用

探讨CPPs(T50)在慢性肾脏病维持性血液透析(maintenance hemodialysis MHD)患者和血管钙化的关系,以及影响MHD患者CPPs(T50)的相关因素。方法 选取2021年6月—2023年6月在北京市第六医院透析中心病情稳定的血液透析患者68例,记录患者基本情况 、实验室检测指标,冠状动脉CT钙化评分(CAC),CPPs(T50)数值等相关指标。多元线性回归模型法分析影响MHD 患者T50的影响因素。运用ROC曲线及曲线下面积(ROC)评价在CAC金标准积分下T50及其他临床指标诊断轻中度和重度冠状动脉钙化的鉴别力。结果 轻中度和重度血管钙化组中BMI,T50,透析月龄,碱性磷酸酶(AKP),中性粒细胞,CRP,铁蛋白P<0.05;T50和IPTH,TC,TG和BMI呈线性回归关系,回归方程为T50=0.443+0.119x TG -0.006xBMI +0.001xIPTH -0.067xTC,并且通过ROC分析,发现1/T50对轻中度和重度患者血管钙化具有一定的鉴别力。结论 透析患者血管钙化中,炎症扮演着很重要的角色;钙蛋白颗粒(T50)与TG,BMI,IPTH和TC相关;1/T50对维持性血液透析患者血管钙化具有一定的鉴别力,T50 和血管钙化呈反比,T50越小,血管钙化越重。

pH循环法从玉米蛋白粉制备蛋白纳米颗粒的研究及其表征

采用pH循环法直接从玉米蛋白粉(CGM)制备蛋白纳米颗粒(CNPs),对其制备工艺进行了优化,对其性质进行了表征,并与利用玉米醇溶蛋白在相同条件下制备的纳米颗粒(ZNPs)进行了比较。结果表明,利用pH循环法可以成功从CGM中制备CNPs,且其最优条件为碱溶pH 13.0、碱溶温度60℃、碱提料液比1∶25、回调pH 7.0,在此条件下CNPs的得率相对于CGM中的蛋白质质量分数达到了69.20%。与ZNPs相比,CNPs具有相近的粒径(282.37 nm)且也携带负电荷,但是原子力显微镜观察结果表明其聚集程度更低;CNPs的疏水性氨基酸质量分数稍低(50.05%),但是α-螺旋和无规则卷曲的含量稍高。另外,CNPs的持水力和润湿性均显著优于ZNPs,且其接触角仅为45.5°,并表现出了更好的Pickering乳液稳定能力。因此,CGM可取代玉米醇溶蛋白作为pH循环法制备蛋白纳米颗粒的原料,这一过程工艺简单、成本较低,对于丰富CGM的综合利用途径、推动玉米蛋白纳米颗粒在食品工业中的应用具有重要意义。

刺激响应型玉米醇溶蛋白基纳米颗粒的制备及其应用研究进展

玉米醇溶蛋白是玉米淀粉加工的主要副产物,价格低廉且容易获取。基于其独特的自组装特性,玉米醇溶蛋白可通过多种方式构建成纳米颗粒,进而对生物活性物质进行荷载和输送。纳米颗粒的制备方法包括反溶剂沉淀、pH循环、电喷雾和微流控等。这些制备方法都可合成响应各种环境刺激且性质稳定的玉米醇溶蛋白基纳米颗粒。本文综述了刺激响应型玉米醇溶蛋白基纳米颗粒的制备方法、响应类型和应用最新进展。这些纳米载体可对内源性(pH、酶和氧化还原)和外源性环境刺激(磁和光)做出响应,已被用于食品智能包装、纳米农药和纳米医学中生物活性物质的包封递送。然而,仅依靠单一刺激响应很难实现活性物质的作用最大化,多重刺激(双重刺激、三重刺激等)响应的纳米颗粒已成为递送领域的新发展趋势。未来,更多的研究应该投入到多刺激响应纳米颗粒的研发,以及如何将纳米颗粒的多重响应特性和纳米颗粒的靶向递送结合还有待进一步探索。

茶树花黄酮-玉米醇溶蛋白-果胶纳米颗粒制备及其抗氧化活性研究

玉米醇溶蛋白-果胶构造的包埋体系可提高生物活性物质的稳定性,延长其抗氧化活性。该研究以茶树花黄酮为原料,通过反溶剂法结合静电沉积法制备茶树花黄酮-玉米醇溶蛋白-果胶纳米颗粒(tea flower flavonoids zein-pectin nanoparticles,FZP-NPs),通过扫描电子显微镜、透射电子显微镜、傅里叶变换红外光谱和差示扫描量热法等技术对纳米颗粒的表观形貌、理化特性、结构进行分析,利用DPPH法和ABTS法对纳米颗粒的抗氧化活性进行评估。结果表明,FZP-NPs包埋率大于96%,粒径为(238±4.55)nm,形状为球形;氢键、疏水相互作用是玉米醇溶蛋白与茶树花黄酮形成纳米颗粒的主要作用力。包埋增强了茶树花黄酮的稳定性,并延长了其抗氧化活性,该研究为茶树花黄酮的综合利用提供了理论参考。

明睛颗粒联合雷珠单抗对湿性年龄相关性黄斑变性纤维血管膜纤维化相关蛋白表达的影响

[目的]观察明睛颗粒联合雷珠单抗玻璃体腔注射对实验性湿性年龄相关性黄斑变性(nAMD)纤维血管膜以及纤维化相关蛋白表达的影响,阐释明睛颗粒治疗nAMD的作用机制,为临床上中药联合抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗提供理论依据。[方法]应用两阶段激光光凝的方法建立实验性nAMD纤维血管膜模型,将造模成功后的BN大鼠随机分为3组:模型组、抗VEGF组、明睛颗粒(MJKL)+抗VEGF组。模型组:予蒸馏水灌胃;抗VEGF组:予玻璃体腔注射雷珠单抗注射液;MJKL+抗VEGF组:予玻璃体腔注射雷珠单抗注射液,同时予明睛颗粒灌胃。10只BN大鼠不造模,常规饲养作为正常对照组。造模40 d后,采用眼底照相(FP)、眼底血管荧光造影(FFA)、光学相干断层扫描(OCT)、视网膜色素上皮(RPE)-脉络膜-巩膜铺片观察眼底病变形态、病变渗出面积及MD值;组织病理学观察视网膜结构的改变,免疫荧光法检测Collagen-1,Fibronectin,α-SMA,TGF-β1的表达及分布,qRT-PCR法检测Collagen-1mRNA,FibronectinmRNA,α-SMAmRNA和TGF-β1 mRNA的相对表达量。[结果]两阶段激光造模后40d建立纤维血管膜模型;抗VEGF组在病变渗出面积、光密度值(MD)值、病变高度均较模型组显著降低(P<0.05),病变面积及视网膜结构损伤程度显著降低;而MJKL+抗VEGF组较抗VEGF组在病变渗出的MD值、病变高度更加降低(P<0.05),病变面积及视网膜结构损伤程度也明显降低。Collagen-1,Fibronectin,α-SMA,TGF-β1的荧光强度中模型组均较正常组明显升高(P<0.05),抗VEGF组均较模型组明显降低(P<0.05);MJKL+抗VEGF组中Collagen-1,Fibronectin,TGF-β1的荧光强度较抗VEGF组明显降低(P<0.05)。Collagen-1mRNA,FibronectinmRNA,α-SMAmRNA和TGF-β1 mRNA的相对表达量中,模型组均较正常组明显升高(P<0.05),抗VEGF组均较模型组明显降低(P<0.05),MJKL+抗VEGF组均较抗VEGF组明显降低(P<0.05)。[结论]明睛颗粒联合抗VEGF药物可以通过降低Collagen-1,Fibronectin,α-SMA,TGF-β1蛋白的表达,从而较单一应用抗VEGF药物可以更好地抑制实验性nAMD纤维血管膜的生长。

玉米醇溶蛋白-海藻酸钠纳米颗粒的制备及其负载姜黄素的研究

采用反溶剂法制备玉米醇溶蛋白-海藻酸钠纳米颗粒,并用于负载姜黄素的复合纳米颗粒。探究不同质量的海藻酸钠对纳米颗粒环境稳定性的影响及形成纳米颗粒相互作用机制。当负载相同含量的姜黄素时,海藻酸钠的含量对纳米颗粒中姜黄素包埋率、负载率、光稳定性、热稳定性的影响。研究结果表明,静电吸引、氢键和疏水效应是形成复合纳米颗粒的主要驱动力。玉米醇溶蛋白纳米颗粒被海藻酸钠包覆,在宽pH值范围内、高温和盐浓度下保持稳定。当海藻酸钠与姜黄素含量比为20∶3时,包埋率达到最大,为76.02%。海藻酸钠的添加显著提高了姜黄素的包封效率、负载能力以及光稳定性。因此,玉米醇溶蛋白复合纳米颗粒对于保护疏水性生物活性化合物具有良好的应用前景。

双蛋白天然共生颗粒Pickering纳米乳液的稳定性分析

利用双蛋白天然共生颗粒制备Pickering纳米乳液并对其物化稳定性进行分析,以此拓宽其在食品领域中的应用潜力。本研究采用碱提取-等电点沉淀法(Alkali extraction-isoelectric point precipitation,AE)和盐提取-透析法(Salt extraction-dialysis,SE)从大豆-亚麻籽混合粕中富集大豆蛋白(Soy protein)和亚麻籽蛋白(Flaxseed protein),制备双蛋白天然共生颗粒(Natural particles,SFNPs)。首先,利用外观观察、原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)、圆二色谱和拉曼光谱对两种双蛋白共生颗粒进行表征;其次,将其作为颗粒稳定剂制备Pickering纳米乳液,并对其物理和化学稳定性进行表征。结果表明AE-SFNPs的尺度更为均一,且具有良好的分散性。与SE-SFNPs相比,AE-SFNPs的二级结构中β-折叠占比更高,达51.25%,具有更加致密有序和良好柔性的结构特性。2种双蛋白天然共生颗粒均可制备出Pickering纳米乳液。在28 d的贮藏期间,AE-SFNPs稳定乳液的粒径仅增加了约14 nm,电位基本稳定在-34 mV左右,而SE-SFNPs稳定乳液的粒径增加了约12倍,电位降低了1.32倍。贮藏至第28 d时,AE-SFNPs的稳定性指数(Turbiscan stability index,TSI,5.83),远小于SESFNPs的TSI值(55.13)。尤其是,AE-SFNPs制备的Pickering纳米乳液表现出了比酪蛋白酸钠(食品领域加工常用乳化剂)制备的纳米乳液更佳的物理稳定性和化学稳定性。因此,AE-SFNPs可作为一种天然高效植物蛋白基颗粒稳定剂制备Pickering纳米乳液,为丰富纳米乳液的工业化应用提供了新的解决策略。

含油量及蛋白颗粒含量对高内相Pickering乳液及其3D打印特性的影响

本研究使用凝胶破碎法制备了大豆分离蛋白微凝胶颗粒作为高内相Pickering乳液(high internal phase Pickering emulsions,HIPPEs)的稳定剂。激光扫描共聚焦显微镜显示蛋白颗粒包裹住油滴,部分液滴由于堆积呈现多面体形,是典型的O/W型HIPPEs特征。提高含油量及蛋白颗粒质量分数可以提高体系的黏度、储能模量及凝胶强度,赋予了乳液3D打印的能力。当含油量为75%(m/m)、蛋白颗粒质量分数为3.0%时,打印模型的精确性和稳定性分别达到93.35%和98.72%。本研究结果表明HIPPEs可作为有效的食品3D打印油墨,并为拓展3D打印在食品领域中的应用提供理论依据。

玉米醇溶蛋白-槲皮素互作机制及其纳米颗粒的制备

以紫外光谱、荧光光谱和分子对接等方法探究玉米醇溶蛋白和槲皮素分子之间在醇溶体系内的相互作用机制,并通过粒径、包埋率及微观形貌等指标对其形成的纳米颗粒进行表征,初步探讨不同质量比的槲皮素与玉米醇溶蛋白对纳米颗粒的影响。结果表明,槲皮素与玉米醇溶蛋白发生了荧光静态猝灭,作用位点更接近玉米醇溶蛋白的色氨酸残基,其分子间相互作用力为氢键和范德华力。分子对接结果显示,槲皮素与玉米醇溶蛋白的氨基酸残基ALA-127、LEU-81、PRO-161、LEU-156形成疏水作用力,与SER-159和GLN-134残基形成氢键。玉米醇溶蛋白与槲皮素质量比为20∶1时,形成了具有球状形貌核壳结构的纳米颗粒,且其粒径为88.31 nm,电位为35.96 mV,包埋率为81.09%。

6-姜烯酚玉米醇溶蛋白纳米颗粒的构建及其生物利用度分析

为解决6-姜烯酚(6-shogaol,6S)生物利用度低的问题,通过反溶剂沉淀法构建玉米醇溶蛋白-酪蛋白酸钠纳米颗粒(zein-sodium caseinate nanoparticles,ZCP)作为6S的纳米输送载体,对其进行物化性质表征,并通过体外模拟消化、Caco-2细胞模型及大鼠药代动力学实验考察其生物利用度。利用激光粒度仪、透射电子显微镜、傅里叶变换红外光谱对所构建6S复合纳米颗粒(ZCP-6S)的粒径分布、微观形态、化学结构进行表征。结果表明,纳米颗粒呈球形,粒径较小且分布均匀,6S可能通过非共价键与玉米醇溶蛋白相互作用。体外模拟消化结果表明,ZCP-6S的制备使6S的生物可及性提高至(75.34±9.82)%。ZCP-6S显著增强了Caco-2细胞对6S的摄取及转运,处理4 h后,细胞摄取量增加了(0.36±0.06)μg/mg;Caco-2细胞模型下室中6S的质量浓度增加了(1.06±0.06)μg/m L。大鼠药代动力学研究结果表明,纳米颗粒封装后6S的相对口服生物利用度提高了2.28倍。综上,通过玉米醇溶蛋白纳米颗粒输送载体的构建,使6S的生物可及性、细胞吸收和口服生物利用度均得到了有效提高。

鸡柔嫩艾美耳球虫2种假定致密颗粒蛋白基因的克隆与表达

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是一种严重危害养鸡业健康发展的高致病性原虫,致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)是顶复合器门原虫胞内寄生重要功能蛋白,具有较高的免疫学应用价值,然而目前尚未有关于球虫致密颗粒蛋白的确切报道。为发掘柔嫩艾美耳球虫GRAs并研究其功能,采用生物信息学、分子生物学、免疫学等技术从E.tenella北京株中鉴定到2种假定致密颗粒蛋白(hypothetical dense granule protein,hEtGRA)hEtGRA12、hEtGRA9,并用纯化后的蛋白分别免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA、Western blot方法检测2种蛋白的抗原性。分子克隆结果表明,hEtGRA 12、hEtGRA 9基因编码区长度分别为1188、1110 bp,分别编码395、369个氨基酸,与其他顶复合器门原虫致密颗粒蛋白GRA12、GRA9物种间相似性分别为28.8%~39.6%、27.5%~29.5%;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9条带大小分别为63.6、67.0 ku;ELISA与Western blot结果表明,重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9均能诱导小鼠产生较高的抗体水平,且均可被鸡抗E.tenella阳性血清识别,表明具有较好的抗原性。该研究鉴定到2种球虫假定致密颗粒蛋白基因hEtGRA 12、hEtGRA 9,获得了重组蛋白rhEtGRA12、rhEtGRA9,为球虫致密颗粒蛋白基因功能和免疫应用研究奠定了基础。

负载香芹酚的小麦醇溶蛋白/果胶纳米颗粒的构建及性质表征

香芹酚作为天然高效的抗氧化剂,却由于其水溶性较差导致其生物活性较低。研究借助小麦醇溶蛋白的自组装特性包埋香芹酚,复合果胶做稳定剂,运用反溶剂法制备负载香芹酚的纳米颗粒。借助粒径仪及光学照片考察小麦醇溶蛋白与果胶不同质量比、小麦醇溶蛋白与香芹酚不同质量比、pH值、盐离子浓度及储藏时间对复合纳米颗粒稳定性的影响。结果表明:当m(小麦醇溶蛋白)∶m(果胶)=1∶1.5时,复合纳米颗粒粒径为179.23 nm,多分散指数(PDI)达0.21,电位达-36.42 mV。在该条件下,当m(小麦醇溶蛋白)∶m(香芹酚)=10∶1时,包封率达85.23%;当pH=3.0~9.0,盐离子浓度不高于50 mmol/L时,负载香芹酚的复合纳米颗粒稳定性较好,且储藏实验表明28天内体系均一稳定。透射电镜结果也显示果胶与小麦醇溶蛋白借助相互作用力形成稳定球型结构。此外,抗氧化实验显示负载香芹酚的复合纳米颗粒可有效实现对自由基的清除,且对DPPH自由基清除率的IC_(50)值为(13.21±0.81)μg/mL,可预防食物氧化,在食品保鲜与包装领域有较好的应用前景。

布鲁氏菌BP26蛋白细菌样颗粒疫苗的制备和免疫学评价

为了构建布鲁氏菌外膜蛋白BP26细菌样颗粒候选疫苗BLPs-BP26,并评价其免疫原性,本试验首先分别扩增羊种布鲁氏菌16M株编码BP26蛋白的整个基因序列和乳酸乳球菌MG1363株编码肽聚糖锚钩蛋白(PA)的整个基因序列,通过重叠延伸PCR技术将bp26基因与PA基因连接构建融合基因bp26-PA,将融合基因bp26-PA克隆至pET-28a原核表达载体并诱导表达融合蛋白BP26-PA。将表达正确的BP26-PA融合蛋白与细菌样颗粒(BLPs)结合构建BLPs-BP26,通过SDS-PAGE、Western blot、间接免疫荧光和冷冻超薄切片对BLPs-BP26进行鉴定。将BLPs-BP26免疫小鼠,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠特异性IgG抗体水平,实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)分析免疫小鼠脾脏组织中干扰素γ(IFN-γ)和白介素2(IL-2)的基因转录水平,ELISA方法检测免疫小鼠血清中IFN-γ和IL-2的蛋白表达水平。鉴定结果显示,BP26-PA蛋白成功展示在BLPs表面;免疫小鼠试验结果显示,小鼠血清特异性IgG抗体效价最高可达1∶1 024 000;与PBS组相比,BLPs-BP26组免疫小鼠脾脏组织中IFN-γ和IL-2基因的转录水平均极显著升高(P值分别为P<0.000 1和P<0.01),小鼠血清中IFN-γ的表达水平极显著升高(P<0.000 1)。结果表明,BLPs-BP26能刺激小鼠产生高水平的特异性IgG抗体,并可诱导小鼠产生细胞免疫应答。本试验为开发具有良好免疫原性且无安全隐患的布鲁氏菌新型疫苗提供了新的思路。

用于阻隔奶油和茶汤快速融合的玉米醇溶蛋白纳米颗粒-柠檬酸交联淀粉复合可食薄膜的制备

为有效解决奶茶的奶油顶在出品后短时内易与茶汤快速结合的问题,该文以玉米淀粉为成膜基质,柠檬酸为交联剂、玉米醇溶蛋白纳米颗粒(zein nanoparticles,ZNP)为疏水性增强剂,制备一种阻水性能、机械性能良好的ZNP-柠檬酸复合薄膜。通过傅里叶红外光谱、扫描电镜、热重分析和X-射线衍射对复合薄膜结构进行表征,探究薄膜的机械性能、防水性能和光学性能等物理参数。此外,探究了复合薄膜在不同茶汤(茉莉绿茶、四季春、大红袍、锡兰红茶)、不同温度(4、37、45℃)和不同保留时间(0.5、1.0、1.5、2、4、24 h)下的耐水性测试,并验证了复合薄膜在奶茶奶油顶的应用效果。结果表明,淀粉可作为ZNP的优良载体,复合薄膜具有良好的热稳定性、机械性能和阻隔性能。其中,拉伸强度达到4.35 MPa、断裂伸长率达到44.21%,水蒸气透过率为3.07×10^(-12)g·cm/(cm^(2)·s·Pa)。在不同茶底的应用中,复合薄膜的水溶性在大红袍茶汤中最高;在1.5 h时水溶性、溶胀性达到最低值,放置ZNP-柠檬酸淀粉复合薄膜的奶茶在60 min时才开始奶油与茶底进行融合。综上,ZNP-柠檬酸复合薄膜可以应用在奶油顶奶茶中,有效阻隔短时间内奶油塌陷快速与茶汤混合,可作为一种新型的食品专用材料。

颗粒蛋白前体对脓毒症急性肺损伤小鼠肺组织核转录因子-κB的表达的影响

目的:探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)对脓毒症急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及可能机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、急性肺损伤组(CLP组)、颗粒蛋白前体治疗组(CLP+PGRN组)。采用盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture,CLP)构建小鼠脓毒症ALI模型,CLP+PGRN组在CLP处理半小时后使用PGRN腹腔注射。24 h后麻醉并处死小鼠,取小鼠肺HE染色观察肺组织病理损伤;TUNEL法检测肺部细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测肺组织中核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)水平;Western blot法检测NF-κB、总p65和磷酸化p65表达水平;RT-qPCR检测NF-κB和炎症细胞因子水平。结果:和Control组相比,CLP组和CLP+PGRN组肺损伤加重,促炎细胞因子升高,肺组织中细胞凋亡增加,NF-κB、p65和p-p65的表达水平明显增加;与CLP组相比,CLP+PGRN组肺组织损伤和凋亡减轻,促炎细胞因子降低,抑炎细胞因子升高,NF-κB、p65和p-p65的表达明显减少。结论:PGRN可以减轻脓毒症小鼠急性肺损伤,其机制可能与抑制NF-κB、p65表达和p65磷酸化有关。