用Y.pestis接种某些植物的研究

本研究采用鼠疫弱毒株061号对大豆、小麦、兴安胡枝子、紫苜蓿、青蒿等进行接种,在不同时期从大豆组织中分离到目的菌,并发现其菌落形态由R型向S型改变,其营养需求也发生了明显的变化。

17种生态型鼠疫菌对21种抗菌素敏感性的实验观察

目的 为探讨新型抗菌素在鼠疫临床治疗的效率。方法 选用 17个生态型的鼠疫菌对 2 1种抗菌素进行了纸片法药物敏感性实验。结果 2 1种抗菌素药敏抑制环均在 2 4mm以上。结论 同链霉素相比新型2 0种抗菌素对鼠疫菌的敏感性更好 ;17型鼠疫菌对同一种抗菌素的敏感性无明显差异。

斑点金免疫渗滤法检测鼠疫菌的方法研究

目的 建立一种简便、快速的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)用于鼠疫菌的快速诊断。方法 用柠檬酸钠还原法制备 10nm的胶体金标记鼠疫多价抗体 ,制备成鼠疫抗体金探针。结果 鼠疫胶体金渗滤法对鼠疫FI抗原的最低检出限为 10ng/ml;对EV76的最低检出限为 2 .4× 10 5cfu ;除 4株鼠疫菌外 ,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森菌等其他细菌发生交叉免疫反应 ;整个反应过程在 10min内完成。结论 该方法简便、快速、特异、敏感 ,不需任何特殊仪器设备 ,适合于现场鼠疫监测。

非典型鼠疫耶尔森氏菌及其流行病学意义的研究

通过抗鼠疫血清、鼠疫噬菌体、抗鼠疫噬体血清及吖啶黄的人工培养基对鼠疫强毒菌株诱变,获得了9株非典型鼠疫菌株,对其进行了生物学特性研究。采用部分非典型鼠疫菌株做了动物(豚鼠)试验,通过动物模型对带菌时间、部位及突变和返祖过程进行了研究。本文建立了诱变方法及非典型鼠疫菌的检测方法。提出了非典型鼠疫菌的流行病学意义和鼠疫监测对策以及以非典型鼠疫菌作为一种形式在自然界长期保存循环的可能性,并为根除鼠疫自然疫源性提供了一种评价方法和指征。

陕西省2000～2001年分离鼠疫菌株特性及分析

目的 为了解陕西省动物鼠疫流行的病原特点。方法 对2000～2001年定边县分离于不同宿主、媒介动物的19株鼠疫菌进行了生化、毒力因子和毒力测定。结果 所有菌株生化特点一致,4种毒力因子除1株菌为Pgm±外,均齐备。对5株菌的毒力测定LD_(50)介于41～180之间。结论 分离菌株为鄂尔多斯高原生态型强毒鼠疫菌。

聚合酶链反应在我国各生态型鼠疫菌检测中的应用

应用聚合酶链反应(PCR)对我国各生态型鼠疫菌进行检测,结果被试的37株鼠疫菌扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析均呈现单—DNA带,其分子量大小与预期结果相符合。而假结核菌、结肠炎菌等均未见扩增带。10cfu即可产生阳性反应,仅耗时4h。表明本法快速、特异、敏感,可用于各生态型鼠疫菌的快速诊断。

中国鼠疫菌外膜蛋白种类及在基因分型中的应用

目的建立鼠疫菌外膜蛋白提取的方法,研究中国鼠疫菌外膜蛋白的种类,比较各生态型之间的差别用于鼠疫菌分型。方法鼠疫菌经破碎后采取超高速离心法提取外膜蛋白,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)电泳系统分离鼠疫菌外膜蛋白。结果在10%的SDS-PAGE上中国各生态型鼠疫菌在37℃条件下表达的外膜蛋白带最多的为26条,28℃可表达的外膜蛋白带最多的为36条,各生态型之间除具有共同的外膜蛋白带外亦存在差别,由此将中国鼠疫菌划分为6种外膜蛋白类型。结论中国各生态型鼠疫菌外膜蛋白种类存在一定的差异,青海田鼠型菌株和布氏田鼠型菌株所产生的外膜蛋白具有更多的相同之处,外膜蛋白可作为鼠疫菌基因分型的一个指标。

F_1抗原含量低的鼠疫菌株的生物学特性及其流行病学意义

应用反相间接血凝试验,我国17个生态型的544株鼠疫菌进行F_1抗原测定,结果有4株表现F_1抗原含量低。通过对其生物学特性研究,表明F_1抗原含量低菌株亦可引起(实验性)动物鼠疫.进行了流行病学分析。

免疫组化分析鼠疫疫苗免疫和鼠疫菌攻毒后恒河猴脾组织中T和B淋巴细胞增殖(英文)

目的在我们先前的研究中发现,鼠疫疫苗免疫的猕猴脾组织中B细胞和T细胞数量明显增加。然而,是否这些细胞是由鼠疫疫苗引起的增殖性B细胞和T细胞还不得而知。方法为回答这个问题,本研究使用免疫组化双标记方法检测了猕猴脾组织中T细胞和B细胞的增殖。应用Ki67抗体以及T细胞和B细胞特异性单克隆抗体的免疫组化双标法,对脾组织T细胞和B细胞增殖进行检测。脾组织分别来自于亚单位疫苗SV1(20μg F1+10μg rV270)免疫的猕猴以及分别通过SV2(200μg F1+100μg rV270)、减毒活疫苗EV和铝佐剂免疫并分别攻毒的猕猴。结果与正常动物相比,受试动物脾组织生发中心有较多的B细胞增殖,边缘区有较多的静止B细胞,在动脉周围淋巴鞘区有较多的静止T细胞,提示原始T细胞可能在免疫早期发生增殖。经SV1、SV2或EV76免疫并攻毒的动物脾组织生发中心较仅用SV1免疫动物的生发中心扩大。此外,铝佐剂免疫并攻毒的猕猴脾组织生发中心不完整,这可能归因于强毒株鼠疫菌感染引起的病理损伤。B细胞增殖、静止B细胞增加、静止T细胞增多及生发中心扩大是诱导特异性体液免疫和保持免疫记忆反应的标志。结论这些结果与我们先前的发现的SV1、SV2或者EV76免疫动物激发较高的抗体和IL-4分泌相一致。

印鼠客蚤缓慢细蚤感染鼠疫菌生存期限及集群传播的研究

本文报告了印鼠客蚤、缓慢细蚤感染鼠疫菌后,生存期限及集群传播鼠疫的能力。结果表明,印鼠客蚤在温度23±1℃,相对湿度80±5％下,生存时间长达177d,平均51.6d,120多天仍具有传播能力,132d还分离到鼠疫菌,终生感染率为90.9％;饥饿状态下,最长21d,平均9d;集群叮咬传播动物感染率达100％。缓慢细蚤在温度21±1℃,相对湿度75±5％下,生存时间最长80d,平均15.9d,带菌时间最长31d,终生感染率87.5％;饥饿状态下,存活时间最长7d,平均3d;集群叮咬传播动物感染率为零。鉴此印鼠客蚤是云南家鼠鼠疫源地的主要传疫者,而缓慢细蚤在家鼠中起不到主要传疫作用。

鼠疫噬菌体试纸方法的研究

目的观察鼠疫噬菌体试纸替代常规噬菌体试验方法的效果。方法采用不同性质及规格的鼠疫噬菌体试纸与常规噬菌体试验方法进行比较。结果鼠疫噬菌体试纸与常规噬菌体试验方法一样,可以裂解鼠疫菌。结论本试验所用不同规格鼠疫噬菌体试纸,对不同浓度鼠疫菌的噬菌效果无差别,表明此方法可用于鼠疫诊断。

口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础。方法将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达。以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平。结果构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生。结论构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础。

中国鼠疫菌外膜蛋白种类的研究

目的 研究并分析中国各生态型鼠疫菌外膜蛋白种类及分子量。方法 鼠疫菌经破碎后采取超高速离心法提取外膜蛋白,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)电泳系统分离鼠疫菌外膜蛋白。结果 在10％的SDS-PAGE上我国各生态型鼠疫苗37℃条件下的培养物所表达的外膜蛋白最多为26条蛋白带,而28℃培养物表达的外膜蛋白最多的则有36条蛋白带。结论 中国各生态型鼠疫菌外膜蛋白种类存在一定的差异,青海田鼠型菌株所产生的外膜蛋白与布氏田鼠型菌株相同。

鼠疫菌通过植物毒力变化的研究

用鼠疫菌061株接种植物,第10d分离菌株命名为61—3,原株小白鼠LD_(50)是第10d分离株的3.569倍,第20d分离菌株命名为61—2,原株LD_(50)是第20d分离株的35.155倍,61—3株是61—2株的9.85倍。表明随着鼠疫菌在植物组织中时间延长,其毒力增强。

斑点金-薄层色谱法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的建立一种简便、快速的斑点金-薄层色谱法(DIGFA-TLC)用于鼠疫耶尔森氏菌的快速定量诊断。方法用柠檬酸钠还原法制备10 nm的胶体金标记鼠疫耶尔森氏菌多价抗体,制备成鼠疫抗体金探针,通过薄层色谱扫描对样品斑点进行定量测定。结果斑点金-薄层色谱法对鼠疫FI抗原的最低检出限为5 ng;对EV76的最低检出限为1.2×105cfu;且二者呈高度的正相关关系,前者相关直线方程为y=448.467 37+2.511 43x,后者相关直线方程为y=375.760 88+4.112 31×10-4x;整个反应过程在10 min内完成。结论该方法简便、快速、特异、敏感,可以实现鼠疫耶尔森氏菌的定量监测。

BALB/c小鼠选择与腹水产量和抗体效价间关系的研究

目的观察在鼠疫F1单克隆抗体制备过程中，BALB／c小鼠的选择和饲养与所获腹水量和抗体效价的关系，为大量制备该单克隆抗体提供实验室参考依据。方法根据小鼠周龄、性别和饲养条件对BALB／c小鼠进行分组，并采用动物体内诱生法制备腹水，间接ELISA用来检测腹水中F1单克隆抗体效价。结果12～16周龄组、雄性和加强营养组小鼠所获腹水产量和效价均高于其它周龄组和对照组。结论选择适当周龄的雄性小鼠、饲养过程中加强营养和管理可适当提高腹水产量和抗体的效价。

云南省南部及东南部鼠疫菌质粒图谱分析及其流行病学意义

用0.7％琼脂糖凝胶电泳检查了自1996年以来云南南部及东南部所分离的41株鼠疫菌质粒DNA,结果表明来自石屏、文山、砚山、建水、个旧、禄春、开远7个县(市)的菌株质粒图谱同来自澜沧江下游的澜沧、临沧、勐海、景洪及元江流域的思茅地区的菌株一样,其中石屏分离4株缺失6Mdal质粒带型,但出现—分子量约12Mdal的清晰带型,用Pla基因作为引物,做PCR分析结果为阳性,推测可能为6Mdal质粒的二聚体。结合流行病学分析认为滇南、滇东南部分地区可能同属一片鼠疫自然疫源地。

预测鼠疫耶尔森氏菌F1抗原的CTL表位

目的预测鼠疫菌F1抗原的CTL表位,为鼠疫菌表位疫苗研究奠定基础,并为绘制鼠疫菌抗原表位图谱提供一种可行的研究手段。方法采用nHLAPred网络预测法对F1抗原的CTL表位进行预测。结果预测得到了鼠疫菌F1抗原的特异性CTL优势表位:120～128 SPKVNGENL和153～161 KLAAGKYTD。结论利用nHLAPred法,并结合其他T细胞表位预测方法,可得到抗原的CTL表位,准确率较高,可作为表位图谱绘制的有效工具。

蚤与鼠疫菌之间的生物学关系

鼠疫是一种自然疫源性疾病。在它的3个要素中,人们往往更偏重于研究鼠疫菌和宿主之间的关系,而忽视了传播媒介的重要作用。然而,实际上蚤在动物鼠疫的流行和保存过程中起着非常重要的作用。作者通过文献积累,列举了蚤与鼠疫菌之间的4种生物学关系而得出结论:蚤与鼠疫菌之间的生物学关系绝非一般的生物学概念上的寄生关系。在动物鼠疫流行过程中,这种关系的动态平衡是起决定性作用的。

鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V安全性初步研究

为了研究鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V质粒的安全性,试验运用SDS-PAGE电泳和琼脂糖电泳等方法检测了鼠疫DNA疫苗pVAX1/F1-V质粒的纯度,并以小鼠为动物模型进行了质粒pVAX1／F1-V的急性毒性和长期毒性试验,用PCR方法检测外源基因在小鼠组织中的分布情况,用ELISA、EIISPOT方法检测了其自身的免疫反应。结果表明,提取的质粒pVAX1/F1-V未检测到核酸及菌体蛋白污染;注射初期质粒pVAX1/F1-V 主要分布于注射部位的肌肉组织,其他组织有散在分布;小鼠接种4周后,质粒pVAX1/F1-V仅分布于注射部位。小鼠注射pVAX1/F1-V质粒后未产生明显的毒副反应及自身免疫损伤,也未检测到自身抗体。初步证明鼠疫DNA 疫苗pVAX1/F1-V安全性良好,为鼠疫菌新型DNA疫苗的应用奠定了基础。