Aurora蛋白激酶抑制剂VX-680对人肝癌细胞HepG2细胞间同质黏附力和迁移能力的影响

目的:研究Aurora蛋白激酶抑制剂VX-680对人肝癌细胞HepG2细胞间同质黏附力和迁移能力的影响。方法:分别设立实验组和对照组:实验组加VX-680,总共设置3个浓度组(3.125μmol/L组、6.25μmol/L组和12.5μmol/L组);对照组加DMSO。采用细胞缓慢聚集实验和分离实验观察不同浓度VX-680对HepG2细胞间黏附能力的影响。通过划痕愈合实验检测不同浓度VX-680对Hep G2细胞迁移能力的影响。Western blot检测HepG2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果 :细胞缓慢聚集实验结果显示,相比对照组,各实验组细胞所形成的细胞团块数均明显减少(P<0.01)。细胞分离实验结果显示,随着VX-680浓度的升高,N_(TC)/N_(TE)的比值逐渐降低,即细胞间黏附能力逐渐增强。划痕愈合实验结果显示,相比对照组,随着VX-680浓度的升高,细胞划痕愈合能力逐渐减弱。Western blot实验结果显示HepG2细胞中E-cadherin的表达随着VX-680浓度的升高而增加(P<0.05)。结论 :VX-680可以增加人肝癌细胞HepG2细胞间的同质黏附力,同时抑制其迁移。

Aurora蛋白激酶抑制剂研究综述

Aurora蛋白激酶是一类在细胞增殖过程起重要作用的丝/苏氨酸蛋白激酶,在人体中有Aurora A、Aurora B和Aurora C三个家族成员。Aurora蛋白激酶参与细胞有丝分裂过程,其异常表达会损害有丝分裂进程,并引起遗传不稳定性,最终导致细胞癌变。目前研究发现Aurora蛋白激酶在多种肿瘤细胞中高表达,并参与了这些肿瘤的发生发展。鉴于以上研究,以Aurora激酶为靶点的抗肿瘤药物研发为癌症治疗提供了新的策略。目前,已经有相当多的Aurora激酶抑制剂被开发出来,其中部分抑制剂展现出了显著的抑瘤效果,且已进入临床试验阶段。

蛋白激酶CK2及其抑制剂在肿瘤多药耐药中的研究进展

肿瘤耐药性是临床上化疗失败的主要原因之一。蛋白激酶CK2是一种高度保守、具有广泛生物学活性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可磷酸化数百种底物。CK2的激活及过表达在肿瘤发生、发展及耐药过程中起到重要作用,并且CK2通过多种机制和信号通路参与耐药细胞中药物的外排、DNA损伤修复以及药物逃逸反应等,并调控耐药细胞中分子伴侣的活性。本研究主要对蛋白激酶CK2的结构功能及其在肿瘤多药耐药中的作用机制进行综述,并对CK2抑制剂在血液系统肿瘤、乳腺癌、胃癌、肺癌等多种实体瘤中的应用进行了探讨,为临床上开发新的肿瘤耐药分子标志物以及肿瘤的靶向治疗提供新的思路和治疗方案。

蛋白激酶全抑制分析揭示KG-1细胞增殖的分子机制

目的:通过分析KG-1细胞对各种蛋白激酶抑制剂的反应,探讨其增殖的分子机制。方法:采用CCK-8法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot检测各种蛋白激酶抑制剂对KG-1细胞增殖、相关基因mRNA表达水平以及FGFR1下游信号通路蛋白磷酸化水平的影响。结果:NVP-BGJ398和PD173074有效抑制KG-1细胞的增殖,表明FGFR及其下游信号通路在KG-1细胞增殖过程中具有关键作用。使用FGFR抑制剂处理后,p-FGFR1和p-STAT5水平显著下降(P<0.001),p-Akt水平稍有下降(P<0.05),并未影响p-ERK水平(P>0.05)。结论:FGFR1OP2-FGFR1主要作用于下游STAT5信号通路,以促进细胞增殖。蛋白激酶全抑制分析是一种可靠而直接的方法,可用于确定癌细胞增殖的分子机制。

某院113例小分子蛋白激酶抑制剂不良反应分析

目的了解小分子蛋白激酶抑制剂药品不良反应(ADR)的发生特点。方法回顾性分析医院2018年1月至2021年12月上报国家药品不良反应监测中心的有关小分子蛋白激酶抑制剂的ADR报告,对患者性别、年龄、原患疾病、药品品种、上报主体,以及ADR发生时间、累及系统/器官、临床表现、治疗及转归等进行统计与分析,根据《药品不良反应报告和监测管理办法》对ADR的关联性和严重程度分级进行评价。结果共收集到113份ADR报告,涉及患者113例,发生ADR 121例次。其中,男女性别比为1.26∶1,年龄≥61岁83例(73.45%);报告主体为医师93例(82.30%);使用9种小分子蛋白激酶抑制剂,阿帕替尼致ADR 59例(52.21%);ADR发生在用药后1个月内91例(80.53%);主要累及皮肤及其附件33例次(27.27%)和消化系统29例次(23.97%);关联性评价为可能33份(29.20%),很可能73份(64.60%),肯定7份(6.19%);停药或对症处理后痊愈或好转93例(82.30%);新的及严重ADR表现为流泪异常、皮疹各1例(0.88%),Ⅳ级血小板减少2例(1.77%)。结论临床使用小分子蛋白激酶抑制剂时,应注意患者皮肤及其附件损害、消化系统损害等的发生;同时,临床药师应加强宣教,早识别、早干预,提高患者治疗的依从性和有效性。

蛋白激酶CK2天然产物类抑制剂的定量构效关系研究

目的 构建CK2天然产物类抑制剂的定量构效关系(quantitative structure-activity relationship,QSAR)模型,揭示影响该类抑制剂活性的结构因素,为新型CK2抑制剂的开发提供理论基础和实验依据。方法 基于文献报道的115个多骨架CK2天然产物类抑制剂,采用遗传算法(genetic algorithm,GA)联合多元线性回归(multiple linear regression,MLR)方法,建立了基于优选的Dragon描述符的QSAR模型,以留一法交叉验证系数Q^(2)_(LOO)以及相关系数R^(2)作为模型内部验证的评价指标;通过Q^(2)_(ext)和R^(2)_(ext)评估模型的外部预测能力。结果 最优2D-QSAR模型由8个描述符组成,基于训练集内部验证的统计学参数为Q^(2)_(Loo)=0.7914、R^(2)=0.8220;基于测试集外部验证的统计学参数为Q^(2)_(ext)=0.792 1、R^(2)_(ext)=0.799 8,表明该模型具有较高的可靠性和预测能力。结论 影响CK2天然产物类抑制剂活性的分子描述符包括IVDE、CATS2D_08_DA、nArX、IC1、Chi_D/Dt、SdssC、F08[C-O]以及C-006。本研究可为新型CK2抗癌抑制剂的发现提供实验指导。

受体相互作用蛋白激酶1介导坏死样凋亡参与心脑血管损伤及其抑制剂研究进展

坏死样凋亡是一种胱天蛋白酶非依赖性调节性细胞坏死方式,在心肌梗死、脑卒中、药源性心肌病和动脉粥样硬化等损伤相关性心脑疾病的进展中发挥重要作用。受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)是一种参与调节细胞坏死样凋亡的关键蛋白之一。RIPK1介导细胞坏死样凋亡参与(1)心肌损伤,如心肌缺血/再灌注损伤、心力衰竭和药源性心肌毒性等;(2)脑损伤,如脑缺血/再灌注损伤;(3)血管损伤,如动脉粥样硬化引起的血管内皮损伤。靶向抑制RIPK1能减少坏死样凋亡,对心脑血管损伤产生保护作用,表明RIPK1可能是治疗心、脑血管疾病潜在的靶点。目前已有多种类型RIPK1抑制剂,包括靶向RIPK1的D-天冬氨酸-高氨酸-甘氨酸残基中苯丙氨酸向内旋转从而与N端发生相互作用的活性构象的Ⅰ型,靶向RIPK1的D-天冬氨酸-亮氨酸-甘氨酸残基中苯丙氨酸朝外的非活性构象的ATP竞争性Ⅱ型和结合激酶结构域的疏水变构口袋的Ⅲ型,它们通过不同的靶点和机制抑制RIPK1的激酶活性,具有潜在的临床价值。本文综述了RIPK1依赖的坏死样凋亡的发生机制及其在心脑血管疾病中的作用,同时总结了RIPK1抑制剂的研究进展。

牛精子中蛋白激酶C抑制剂的纯化

在牛精子中发现了蛋白激酶C抑制剂。并用Sephadex G-200及等电聚焦柱将其纯化,这一蛋白激酶C的蛋白抑制剂的分子量约为63000,等电点为pH4.5左右。

人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究

目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对人胃癌细胞周期的影响

背景与目的:蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)已成为一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点。本研究旨在探讨PKC抑制剂Staurosporine(ST)对人胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901的增殖抑制、凋亡诱导及对其细胞周期的影响。方法:在用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率的基础上,通过细胞形态学观察凋亡小体,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:ST抑制MGC-803细胞生长,24h的IC50为54ng/ml,48h的IC50为23ng/ml;ST抑制SGC-7901细胞的生长,24h的IC50为61ng/ml,48h的IC50为37ng/ml。40、60、100ng/mlST分别作用MGC-803细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(23.6±1.8)%、(11.6±0.7)%、(3.3±0.2)%,而对照组为(54.3±3.1)%;G2/M期细胞分别为(22.6±4.0)%、(35.5±0.4)%、(36.8±5.5)%,而对照组为(13.5±0.2)%。40、60、100ng/mlST分别作用于SGC-7901细胞24h后,G0/G1期细胞分别为(27.1±1.4)%、(17.0±3.4)%,(13.7±0.7)%,而对照组为(52.5±4.4)%;G2/M期细胞分别为(21.9±2.6)%、(39.5±4.9)%、(38.4±3.1)%,而对照组为(13.5±2.2)%。实验组细胞与对照组比较,ST使两种细胞G0/G1期明显减少及G2/M期明显增加(P<0.01)。200ng/mlST作用24h后两种细胞的G1期前均出现明显的凋亡峰,可诱导细胞出现典型凋亡小体。

蛋白激酶C抑制剂的研究新进展

蛋白激酶C(PKC)是一组磷脂依赖性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,与蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶G(PKG)共同构成丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AGC超家族。PKC包括传统型PKC、新型PKC、非典型PKC和与PKC相关的一些激酶(PRK)成员。PKC广泛分布于哺乳动物的组织和细胞中,对细胞的生长代谢、增殖分化等起着重要的生物学作用。研究表明,多种细胞的变异和疾病的发生发展都与PKC的异常表达有关。因此,设计和寻找高效的PKC抑制剂对于多种有效药物的合成和临床上包括肿瘤、心血管疾病、高血压等多种疾病的治疗都具有非常重要的意义。近年来,关于PKC抑制剂的研究已经成为国内外研究的焦点。大量文献报道了多种有效的PKC抑制剂,并对其作用位点、作用机制以及临床试验数据等进行了分析。这些PKC抑制剂的发现对于PKC的结构分析和疾病的治疗具有重要的意义。因此,本文对这些高效的PKC抑制剂进行综述。

蛋白激酶C抑制剂对T细胞表达IL-2及IFN-γ的影响

目的 :研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和棉酚对体外活化T细胞表达白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和γ -干扰素 (INF -γ)的影响。方法 :在莫能菌素 (monensin)存在时 ,以佛波醇酯 (PDB) +离子霉素 (I)体外活化人外周血单个核细胞 (PBMC) ,以流式细胞术胞内细胞因子检测法分析H7和棉酚对CD3+ T细胞表达IL - 2和IFN -γ水平的影响。结果 :PDB +I处理PBMC 4h后 ,表达IL - 2和IFN -γ的CD3+ T细胞百分率分别为 16 6 4± 2 0 4和 2 5 81±3 5 3( x±s) ,而对照组二者的比率为 1 0 6± 0 2 2及 3 12± 0 77(P <0 0 5 )。棉酚 (5 0 μmol/L)可明显抑制IL - 2及IFN-γ的表达 ,抑制后表达率分别为 2 0 8± 0 12及 9 0 1± 1 90。H7作用比棉酚强 ,5 0 μmol/L的H7抑制后的IL - 2及IFN -γ阳性T细胞比率分别为 0 4 3± 0 0 6和 2 4 0± 0 2 7。结论 :PKC在CD3+ T细胞表达IL - 2及IFN -γ中发挥重要作用 ;PKC抑制剂H7及棉酚明显抑制IL - 2及IFN -γ的表达 ,提示H7和棉酚可通过抑制PKC活性 。

利用蛋白激酶抑制剂和激活剂调控甘蓝自交不亲和性

利用蛋白激酶抑制剂 (槲皮素 )和蛋白激酶激活剂 (佛波酯 )分别对甘蓝自交不亲和系与自交亲和系花蕾进行田间处理。结果表明 ,槲皮素处理后的自交不亲和系的自交亲和指数与对照相比有所提高 ,甚至转变为自交亲和系 ;而佛波酯处理后的自交亲和系的自交亲和指数与对照相比有所降低 ,甚至转变为自交不亲和系。差异显著性测验结果表明处理与对照之间在结荚率和自交亲和指数上均有显著差异。这为化学调控自交不亲和性提供了新方法。

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580对大鼠骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响。方法40只SD大鼠随机分为四组,A、B、C组行单侧膝关节前交叉韧带切除术(ACLT),A组于术后行关节腔内注射0.1 ml的SB203580(100μm/L),B组注射等量生理盐水(实验对照),C组不予任何处理(空白对照组),D组为正常对照组。术后8周处死动物。观察各组标本大体评分、病理组织学改变、软骨细胞凋亡指数。结果A组病理组织学改变轻于B、C组,各组均发现有软骨细胞凋亡。D组凋亡指数与其他三组比较,P均<0.05。A组的凋亡指数低于B、C组(P均<0.05)。结论ACLT可以导致大鼠OA的软骨细胞凋亡增加,关节腔内注射p38MAPK抑制剂能有效抑制其软骨细胞凋亡。

p38蛋白激酶抑制剂对大鼠膝骨关节炎的软骨保护作用

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580对大鼠膝骨关节炎(OA)的软骨保护作用。方法将40只大鼠随机均分为A、B、C、D组,均行单侧膝关节前交叉韧带切断。A、B组术后分别于关节腔注射0.1ml浓度为100、10μm/L的SB203580,每周1次,连续6周;C组注射等量生理盐水;D组不做任何处理。术后6周处死动物,比较各组软骨的大体变化、OA评分、软骨表面分级及Mankin炎性分级。结果A、B组软骨大体评分、软骨表面分级及Mankin炎性分级均轻于C、D组。结论关节腔注射p38 MAPK抑制剂能延缓软骨退变程度,具有软骨保护作用。

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对脓毒症大鼠多器官损伤的保护作用研究

目的 探讨脓毒症致多器官损伤的原因,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用和机制。方法 采用盲肠结扎穿刺术(CL P)制备脓毒症大鼠模型,治疗组采用术前给予p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80灌胃。在不同时间点观察大鼠血清肿瘤坏死因子- α(TNF-α)和白细胞介素- 1β(IL- 1β)以及生化指标如丙氨酸转氨酶(AL T)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、肌酸磷酸激酶同工酶(CPK -MB)浓度的变化。结果 CL P术后大鼠血清TNF-α、IL -1β显著升高,AL T、BU N、Cr、CPK- MB也进行性升高;血清AL T、BU N、Cr、CPK -MB变化与TNFα、IL 1β呈显著正相关。应用SB2 0 35 80后,血清TNF-α、IL- 1浓度显著降低,同时AL T、BUN、Cr、CPK MB也降低。结论 TNF-α、IL- 1β的大量释放是脓毒症致多器官损伤的原因之一,通过调控p38MAPK信号转导通路可对脓毒症所致多器官损伤起保护作用。

蛋白激酶C抑制剂诱导CNE-2Z细胞凋亡的研究

目的和方法：采用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）催化区抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）、调节区抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），诱导ＣＮＥ—２Ｚ细胞２４ｈ。结果：（１）ＳＴ、ＳＳ对细胞ＤＮＡ裂解的影响均随浓度增高而逐步增强，作用明显的终浓度分别为１×１０６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０５；（２）核形态观察：诱导后部分细胞核变小，核浓缩及核碎裂；（３）ＤＮＡ琼脂糖电泳：诱导后的细胞有典型梯状ＤＮＡ条带；（４）流式细胞仪分析：诱导组Ｇ１期前均有ＤＮＡ亚二倍体峰，即凋亡峰。细胞周期改变：ＳＴ使Ｇ２期增加、Ｇ１、Ｓ期减少；ＳＳ使Ｓ期增加和Ｇ１期减少。结论：ＰＫＣ抑制剂可有效地促进ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡，但与抑制剂剂量有关，细胞周期的改变可能在ＰＫＣ抑制剂诱导的细胞凋亡中起重要作用。

蛋白激酶-C抑制剂对脑缺血大鼠突触体游离钙的影响

目的 :探讨蛋白激酶C(ProteinkinaseC,PKC)参与神经损伤的机制。方法 :采用大鼠全脑缺血模型 ,观察脑缺血/再灌流后突触体游离钙的变化及PKC的抑制剂灯盏花对突触体游离钙的影响。结果 :脑缺血/再灌流可以导致突触体游离钙增加的抑制剂灯盏花可以阻止脑缺血/再灌流导致突触体游离钙增加。结论 :PKC参与神经元缺血性损伤可能与其促进钙内流有关。

酪氨酸蛋白激酶抑制剂联合放疗抑制乳腺癌细胞增殖以及荷瘤裸鼠肿瘤生长

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂(TKI)联合放疗对乳腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法利用噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的TKI对乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用。将乳腺癌细胞分为生理盐水组,TKI干预组(TKI处理后无X射线照射),X射线干预组(X射线照射,无TKI处理)和TKI联合放疗干预组。利用克隆形成实验比较各组细胞存活率。构建乳腺癌裸鼠异位瘤模型,考察不同干预组对肿瘤生长的抑制能力。结果克隆形成实验显示,单独利用X射线照射或者单独利用任何浓度的TKI抑制剂处理乳腺癌细胞,细胞的存活率均较处理前出现降低;但TKI联合放疗乳腺癌细胞存活率较前面两组(TKI干预组,X射线干预组)差异有统计学意义(P<0.05)。与TKI预处理组或X射线干预组比较,TKI联合放疗干预组能够明显抑制荷瘤裸鼠肿瘤体积的增长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TKI抑制剂联合放疗可有效抑制乳腺癌细胞的生长。

蛋白激酶抑制剂在类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)的发病率高、患病人口多,目前抗风湿性关节炎疾病缓解药物(disease-modifying antirheumatic drug,DMARD)主要是针对关键细胞因子靶点的生物制剂,但生物制剂面临着患者需要反复注射、价格昂贵等不足而不能满足RA的治疗。新开发DMARD药物已有针对Janus激酶(Januskinase,JAK)、脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)、p38激酶的抑制剂进入临床试验研究,蛋白激酶抑制剂的研发将为RA的治疗带来新的方法。