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The microRNA pathway activation in insect cell model upon Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus infection
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作者 QIAOJIN JIA YUEJUN FU 《BIOCELL》 SCIE 2023年第3期627-645,共19页
Background:The immune system of insects exerts fundamentally different antiviral mechanisms than mammals.MicroRNAs(miRNAs)play vital roles in developing insect antiviral immunity.MiRNAs expression profiles of insects ... Background:The immune system of insects exerts fundamentally different antiviral mechanisms than mammals.MicroRNAs(miRNAs)play vital roles in developing insect antiviral immunity.MiRNAs expression profiles of insects changed significantly during baculovirus infection.Methods:Differential expression profiles of miRNAs in Spodoptera frugiperda were monitored by next-generation sequencing(NGS)and RT-qPCR during Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus(AcMNPV)infection.The transcription levels of genes were detected by RT-qPCR.The 50%tissue culture infective dose(TCID_(50))endpoint dilution assay was used to determine the proliferation of progeny virus.Results:NGS revealed that 49 miRNAs were differentially expressed in Sf9 cells,and 10 of them were significantly up-or down-regulated.Though RT-qPCR analysis,we observed the similar trends for the expression patterns of significantly differentially expressed miRNAs from NGS.Moreover,the transcription levels of core genes,Exportin5,Dicer1,and Argonaute1,in miRNA biogenesis pathways were significantly increased after AcMNPV infection.For five selected miRNAs,miR-34-5p could regulate the proliferation of baculovirus progeny virus and energy metabolism.Conclusion:The miRNAs biogenesis pathway in Sf9 cells plays an important role and may be stimulated to resist AcMNPV infection.This work provides evidence for the molecular mechanism of baculovirus-insect interaction and offers novel ideas and directions for green pest control technology. 展开更多
关键词 MICRORNAS Spodoptera frugiperda autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus Host-virus interaction
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Encyclopedia of Autographa californica Nucleopolyhedrovirus Genes 被引量:2
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作者 David P. A. Cohen Martin Marek +2 位作者 Bryn G. Davies Just M. Vlak Monique M. van Oers 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2009年第5期359-414,共56页
The Autographa californica multiple capsid nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) was the first baculovirus for which the complete nucleotide sequence became known. Since then 15 years lapsed and much research has been perform... The Autographa californica multiple capsid nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) was the first baculovirus for which the complete nucleotide sequence became known. Since then 15 years lapsed and much research has been performed to elucidate putative functions of the annotated open reading frames of this virus and this endeavour is still ongoing. AcMNPV is the most well-known and well-studied baculovirus species, not in the least for its application as a vector for the high-level expression of foreign genes in insect cells. This article is the first monograph of a single baculovirus and gives a current overview of what is known about the 151 AcMNPV ORFs, including (putative) function and temporal and spatial presence of transcripts and protein. To date 60 ORFs have a proven function, another 19 ORFs have homologs for which functions are known in other baculoviruses and 72 ORFs are still enigmatic. This paper should assist the reader in quickly finding the essentials of AcMNPV. 展开更多
关键词 BACULOVIRUS autographa californica multiple capsid nucleopolyhedrovirus(AcMNPV) Functional genomics Review
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苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒在家蚕蛹体内的复制及重组病毒外源基因的表达 被引量:5
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作者 张志芳 何家禄 +2 位作者 周乃明 华刚 吴祥甫 《蚕业科学》 CAS CSCD 1993年第4期203-207,共5页
关键词 苜蓿银纹夜蛾 核型 球状病毒 家蚕
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氯化汞对草地贪夜蛾sf9细胞及核型多角体病毒的损伤与致突变研究 被引量:1
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作者 林健荣 邓平建 +2 位作者 李喜梅 房师松 霍永康 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期88-94,共7页
目的试验以草地贪夜蛾细胞sf9作为受体,检测氯化汞对其生长发育的影响。方法采用台盼兰染料排斥法测定细胞活力,苏木素-伊红染色法检测细胞中的微核,对经氯化汞处理诱变的病毒AcMNPV的DNA进行PCR扩增,产物经测序后进行分子突变分析。结... 目的试验以草地贪夜蛾细胞sf9作为受体,检测氯化汞对其生长发育的影响。方法采用台盼兰染料排斥法测定细胞活力,苏木素-伊红染色法检测细胞中的微核,对经氯化汞处理诱变的病毒AcMNPV的DNA进行PCR扩增,产物经测序后进行分子突变分析。结果sf9细胞在4μg·ml-1的氯化汞浓度作用下,其细胞表面变得粗糙,分裂生长减慢,当剂量增大到7μg·ml-1时,便可观察到一些细胞的细胞膜破裂,在9μg·ml-1时,某些细胞的完整性受到破坏。用苏木素-伊红染色法检测细胞中的微核现象时,9μg·ml-1氯化汞处理区的微核率高达6.8%,有些细胞出现三核甚至多核的核裂现象,反映部分细胞的完整性受到一定程度的损伤。AcMNPV病毒经氯化汞短时间处理后接种于sf9细胞,多角体在sf9细胞中的形成数目较对照区少,异常多角体的比例增加,抽提经氯化汞处理的AcMNPV的DNA,采取PCR技术进行扩增反应,对获得的扩增产物进行测序分析,发现DNA序列上的碱基有2处G→C、T→C的转换和碱基缺失的现象。结论一定剂量的氯化汞将会引起草地贪夜蛾sf9细胞及核型多角体病毒的损伤与致突变。 展开更多
关键词 氯化汞 草地贪夜蛾 核型多角体病毒 损伤 突变
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苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒对甜菜夜蛾幼虫及成虫的影响 被引量:1
5
作者 王节萍 方继朝 +2 位作者 郭慧芳 刘宝生 钟万芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第1期40-44,共5页
分别研究了甜菜夜蛾在幼虫期和成虫期对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)的敏感性.结果表明,AcNPV对4龄甜菜夜蛾幼虫的致死中浓度为1 ml 9.1×106 PIB(多角体),4龄幼虫摄入亚致死剂量病毒对化蛹产生不良影响,并使性比发生变化,雌雄... 分别研究了甜菜夜蛾在幼虫期和成虫期对苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)的敏感性.结果表明,AcNPV对4龄甜菜夜蛾幼虫的致死中浓度为1 ml 9.1×106 PIB(多角体),4龄幼虫摄入亚致死剂量病毒对化蛹产生不良影响,并使性比发生变化,雌雄蛹比为0.6~0.8,较对照明显升高;幼虫期摄入病毒亦对其成虫的繁殖力产生影响,无论是每雌产卵量、总卵量还是卵孵化率均比对照显著降低,交配比例和次数也比对照明显下降.甜菜夜蛾成虫期摄入病毒亦对繁殖力产生影响,产卵量和交配比例和次数以及卵孵率均比对照明显下降,此外,还对后代幼虫的存活率有显著影响. 展开更多
关键词 幼虫 甜菜夜蛾 银纹夜蛾 多角体病毒 苜蓿 成虫 产卵量 对照 影响 摄入
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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究 被引量:3
6
作者 林广云 龙綮新 +2 位作者 何代芬 曲士芮 庞义 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期151-158,共8页
利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制... 利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第25位的氨基酸密码子由GGT变为GAT,该位氨基酸由甘氨酸(Gly)变为天冬氨酸(Aspq)还利用PCR技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒pEV55,与不形成多角体的重组病毒TnNPV-HBsD4DNA共转染Sf9细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。 展开更多
关键词 昆虫病毒 苜蓿丫纹夜蛾 核型多角体病毒 多角体
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利用双色荧光观察分析重组家蚕杆状病毒对昆虫细胞及蚕体组织的感染 被引量:4
7
作者 王文兵 马双双 +3 位作者 李兵 叶思思 高静 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期634-637,共4页
尝试将红色荧光蛋白(RFP)作为昆虫表达体系的分子标签,克隆了rfp基因的读码框,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将该基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)中,获得重组杆状病毒BmNPV-rfp。对家蚕细胞的感染表明,rfp适于在昆虫细胞中表达,... 尝试将红色荧光蛋白(RFP)作为昆虫表达体系的分子标签,克隆了rfp基因的读码框,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将该基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)中,获得重组杆状病毒BmNPV-rfp。对家蚕细胞的感染表明,rfp适于在昆虫细胞中表达,在显微镜下红色荧光很明显,说明RFP可以作为杆状病毒表达的分子标签。BmNPV-rfp和另一种插入绿色荧光蛋白基因gfp的家蚕重组杆状病毒BmNPV-gfp混合感染家蚕细胞和幼虫的实验表明,二者的荧光很少在同一细胞中发生重叠,说明昆虫细胞大多只感受1次同一来源的病毒。BmNPV-rfp、BmN-PV-gfp与AcNPV混合感染Sf21细胞的结果也证明了该推断,并且还显示AcNPV可以协助BmNPV来源的病毒基因在Sf21细胞中表达以及协助病毒增殖或产生杂交病毒,但尚未明确其机制。 展开更多
关键词 红色荧光蛋白 绿色荧光蛋白 家蚕核型多角体病毒 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 细胞感染 组织感染
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异源多角体蛋白对家蚕核型多角体病毒粒子的包装 被引量:5
8
作者 季平 查新民 +3 位作者 张国英 于继彬 顾维 沈卫德 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期50-55,共6页
利用PCR方法从AcMNPV基因组DNA中分离出多角体蛋白基因 ,将该扩增片段克隆到转移载体pBacPAK8中 ,得到重组转移载体pOAc。将该质粒DNA与线性化的Bm BacPAK6病毒基因组DNA共传染BmN细胞 ,得到了能形成多角体且不产生蓝色空斑的重组病毒hp... 利用PCR方法从AcMNPV基因组DNA中分离出多角体蛋白基因 ,将该扩增片段克隆到转移载体pBacPAK8中 ,得到重组转移载体pOAc。将该质粒DNA与线性化的Bm BacPAK6病毒基因组DNA共传染BmN细胞 ,得到了能形成多角体且不产生蓝色空斑的重组病毒hp BmNPV。纯化该重组病毒的多角体颗粒 ,并对多角体蛋白、病毒核酸及多角体病毒颗粒进行分析 ,发现AcMNPV的多角体蛋白能在家蚕细胞中大量表达且能在细胞内识别家蚕核型多角体病毒并组装成多角体颗粒 ;病毒基因组DNA因部分交换 ,其酶切行为发生了相应的变化 ;电镜观察发现经AcMNPV多角体蛋白包装的家蚕核型多角体病毒的多角体颗粒大小为1 2 μm~ 2 9μm 。 展开更多
关键词 苜蓿尺蠖核型多角体病毒 多角体蛋白 家蚕核型多角体病毒 异源包装
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复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒制剂对两种夜蛾的毒力测定 被引量:8
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作者 侯建文 赵烨烽 +2 位作者 姚国强 蒋伟民 杨文勤 《中国病毒学》 CSCD 1998年第4期345-350,共6页
对防治蔬菜甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHübner)和斜纹夜蛾(ProdenialituraFabricius)为主并兼治菜螟、菜青虫、小菜蛾等鳞翅目害虫的单一型和复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(... 对防治蔬菜甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHübner)和斜纹夜蛾(ProdenialituraFabricius)为主并兼治菜螟、菜青虫、小菜蛾等鳞翅目害虫的单一型和复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AutographacalifornicanuclearpolyhedrosisVirus,AcMNPV)生物杀虫剂进行筛选。毒力测定结果表明:选用单剂的AcMNPVA株(从甜菜夜蛾虫体增殖获得)的毒力(LD50=131.8PIB/头)比AcMNPVB株(从草地贪夜蛾细胞株Sf9中获得)的毒力(LD50=1949.4PIB/头)高14.79倍。AcMNPVA株加苏云金杆菌(Bt)加斜纹夜蛾核型多角体病毒(PlNPV)形成的复配型AcMNPVA株制剂对甜菜夜蛾二龄幼虫的LD50值(21.82~21.4PIB/头)与单剂AcMNPVA株的LD50值(168.84~204.36PIB/头)比值为9.5~7.7倍。同样复配型AcMNPVA株制剂对斜纹夜蛾二龄幼虫LD50(3.16~15.46PIB/头)与单剂PlNPVLD50值(16.02~53.53PIB/头)比值为5.1~3.5倍。说明以Bt和非耙标害? 展开更多
关键词 苜宽厚银纹夜蛾 核型多角体病毒 夜蛾 毒力测定
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杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备 被引量:1
10
作者 李玲玲 李朝飞 +1 位作者 陈维春 庞义 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期5-7,共3页
目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进... 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39基因 原核表达 抗体
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重组AcMNPV感染家蚕后造成宿主组织液化的机制分析 被引量:1
11
作者 彭伟 陈爱春 汪生鹏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期680-687,共8页
杆状病毒的组织蛋白酶(V-CATH)和几丁质酶(V-CHIA)是病毒感染宿主后造成宿主组织液化的关键酶。家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染家蚕后会导致宿主组织的液化,而苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)感染家蚕后不会造成宿主组织的液化。为... 杆状病毒的组织蛋白酶(V-CATH)和几丁质酶(V-CHIA)是病毒感染宿主后造成宿主组织液化的关键酶。家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染家蚕后会导致宿主组织的液化,而苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)感染家蚕后不会造成宿主组织的液化。为了分析AcMNPV不造成家蚕宿主组织液化的原因,利用Bac-to-Bac系统将BmNPV的v-cath(Bmcath)、v-chiA(BmchiA)同时或分别重组到AcMNPV的极晚期强启动子p10和polh下游,并以同样的方法将AcMNPV的v-cath(Accath)、v-chiA(AcchiA)同时或分别重组到AcMNPV的p10和polh下游,从而构建6种重组AcMNPV。结果显示6种重组AcMNPV均能感染家蚕,并造成家蚕宿主组织的液化,说明重组AcMNPV中v-cath和v-chiA的过量表达在病毒对家蚕组织液化过程中发挥了重要作用。通过对感染6种重组AcMNPV之间的蚕体液化发生时间和液化率进行比较,发现相对于v-chiA,v-cath对组织液化的作用可能更加直接。检测比较感染AcMNPV和重组AcMNPV家蚕血淋巴中的组织蛋白酶和几丁质酶活性,两种酶的活性均随v-cath和v-chiA基因拷贝数的增加而增加。AcMNPV感染后不会造成家蚕宿主组织液化可能是由于病毒的组织蛋白酶活性太低,而不是由Bmcath和Accath、BmchiA和AcchiA之间的序列差异造成的。 展开更多
关键词 苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒 家蚕 组织液化 组织蛋白酶 几丁质酶 重组表达
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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒囊膜内核衣壳排列图式的电镜观察 被引量:3
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作者 谢薇 谢天恩 《中国病毒学》 CSCD 1999年第3期280-283,共4页
The arrangement patterns of nucleocapsids within the envelope of \%Autographa californica\% nuclear polyhedrosis virus were studied by electron microscopy. Numbers of nucleocapsids observed in an envelope in their cro... The arrangement patterns of nucleocapsids within the envelope of \%Autographa californica\% nuclear polyhedrosis virus were studied by electron microscopy. Numbers of nucleocapsids observed in an envelope in their cross sections ranged from 1 to 17, and the frequencies at 2,3,4,5,6 and 7 nucleocapsids were significantly higher than the others, suggesting that these numbers of nucleocapsids were more commonly involved in an envelope. The regular arrangement patterns of nucleocapsids within envelope were observed in cross sections. Envelope outlines can be classified into a triangle (3 nucleocapsids in an envelope),lozenge and square (4 nucleocapsids in an envelope), trapeziun (5 nucleocapsids in an envelope), pentagons (5 or 8 nucleocapsids in an envelope) and hexagons (7 or 10 nucleocapsids in an envelope). The irregular arrangement patterns of nucleocapsids within envelopes were also observed in cross sections. 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾 核型多角体病毒 病毒囊膜 电镜
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一种新的杆状病毒转移载体的构建 被引量:1
13
作者 张耀洲 吴祥甫 +1 位作者 李载平 吕鸿声 《浙江农业大学学报》 CSCD 1993年第4期383-387,共5页
从家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中分别克隆出其P10基因。从BmNPV P10中亚克隆得到其5′端上游片段,经PCR定位突变使之ATG区突变成一个BglⅡ酶切位点。从AcMNPVP 10中亚克隆得到基因3′端下游片段,克... 从家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中分别克隆出其P10基因。从BmNPV P10中亚克隆得到其5′端上游片段,经PCR定位突变使之ATG区突变成一个BglⅡ酶切位点。从AcMNPVP 10中亚克隆得到基因3′端下游片段,克隆入经突变的BmNPV P10基因启动子的下游,构建成一个新的转移表达载体pBmAcPV-1,由于BmNPV和AcMNPV P10基因及两端的同源性高达90%以上,该载体可以分别与野生型BmNPV和AcMN-PV DNA进行同源重组。 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体 病毒 载体
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甜菜夜蛾核多角体病毒VP39蛋白在苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒中的功能研究 被引量:1
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作者 李赛男 吕怡娜 +3 位作者 姜焕焕 黄麟淇 区炳明 刘文华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1440-1449,共10页
【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV... 【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV中行使功能,为深入探究杆状病毒的核衣壳装配机理打下理论基础。【方法】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统在AcMNPV vp39缺失型重组bacmid(bAcvp39KO)的基础上构建携带SeMNPV vp39基因、绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescence protein,egfp)和多角体蛋白基因(Polyhedrin,polh)的重组病毒(vAcSevp39:FLAG)。利用Western blotting检测分析SeMNPV vp39在vAcSevp39:FLAG转染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)IPLB-Sf21-AE clonal isolate 9(Sf9)细胞中的表达情况,通过荧光显微镜观察vAcSevp39:FLAG在Sf9中的感染和扩散情况,采用病毒滴度测定并绘制病毒生长曲线检测vAcSevp39:FLAG的感染性芽生型病毒粒子产量,并以电子显微镜观察vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中的形态发生情况。【结果】Western blotting检测结果表明,SeMNPV VP39能在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中获得表达;荧光显微镜观察和病毒生长曲线测定结果表明,在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中无感染性的芽生型病毒粒子产生,与AcMNPV vp39缺失型重组病毒(vAcvp39KO)的现象一致;电子显微镜观察发现,与vAcvp39KO不同的是,在vAcSevp39:FLAG转染的细胞中虽然未产生核衣壳,但在感染细胞的核中存在大量空的透明长管状衣壳结构,表明SeMNPV VP39能挽救vAcvp39KO的衣壳结构装配,但在AcMNPV中不具备装配核衣壳的能力。【结论】SeMNPV VP39在AcMNPV中虽能形成衣壳结构,但不能有效装配核衣壳,导致无芽生型病毒粒子和包埋型病毒粒子产生。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39 甜菜夜蛾核多角体病毒 芽生型病毒粒子 核衣壳装配
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杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备 被引量:1
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作者 李玲玲 李朝飞 庞义 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期1-4,共4页
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以... 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒p35基因基因表达多克隆抗体
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杆状病毒Ac78 C末端保守区域的功能初步分析 被引量:1
16
作者 李赛男 杨凯 +1 位作者 刘文华 赵海洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期748-756,共9页
杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的orf78(即Ac78)是最近被发现的杆状病毒核心基因,在杆状病毒的生活周期中具有重要功能.氨基酸序列分析表明,Ac78的C末... 杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的orf78(即Ac78)是最近被发现的杆状病毒核心基因,在杆状病毒的生活周期中具有重要功能.氨基酸序列分析表明,Ac78的C末端105~108位氨基酸区域在GroupINPVs旁系同源物中高度保守.为研究该保守区域在Ac78功能中的作用,利用Bac—to-Bac杆状病毒表达载体系统成功构建了缺失该保守区域,并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的Ac78截短补回型重组病毒(vAe78:del105.108).荧光显微镜分析和病毒生长曲线测定结果表明,在vAc78:del105.108转染的Sf9细胞中,感染性的芽生型病毒粒子(buddedvirion,BV)产生量与Ac78全长补回型重组病毒(vAc78:HA)基本一致;电镜观察发现,在vAc78:del105.108转染的细胞中,呈现与vAc78:HA的现象一致的典型的杆状病毒感染特征,多粒包埋型病毒粒子(multiple nucleocapsid—enveloped occlusion-derived virion,M—ODV)以及包埋有M-ODV的包涵体均能正常形成;免疫荧光实验表明,在vAc78:del105.108感染的Sf9细胞中,从病毒感染细胞24h时开始,Ac78专一定位于感染细胞的内核膜附近,与vAc78:HA的现象一致.上述结果表明,Ac78的C末端105-108位氨基酸保守区域对于BV和M—ODV的有效产生以及Ac78的亚细胞定位非必需. 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 C末端保守区域 芽生型病毒粒子 多粒包埋型病毒粒子
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夜蛾科卵的分类(鳞翅目)(一) 被引量:8
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作者 卢筝 王素梅 +2 位作者 周静若 丁传生 郁枫 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期97-102,共6页
本文记述了12种夜蛾的卵。从不同方向的电镜像片显示出他们的形状和被用作分类的特征,包括精孔区的形态特征,纵脊和横道的状况,气孔的位置、形状和大小,小室的形状和表面结构。
关键词 夜蛾科 分类 鳞翅目
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应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原 被引量:1
18
作者 周耐明 宓怡德 +2 位作者 金伟 李载平 吴祥甫 《浙江农业大学学报》 CSCD 1995年第1期81-84,共4页
人乙型肝炎病毒(adr亚型)表面抗原S基因克隆到PuAC-5苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上,所构建的重组转移载体质粒与野生型AcNPVDNA共转染Sf-21细胞,经空斑法筛选和纯化,得到了含HBVS基因的重组病毒A... 人乙型肝炎病毒(adr亚型)表面抗原S基因克隆到PuAC-5苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上,所构建的重组转移载体质粒与野生型AcNPVDNA共转染Sf-21细胞,经空斑法筛选和纯化,得到了含HBVS基因的重组病毒AcNPVS.用放射免疫法测定了AcNPVS感染的Sf-21细胞及其培养液中的HBsAg,总表达量为1.22μg/10 ̄6细胞. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表面抗原 昆虫细胞 基因表达
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多角体病毒琼脂免疫双扩散和ELISA检测研究 被引量:1
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作者 金凤 方光远 +1 位作者 张长青 侯建文 《金陵科技学院学报》 2005年第3期66-68,共3页
用提纯的SpltNPV、AcNPV病毒粒子分别为免疫抗原获得抗血清,以此抗血清为抗体,提纯的SpltNPV、AcNPV多角体裂解所得粗提纯病毒粒子为检测抗原,初步建立两种病毒的琼脂免疫双扩散法和ELISA间接检测方法。琼脂免疫双扩散结果表明:所得抗... 用提纯的SpltNPV、AcNPV病毒粒子分别为免疫抗原获得抗血清,以此抗血清为抗体,提纯的SpltNPV、AcNPV多角体裂解所得粗提纯病毒粒子为检测抗原,初步建立两种病毒的琼脂免疫双扩散法和ELISA间接检测方法。琼脂免疫双扩散结果表明:所得抗血清能识别粗提抗原,但不能与细胞培养的病毒粒子反应。两种病毒I-ELISA检测灵敏度分别达11.23、11.67 ng。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 斜纹夜蛾核型多角体病毒 琼脂免疫双扩散 间接ELISA
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家蚕核型多角体病毒gp64基因的定位及克隆
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作者 王运湘 农广 +1 位作者 庞义 龙綮新 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期111-113,共3页
以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒AcMNPV的膜表面糖蛋白基因gp64作为探针,对经不同内切酶酶切的家蚕核型多角体病毒基因组DNA进行Southern杂交分析,发现BamHⅠ酶切产生的4.2kb和7.6kb片段呈阳性杂交... 以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒AcMNPV的膜表面糖蛋白基因gp64作为探针,对经不同内切酶酶切的家蚕核型多角体病毒基因组DNA进行Southern杂交分析,发现BamHⅠ酶切产生的4.2kb和7.6kb片段呈阳性杂交,经DNA片段回收,将4. 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 GP64 基因定位 克隆 病毒
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