禽大肠杆菌DNA旋转酶活性改变与其对氟喹诺酮类药物耐药性的关系研究

用亚ＭＩＣ（药物最低抑菌浓度）连续递增式传代培养法获得了禽大肠杆菌（血清型为Ｏ１、Ｏ２、Ｏ７８）对氟喹诺酮类药物（ＦＱｓ）—诺氟沙星（ＮＦＬＸ）、依诺沙星（ＥＮＸ）、环丙沙星（ＣＰＬＸ）稳定的高度耐药菌株（ＭＩＣ提高≥１２８倍），通过对耐药菌株和敏感菌株ＤＮＡ旋转酶的分离、提取及活性检测，并进行统计学分析比较，研究ＤＮＡ旋转酶活性改变与细菌耐药的关系，结果表明：禽大肠杆菌对氟喹诺酮类药物产生耐药的一个重要因素为其ＤＮＡ旋转酶的活性改变。

鸡胚致死率作为检验鸡大肠埃希菌致病力指标的探讨

为探讨鸡胚致死率在检验鸡大肠埃希菌致病力方面的应用潜力，试验采用SPF级12日龄鸡胚和1日龄公雏鸡分别接种鸡大肠埃希菌菌株，检测20株鸡大肠埃希菌菌株对12日龄鸡胚和1日龄公雏鸡的致死率的相关性。结果显示，8株来源于患败血症鸡只的菌株致病力比较高，鸡胚致死率达到40％～70％；而来源于粪便的12株菌株中，10株菌株的致病力较低，其鸡胚致死率在0％～20％之间；雏鸡致死率与鸡胚致死率是相关的。表明鸡胚致死试验可反映出大肠埃希菌的毒力强弱，即鸡胚致死率可作为检验鸡大肠埃希菌致病力强弱的一种方法。

禽致病性大肠杆菌的分离、O血清群鉴定及药物敏感试验

对2005年5月-2016年3月自河北、山东、河南、江苏、陕西、辽宁等省发病鸡场疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的194株禽致病性大肠杆菌进行了生化特性测定、O 抗原血清群鉴定及药敏试验。试验用5种大肠杆菌单因子（O1、O2、O57、O65、O78）阳性血清进行 O 血清群鉴定,确定了124株 O 血清群,占鉴定菌株数的63.9%（124/194）,其中 O13株、O226株、O5715株、O6547株和 O7833株,O65和 O78为优势菌株,而 O2和 O57血清群菌株次之,O1血清群菌株最少。8种药物（氨苄西林、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星、环丙沙星、头孢噻呋和氟苯尼考）的药敏试验结果表明,受试的5株大肠杆菌分离株均对环丙沙星和新霉素敏感,而对其他药物均有不同程度的耐受。本研究结果表明 O65、O78、O2和 O57血清群高度流行,为进一步研发多价菌苗奠定了基础。

甘草多糖对肉仔鸡肠道微生物调控的研究

研究饲料中添加甘草多糖对肉鸡肠道微生物区系的调节作用。试验分5个组,其中3个组饲喂分别添加0.5、1.0和1.5g/kg甘草多糖的饲料,1个组饲喂添加0.09g/kg金霉素的饲料,1个组饲喂基础日粮作为对照。结果表明:1.0g/kg甘草多糖组肠道大肠杆菌数和沙门氏菌数均比对照组低(P<0.05),与金霉素组相比差异不显著。肠道优势菌群乳酸杆菌数和双歧杆菌数在15日龄时高于对照组(P>0.05)和金霉素组(P<0.05);30日龄时高于对照组(P<0.05),但低于金霉素组(P<0.05)。甘草多糖适宜的添加水平为1.0g/kg。

黄芪甲苷调节鸡异嗜性粒细胞吞噬和杀伤大肠埃希菌O78作用的体外研究

用涂板菌落计数和激光共聚焦方法观察中药单体黄芪甲苷作用后的鸡异嗜性粒细胞吞噬和杀伤鸡大肠埃希菌O78能力的变化,结果显示,黄芪甲苷在5μg/mL有极显著提高异嗜性粒细胞吞噬大肠埃希菌O78的作用(P<0.01),并且在异嗜性粒细胞发挥杀伤作用12h后有极显著增强其杀伤作用的功效(P<0.01)。结果表明,黄芪甲苷能够提高异嗜性粒细胞吞噬、杀伤大肠埃希菌O78的活性,从而起到增强机体抗病能力,提高机体免疫力的作用。

山东部分地区鸡源致病性大肠埃希菌优势血清型筛选及致病力试验

收集山东省部分地区养鸡场送检病料,对该区域鸡致病性大肠埃希菌的血清型分布、致病力情况进行了研究。在送检的108份病料中分离到80株大肠埃希菌,分离率为74.0%。通过血清型鉴定试验,定型O抗原共74株,分为9个血清型,即O2、O78、O157、O35、O103、O6、O18、O178和O55。其中优势血清型为O2型23.0%(17/74)、O35型20.2%(15/74)、O78型17.6%(13/74)3种,占定型菌株的61.2%,占待检菌株的56.2%。说明山东地区鸡大肠埃希菌血清型分布具有复杂性的特点。

鸡大肠杆菌FimH基因C端结构域克隆及特性分析

[目的]通过进一步研究禽大肠杆菌I型菌毛主要结构基因FimH的基因结构及其抗原特性,为深入探索鸡大肠杆菌致病机理及研制基因工程疫苗奠定必要的理论基础。[方法]本文以已发表的Fim H基因C端核酸序列为参考序列,设计并合成引物,扩增鸡大肠杆菌JS1、JS2、JS6三个菌株的Fim H相应基因,使用Lasergene软件对其进行序列比对、蛋白质结构预测以及进化树的绘制等。[结果]JS1、JS2、JS6三个菌株的核酸同源性分别为97.3%、97.7%和97.3%,而氨基酸序列的相似性分别为95.3%、97.6%和95.3%。此外,其抗原决定簇基本相似,但在第78和79位抗原决定簇不同,这说明本研究中的3个鸡大肠杆菌菌株的Fim H基因序列及氨基酸序列的变异可能对Fim H蛋白抗原结构产生了轻微影响。进化树分析发现,本实验室分离的3株鸡大肠杆菌菌株FimH基因与选择的国内鸡大肠杆菌菌株的Fim H基因同源性比较高,同处于一个进化分支中。[结论]本研究结果表明鸡大肠杆菌I型菌毛Fim H基因未发生明显变异,这为后续研究Fim H基因的功能及其基因工程亚单位疫苗研发提供了重要的实验基础。

鸡大肠埃希氏菌灭活疫苗生产工艺改进试验

为解决鸡大肠埃希氏菌灭活疫苗生产时培养菌数低、使用时免疫反应重的问题，在EC24、EC30、EC45、EC50发酵培养中加入0．43％～0．53％葡萄糖，试验组和对照组相比，前者培养菌数增加了40．8％、疫苗产量增加了32％、降低了生产成本。采用高速离心方法排除了菌液中的毒素、减少了疫苗的副作用，蛋鸡免疫试验苗后产蛋率比免疫常规疫苗高8．7个百分点。按新工艺试制疫苗4批，安全、效力检验合格，其它各项指标检验均能达到国家标准。

鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及系统发育分析

为确定江苏省徐州市某养鸭场病死鸭的病原菌,从发病鸭的肝中分离到1株细菌并命名为JSE 4,根据形态特征、培养特性、生化试验、16S r R N A分子鉴定结果可确定该菌为大肠杆菌(E.coli)。对该分离菌进行致病型快速鉴定、动物致病试验、毒力基因检测、药敏试验、系统发育分析,结果显示,该分离株为禽致病性大肠杆菌(APEC),可引起试验组SPF雏鸭死亡,死亡率为16.7%。分离株含有14种毒力基因中的12种,29种常用抗菌药物中,该分离株仅对链霉素、呋喃妥因、亚胺培南、呋喃唑酮、头孢他啶、氨曲南这6种药物具有敏感性。该分离株与源自比利时水源、瑞士禽肉源和中国鸭源分离株的亲缘关系最近,与比利时水源、瑞士禽肉源分离株的同源性高达99.7%。研究表明,从江苏徐州周边养鸭场病死鸭中分离到1株多重耐药的禽致病性大肠杆菌。

制备禽致病性大肠杆菌菌蜕的三种方法比较

菌蜕(Bacterial ghosts)是一种只含有细菌内、外膜结构的细菌空壳,可作为新型疫苗和传递载体。本研究通过3种方式制备禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenicity Escherichia coli,APEC)分离株DE17的菌蜕,评价不同的菌蜕制备方法。结果表明,利用噬菌体Phi X174的裂解基因E构建的溶菌质粒pBV220-E制备DE17菌蜕,对DE17菌株裂解率可达99.9%,扫描电镜观测结果表明,在DE17两端或中部形成可见的跨膜孔道,呈现典型的菌蜕结构。利用合成的细胞穿透肽MAP(KLALKLALKALKAALKLA)作用于DE17制备菌蜕,结果表明,10μmol/L的MAP可实现对OD_(600)=0.1的DE17完全灭活,扫描电镜虽未看到明显的跨膜孔道,但细菌的膜结构呈现沟壑状,而构建的可表达MAP的溶菌质粒pBV220-MAP并不能实现对DE17的裂解作用。本研究通过比较分析不同APEC菌蜕的制备方式,为进一步研究菌蜕疫苗和提高菌蜕疫苗的生物安全性提供参考。

H9亚型禽流感病毒与大肠杆菌并发感染的诊断

目的对苏北某鸡场送检病鸡,剖检显示严重的心包炎、肝周炎,部分脏器出血,进行实验室诊断。方法取病鸡肝脏划线接种麦康凯平板,同时取病鸡肝脏、脾脏及胰腺,病料混合研磨后接种3枚10日龄SPF鸡胚,每个鸡胚接种0. 2 ml研磨液。将平板上长出的细菌纯化后进行细菌生化实验及16S r DNA基因测序鉴定。死亡鸡胚收集尿囊液进行试纸条检测、血凝及血凝抑制实验。结果生化试验、16S rDNA扩增序列分析结果显示麦康凯上红色菌落为大肠杆菌,分离病毒具有血凝性且能被禽流感H9亚型特异性血清抑制。结论本病例为H9亚型AIV与大肠杆菌混合感染。