产绿链霉菌发酵生产Avilamycin菌丝结团问题研究

阿维拉霉素(avilamycin)是一种新型消化促进剂,能够明显的促进鸡和猪的生长,提高饲料的利用率。但是,在发酵生产研究中发现菌丝结团是影响阿维拉霉素生产的主要问题之一。文章主要研究了碳源、氮源、金属离子及接种量对阿维拉霉素生产菌丝结团的影响。试验研究表明,菌团的形成会降低阿维拉霉素的产量,阿维拉霉素的产量与菌体生物量成正相关,与菌丝团的大小成负相关。容易被菌体利用的碳源,有利于菌丝生长,不利于菌丝体结团;容易利用的氮源和不容易利用的氮源复合不利于菌丝体结团。同时研究发现,适量钙、镁及铁离子促进菌体生长、抑制菌丝结团;过量的钙、镁、铁离子抑制菌体生长,促进菌体结团;适量的锰、钴离子有利于阿维拉霉素产生,但对菌体生长没有明显的影响,且过量的锰、钴离子抑制菌体生长,促进了菌丝团的形成,不利于阿维拉霉素的生产。

响应面法优化卑霉素发酵培养基的研究

在对卑霉素发酵培养基进行全因子试验和最陡爬坡试验后,运用Box-Behken设计的响应面试验(Response-surface experiment)对绿色产色链霉菌TN-29进行卑霉素发酵培养基的优化。响应面法对40h分批发酵结果的优化分析表明:豆饼粉、甘露醇及葡萄糖三种因素对卑霉素无明显的交互作用,在豆饼粉、甘露醇和葡萄糖的浓度分别为3.61%,2.99%,0.58%时,发酵液中效价值达到77.9U/ml的最大值。

卑霉素摇瓶发酵工艺研究

根据代谢发酵控制原理,采用二次回归正交旋转组合设计,对卑霉素摇瓶发酵培养基组分及其接种量、装量和初始pH摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明,卑霉素摇瓶发酵培养基的最优配方为:豆饼粉45 g/L,可溶性淀粉5 g/L,甘露醇24 g/L,葡萄糖5 g/L,硫酸铵2 g/L,硫酸镁0.05 g/L;最优发酵条件为:摇瓶装量100 mL/L,接种量8%,C aCO35 g/L(调节pH值),在温度28℃、发酵周期40 h的优化条件下,得到卑霉素的效价值为77.12μg/mL,较对照(64.11μg/mL)提高了20.29%。

阿维拉霉素高产菌株的推理选育

为获得阿维拉霉素高产菌株,在研究菌株Streptomyces viridocbromogenes96(SV-96)葡萄糖及氨盐代谢的基础上,采用“NTG随机诱变+氨基乙酸和2-脱氧-D葡萄糖联合抗性”的试验方案进行阿维拉霉素高产菌株的推理选育,获得了氨基乙酸和2-脱氧-D-葡萄糖联合抗性高产突变株SV-GT-596.该菌株遗传性能良好,阿维拉霉素产量高达56.4mg/L,较出发菌株提高了162.3%.实验表明,氨基乙酸和2-脱氧-D-葡萄糖抗性推理选育可克服随机筛选的盲目性,提高筛选工作效率.

氮离子注入选育阿维拉霉素高产菌株的研究

以提高产绿链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)SV-1产阿维拉霉素(Avilamycin)产量为目的,采用低能氮离子注入技术,辅之以链霉素抗性筛选法进行诱变选育研究。结果表明,“马鞍”区域即注入剂量范围在3×10^(15)～5×10^(15)ions/cm^2诱变效果最佳,菌株的抗药性突变与产量突变密切相关,链霉素抗性筛选法具有可行性。在摇瓶条件下,最终获得稳定性良好,阿维拉霉素产量达到83．5mg/L,较出发菌株提高195%的突变株SVT-45。实验表明,离子注入技术是一种有潜力的微生物诱变育种新方法。

^(60)Coγ射线诱变阿维拉霉素筛选高产菌株及培养基优化

用60Coγ射线对绿色产色链霉菌A-05菌株进行了诱变处理,以正突变率为标准确定诱变的适宜剂量为350 Gy。诱变后得到5株较高产突变菌株,其中H-15菌株经连续传代6次,遗传性状稳定,阿维拉霉素发酵单位达到68.5mg/L。采用响应面分析法对菌株H-15生产阿维拉霉素的发酵培养基碳氮源进行了优化设计。在所试验的碳氮源中,可溶性淀粉、核糖分别作为唯一碳源时,阿维拉霉素发酵单位较高,分别达82.67和79.45mg/L,乳糖、果糖、葡萄糖分别作为唯一碳源时菌株的效价较低;3%的豆粕粉和2%的大豆蛋白胨作为氮源时阿维拉霉素发酵单位分别为77.6和62.7mg/L。采用双碳源双氮源更有利于菌株提高阿维拉霉素的发酵单位,响应面分析结果表明,可溶性淀粉、核糖和大豆蛋白胨对阿维拉霉素发酵单位影响较显著。优化后的碳氮源组成为:可溶性淀粉20.12g/L,D-核糖7.81g/L,豆粕粉25.23g/L,大豆蛋白胨5.06g/L。优化后的模型计算出阿维拉霉素发酵单位由原来的71.63mg/L提高到101.48mg/L。

阿维拉霉素生物合成与代谢调控研究进展

阿维拉霉素是发酵法来源的新型兽用的消化促进剂和代谢调节剂,具有较高的生物安全性,通过改善动物肠道内细菌群的生态结构促进动物生长。对阿维拉霉素的生物合成和代谢调控进行了综述,同时结合系统生物技术观点,为阿维拉霉素菌种基因工程改造提供参考。

紫外分光光度法测定发酵液中卑霉素的含量

[目的]介绍利用紫外分光光度法测定发酵液中卑霉素含量的方法。[方法]以乙酸乙酯为提取剂,扫描卑霉素的乙酸乙酯溶液在200～400 nm的吸收峰,准确配制出系列浓度的卑霉素乙酸乙酯溶液,绘制标准曲线,在最佳波长下进行测定,然后对发酵样品进行3次离心处理得到样品溶液,再对样品液进行重现性、稳定性的研究和回收率的计算,用抑菌圈法验证样品的抑菌效果。[结果]选择275nm波长作定量峰,卑霉素的乙酸乙酯溶液浓度在0.5～12.0 mg/L范围内、pH值为4.6的条件下,其吸收度与浓度的线性关系良好,线性回归方程y=15.968 0x+0.030 7,相关系数为0.995 5。样品溶液在室温条件下放置24 h保持仍稳定,平均回收率为102.13%。[结论]试验证明,用紫外分光光度计法检测发酵液中的卑霉素含量是可行的。

阿维拉霉素高产菌株选育与发酵特性

以绿色产绿链霉菌(Streptomyces viridochromogenes NRRL2860)为出发菌株,采用紫外—氯化锂、微波—吖啶橙两轮复合诱变,结合氯化钙、阿维拉霉素、链霉素多重抗性筛选,获得一种遗传稳定的高产菌株MY-20.摇瓶发酵结果显示,与原始出发菌相比,菌株MY-20表现出高产菌株的生长代谢特性,168h阿维拉霉素A和B组分产量达到0.95g/L和4.62g/L,分别比出发菌提高了428%和237%.

阿维拉霉素产生菌的育种研究进展

阿维拉霉素又称卑霉素,在畜牧业上用做饲料添加剂。从其理化性质,菌种诱变筛选方法,培养基及发酵条件等方面做了综述,并对当前育种筛选存在的问题进行了分析。

卑霉素产生菌Tü-57的诱变育种研究

[目的]对卑霉素产生菌Tü-57进行诱变的育种。[方法]先对4种诱变方式的致死剂量进行筛选,再采用复合诱变的方法,用紫外线和微波2种诱变剂与链霉素和氯化锂2个底物标记物,两两结合作用于原始菌,得到诱变株,并测定其卑霉素产量。[结果]获得了一株卑霉素高产菌株ul36,其作用条件为紫外350 s,链霉素0.8μg/ml,与原始菌相比,ul36卑霉素产量提高2.58倍。诱变株经多次发酵测效价结果稳定。[结论]为将卑霉素应用于实际生产奠定了基础。

卑霉素的合成途径及分子生物学进展

卑霉素为正糖霉素族的寡糖类抗生素,是一种新型的消化促进剂。本文对其理化特征、合成机制做了综述,同时介绍了与卑霉素相关的合成基因、抗性基因和编码糖差向异构作用的基因。

温度和光照对阿维拉霉素稳定性的影响

试验旨在研究不同剂型阿维拉霉素的稳定性,为其生产、运输及贮存等提供科学依据。试验以高效液相色谱法(HPLC)测定阿维拉霉素相对含量及单组分相对含量,分别通过温度试验和光照试验探讨贮存过程中阿维拉霉素相对含量及单组分相对含量的变化规律,以评价其预混剂及原料药两种剂型的稳定性。温度试验和光照试验结果均显示阿维拉霉素预混剂及阿维拉霉素原料药对温度和光照敏感,光照的影响大于温度的影响;但相同条件下阿维拉霉素原料药较阿维拉霉素预混剂稳定,阿维拉霉素A组分较B组分稳定。结果表明阿维拉霉素在运输及贮存时需确保避光,其贮存温度应低于20℃,以保证产品质量,提高稳定性。

高效液相色谱法检测产绿链霉菌发酵液中肥拉霉素A的含量

建立了产绿链霉菌发酵液中肥拉霉素A含量的测定方法。以丙酮为溶剂,经摇床振荡（200 r.min-1）提取1 h后,样品经处理后用丙酮-磷酸盐缓冲溶液（体积比7∶3）重溶进行液相色谱检测。色谱条件：乙腈-0.2%（g.mL-1）磷酸二氢铵溶液（pH值3.0,50∶50）为流动相,流速为1 mL.min-1,检测波长为214 nm。肥拉霉素A浓度在10-80μg.mL-1范围内与峰面积线性关系良好,加样平均回收率为100.14%,RSD为0.41%。HPLC法简便有效,重复性好,可作为产绿链霉菌发酵液中肥拉霉素A含量的检测方法。

阿维拉霉素对肉鸡生长性能及免疫功能的影响

试验旨在研究阿维拉霉素对肉鸡生长性能及免疫功能的影响。选取1日龄罗斯(Ross)肉鸡480羽,随机分为4组,每组12个重复,每个重复10羽。对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加5 mg/kg(T1组)、10 mg/kg(T2组)和20 mg/kg(T3组)阿维拉霉素。试验期42 d。结果显示:与对照组相比,试验前期(1~21日龄),3个试验组显著提高了肉鸡的饲料转化效率(P<0.05);T2组肉鸡在21日龄时,胸腺指数和法氏囊指数显著提高(P<0.05),在42日龄时,胸腺指数和脾脏指数显著提高(P<0.05);T2组显著提高了血清IgG水平和溶菌酶活性(P<0.05)。研究表明,饲粮添加阿维拉霉素能提高肉鸡的饲料转化效率,增强免疫功能,为经优化生产菌发酵工艺研制的阿维拉霉素奠定了应用基础。

表面活性剂偶联原位萃取发酵对阿维拉霉素产量的影响

以本实验室筛选获得的绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)SVT-12为发酵工艺探讨的出发菌株,根据阿维拉霉素为细胞内产物的原理,通过向培养基中添加大孔树脂X-5和表面活性剂吐温-80,尝试通过大孔树脂吸附发酵液中的阿维拉霉素,利用表面活性剂改变细胞膜的通透性,降低阿维拉霉素代谢合成的负反馈抑制作用,提高抗生素发酵产量。结果表明,培养基中添加大孔树脂X-5和0.25%的吐温-80时可显著提高抗生素的发酵产量。

卑霉素产生菌Tü-57发酵培养基筛选

为提高卑霉素发酵体系的产量,对其操作条件和培养基进行优化。通过响应曲面法设计,得出最佳接种量为6%,摇床转速200r/min,在28℃发酵培养40h。得到优化的培养基组合为:豆饼粉4.36%,甘露醇1.8%,葡萄糖0.98%,可溶性淀粉0.24%,硫酸铵0.36%,碳酸钙0.5%,硫酸锌0.009 2%,硫酸镁0.013 1%,磷酸二氢钾0.000 5%,硫酸亚铁0.002 0%。研究结果表明,优化培养基比对照培养基的效价提高26.62%。

投喂阿维拉霉素对鲤免疫应答的影响

将阿维拉霉素按照一定的浓度添加到饲料中,投喂经注射接种福尔马林灭活的嗜水气单胞菌(Aerom onashydrophila)菌苗的鲤,于免疫后的第7 d、14 d、21 d、28 d和35 d检测供试鲤血液中的白细胞吞噬活性、血清中溶菌酶活性、抗体效价、补体C3含量及免疫保护率(RPS),探讨了阿维拉霉素对受免鲤免疫应答的影响。结果表明,饲料中添加阿维拉霉素(4 mg/kg和8 mg/kg),投喂较长时间(≥28 d)会降低受免鲤的血液白细胞吞噬活性、血清中的溶菌酶活性和抗体效价,减少受免鲤血清中补体C3的含量,减弱鲤抵抗嗜水气单胞菌人工感染的能力,每公斤饲料中添加8 mg的阿维拉霉素其免疫抑制作用更强。

阿维拉霉素对鲫鱼生长影响的研究

本试验主要研究阿维拉霉素添加在鱼用复合饲料中对鲫鱼生长的影响,并和黄霉素(Flavomycin)的作用效果进行比较,结果显示:在饲料中添加5mg/kg或2.5mg/kg浓度的阿维拉霉素均能够促进鲫鱼生长、控制鲫鱼的死亡率,其中添加浓度为5mg/kg的试验组效果最好;比较试验显示:阿维拉霉素对鲫鱼生长的促进效果优于黄霉素。