白肉灵芝通过抑制Axin2/β-catenin信号通路减轻小鼠急性肾损伤

目的:探究白肉灵芝提取物(Ganoderma leucocontextum extract,GLE)对顺铂诱导的小鼠急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的细胞炎症的作用及其机制。方法:8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、AKI组、低剂量(100 mg/kg)GLE组、高剂量(300 mg/kg)GLE组和槲皮素(100 mg/kg)阳性对照组,每组6只。腹腔注射20 mg/kg顺铂溶液建立小鼠AKI模型,给予GLE干预3 d,检测小鼠血清肌酐(serum creatinine,SCr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;HE和PAS染色观察肾脏病理情况;免疫组化检测各组β-连环蛋白(β-catenin)及Axin2蛋白的表达;Western blot和RT-qPCR检测各组白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、β-catenin及Axin2的表达。2 mg/L LPS刺激TCMK1细胞模拟细胞炎症损伤,GLE(0.2、0.4、0.6和0.8 g/L)处理24 h,检测各组IL-1β、IL-6、β-catenin及Axin2蛋白的表达,并进一步过表达Axin2正向验证上述指标的变化情况。结果:(1)高剂量GLE干预可显著降低小鼠SCr(P<0.01)和BUN(P<0.05)水平;(2)AKI组小鼠出现肾小管扩张和肾小管上皮细胞坏死、空泡化等病理表现,GLE干预后肾脏损害有所改善;(3)免疫组化显示AKI组小鼠肾脏Axin2和β-catenin蛋白表达增加,GLE干预可降低其表达;(4)体内外Western blot和RT-qPCR结果显示GLE干预可显著抑制IL-1β、IL-6、Axin2及β-catenin蛋白表达和mRNA水平(P<0.05);(5)细胞过表达Axin2后,GLE对IL-1β、IL-6、Axin2及β-catenin的下调作用被拮抗,IL-1β、IL-6、Axin2及β-catenin蛋白表达均显著上调(P<0.01)。结论:白肉灵芝可通过抑制Axin2/β-catenin信号通路保护顺铂诱导的小鼠肾损伤,缓解AKI小鼠和LPS所致细胞的炎症反应。

R-spondin2调控Wnt/β-catenin信号通路的机制及其对骨骼系统的影响

R-spondin2(Rspo2)是蛋白质家族RSPOs成员之一,其可以通过富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体4/5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 4/5,LGR4/5)、细胞表面跨膜E3泛素连接酶ZNRF3/RNF43(zinc and ring finger 3/ring finger protein 43)、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)和含GTP酶激活蛋白质1的IQ基序(IQ motif-containing GTPase-activating protein 1,IQGAP1)来调控Wnt/β连环蛋白(catenin)信号通路,Wnt/β-catenin信号通路是目前研究最广泛且与基础骨生物学直接相关的信号通路,该通路中任何一环节出现问题都可能对骨的调控产生影响。近年来研究发现,Rspo2可以通过Wnt/β-catenin对成骨细胞(osteoblast,OB)、破骨细胞(osteoclast,OC)和软骨细胞产生作用,并参与一些骨骼疾病如脊柱后纵韧带骨化(ossification of the posterior longitudinal ligament,OPLL)、骨关节炎(osteoarthritis,OA)和类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生发展,因此对Rspo2的研究可能会成为骨相关疾病新的治疗方向。本文结合最新研究进展,就Rspo2的结构和主要功能、Rspo2调控Wnt/β-catenin信号通路的相关机制及其对骨骼系统的影响作一综述,以期为骨相关疾病的防治提供新的思路和途径。

茶黄素通过调节Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨茶黄素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路的影响。方法 肝癌HepG2细胞用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μmol/L的茶黄素分别培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测HepG2细胞活性。根据HepG2细胞活性实验结果将后续实验分为空白对照组,茶黄素低剂量(20μmol/L)组、中剂量(40μmol/L)组和高剂量(80μmol/L)组,细胞培养24 h。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡;Western blot检测HepG2细胞中Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HepG2细胞中GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量。结果 与空白对照组相比,茶黄素组HepG2细胞增殖显著降低(P<0.05)、凋亡率显著增加(P<0.05),GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),Ki67、PCNA、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量显著下调(P<0.05),而cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达量显著上调(P <0.05)。结论 茶黄素可通过调控Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。

薯蓣皂苷抑制Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞凋亡的研究

目的研究薯蓣皂苷(DIO)对人HepG2肝癌细胞凋亡的影响及其可能抗癌作用机制。方法DIO(0.25、0.5、1、2、4、6和8μmol/L)干预HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞增殖情况,并计算半数抑制率(IC50);划痕实验分析细胞的迁移能力,Western blot检查细胞中凋亡因子及Wnt/β-catenin通路蛋白表达差异。结果与对照组比较,DIO组HepG2细胞抑制率显著升高(P<0.01),并诱导细胞在形态学上出现凋亡特点,呈时间与剂量依赖性;划痕实验结果显示DIO显著抑制HepG2细胞的迁移距离;与对照组比较,DIO干预细胞24 h后,Caspase-3、cleaved Caspase-3水平明显上调,而Bcl-2、β-catenin水平显著下调(P<0.05、P<0.01);采用LiCl激活Wnt/β-catenin信号通路,LiCl组细胞中Wnt1、β-catenin水平较对照组显著上调(P<0.01);与LiCl组比较,LiCl+DIO组HepG2细胞Wnt1、β-catenin、GSK-3β蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论DIO体外能够促进HepG2肝癌细胞凋亡,机制可能是其下调β-catenin的蛋白表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路传导,进而抑制凋亡因子Bcl-2表达,最终诱导细胞凋亡而发挥抗肝癌作用。

人参多糖调控Wnt3/β-catenin/Runx2信号通路改善去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的探究人参多糖改善去卵巢大鼠骨质疏松的作用及对Wnt3/β-catenin/Runx2信号通路的影响。方法将大鼠分为假手术组、模型组、人参多糖低、高剂量组(100、200 mg/kg)及阿仑膦酸钠维生素D3组(6.25 mg/kg),每组10只,采用去卵巢法建立骨质疏松症模型。连续干预12周,记录体质量,观察骨组织病理形态,检测骨密度、骨生物力学、血清骨代谢及生化指标,同时测定骨组织Wnt3、β-catenin及Runx2表达。结果与模型组比较,人参多糖低、高剂量组大鼠体质量明显降低(P<0.01),骨组织病理形态减轻,骨密度、刚度、最大应力及最大载荷均明显增加(P<0.05,P<0.01);血清TRAP-5b含量明显降低(P<0.05,P<0.01),而BALP、OC、OPG及P^(3+)、Ca^(2+)含量明显升高(P<0.05,P<0.01);骨组织Wnt3、β-catenin及Runx2表达均明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论人参多糖具有改善去卵巢大鼠骨质疏松的作用,其机制可能与激活Wnt3/β-catenin/Runx2信号通路有关。

HMGA2通过Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌上皮间质转化的研究

目的:研究高迁移率蛋白A2(HMGA2)通过Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌上皮间质转化(EMT)的影响。方法:采用Real-time PCR法和Western blot法测定正常人结直肠上皮细胞和人结直肠癌HCT116细胞中HMGA2表达水平;将HCT166细胞转染GV144-HMGA2质粒过表达HMGA2后,测定过表达HMGA2对HCT166细胞活力、凋亡及迁移的影响;转染GV144-HMGA2质粒6 h后,加入重组转化生长因子(TGF)-β1蛋白继续培养48 h,测定EMT标志物和细胞周期蛋白(cyclin)D1表达水平。HCT166细胞中分别加入Wnt/β-catenin信号通路的激活剂(LiCl)和抑制剂(XAV93920),并加入TGF-β1和过表达的HMGA2,检测EMT标志物和cyclin D1表达水平。结果:HCT166细胞中HMGA2表达水平显著高于FHC细胞(P<0.05);过表达HMGA2可以显著增加HCT166的细胞活力和迁移,降低细胞凋亡(P<0.05);HMGA2可以显著降低E-caderin表达水平,降低TGF-β1诱导的cyclin D1、c-Myc、Snail、vimentin和β-catenin的表达水平(P<0.05)。加入Wnt/β-catenin信号通路激活剂后,HMGA2对EMT标志物的影响显著增加,而加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂后,HMGA2对EMT标志物的影响显著降低(P<0.05)。结论:过表达HMGA2可以通过Wnt/β-catenin信号通路促进HCT166细胞的生长和迁移,降低细胞凋亡,促进EMT的发生。

鞘磷脂合成酶2通过Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌TOV-21G细胞的恶性生物学行为

目的:探讨鞘磷脂合成酶2(SMS2)是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌(OC)TOV-21G细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及其机制。方法:收集武汉市第三医院2022年7月至2023年5月间确诊的21例OC患者的癌及癌旁组织标本,免疫组化法检测OC组织SMS2表达水平。体外培养TOV-21G细胞,将细胞分为对照组、shRNA慢病毒阴性对照组(sh-NC组)、SMS2 shRNA慢病毒组(sh-SMS2组)、Wnt/β-catenin通路激活剂组LiCl(LiCl组)和sh-SMS2+LiCl组。Edu染色法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力及凋亡水平,WB法检测细胞中SMS2、Ki67、cyclin D1、BAX、c-caspase3、Bcl-2及Wnt/β-catenin通路蛋白(β-catenin、c-Myc、MMP-9)的表达。构建TOV-21G细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低SMS2对移植瘤生长和SMS2、β-catenin表达的影响。结果:与癌旁组织比较,OC组织中SMS2呈高表达(P<0.01)。转染sh-SMS2后,TOV-21G细胞中SMS2表达水平显著降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力及Bcl-2、β-catenin、c-Myc、MMP-9蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、BAX、c-caspase3蛋白表达均显著升高(均P<0.05);LiCl处理能逆转敲低SMS2对TOV-21G细胞增殖、迁移和侵袭及Wnt/β-catenin通路的抑制作用(均P<0.05)。体内成瘤实验显示,敲低SMS2抑制裸鼠移植瘤的生长及SMS2、β-catenin蛋白的表达(均P<0.05)。结论:敲低SMS2表达通过Wnt/β-catenin信号通路抑制OC TOV-21G细胞的增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡,同时LiCl处理则能逆转敲低SMS2对TOV-21G细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。

CBX2通过Wnt/β-catenin信号通路调控宫颈癌细胞增殖及凋亡

目的研究色盒同源物2(Chromobox homolog 2,CBX2)在宫颈癌中表达及影响宫颈癌的作用机制。方法收集10例新鲜宫颈癌及癌旁正常组织样本,利用RT-PCR法检测两组样本中CBX2表达差异情况。运用RT-PCR检测CBX2在宫颈癌细胞系中的表达情况。通过CCK8实验及蛋白印迹实验检测对宫颈癌细胞增殖及凋亡相关基因的影响。蛋白印迹实验研究CBX2对宫颈癌的作用机制。结果CBX2在宫颈癌组织样本中表达水平相比于正常组织样本,表达水平显著上升。CBX2在宫颈癌细胞系中相比于上皮细胞表达水平显著上升。CCK8实验结果显示,敲减CBX2表达后,宫颈癌细胞增殖能力受到抑制。蛋白印迹实验结果显示,敲减CBX2表达后,宫颈癌细胞促凋亡基因Bax表达升高,抗凋亡基因Bcl-2表达下降。Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白检测发现下调CBX2表达后,WNT1、P-GSK3蛋白水平明显下降。结论CBX2在宫颈癌中高表达,并且可能通过Wnt/β-catenin信号通路调控宫颈癌细胞的增殖及凋亡能力。

葛根素基于PPAR-γ/Axin2/Wnt信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的干预作用

目的分析葛根素基于过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)-γ/轴蛋白(Axin)2/Wnt信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的干预作用。方法随机选取40只健康SD雌性大鼠,随机分为空白组、模型组、低剂量组、高剂量组,每组各10只,空白组不予以任何处理,模型组、低剂量组、高剂量组采用双侧卵巢去除法制备去卵巢骨质疏松模型分别进行干预。对比各组骨密度(BMD),检测骨代谢指标[人抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)5b、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)、骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)]、炎性细胞因子[白细胞介素(IL)-6、转化生长因子(TGF)-β、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平及骨组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ、轴蛋白(Axin)2、β-连环蛋白(catenin)蛋白表达,分析葛根素对去卵巢骨质疏松大鼠的干预作用。结果与空白组相比,模型组、低、高剂量组BMD显著降低(P<0.05);与模型组、低剂量组相比,高剂量组BMD显著升高(P<0.05)。与空白组相比,模型组、低、高剂量组血清TRACP5b、PINP、BGP、ALP、IL-6、TGF-β、TNF-α水平显著升高(P<0.05);与模型组、低剂量组相比,高剂量组上述指标显著降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组、低、高剂量组PPAR-γ、Axin2蛋白表达显著升高,β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组、低剂量组相比,高剂量组PPAR-γ、Axin2蛋白表达显著降低,β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论葛根素可有效调节去卵巢大鼠骨代谢水平,提高BMD,有助于骨形态学结构改善,具有抗去卵巢骨质疏松作用,其机制可能与抑制PPAR-γ/Axin2信号通路,激活Wnt信号通路相关。

泛素结合酶2C通过Wnt/β-catenin信号通路促进肾恶性横纹肌样瘤的恶性进展

目的:探讨泛素结合酶2C(ubiquitin-conjugating enzyme 2 C,UBE2C)对肾恶性横纹肌样瘤(malignant rhabdoid tumor of the kidney,MRTK)的影响及作用机制。方法:采用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)以及免疫荧光法在收集的MRTK临床标本以及细胞系G401细胞中验证UBE2C的表达情况。从TARGET数据库下载MRTK的基因表达数据进行验证,Kaplan-Meier法(KM法)评估UBE2C与预后的关系。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制UBE2C在G401细胞中的表达。通过CCK-8检测转染后G401细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变。采用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)探索UBE2C调控的相关通路,并通过WB验证通路蛋白的表达。结果:在MRTK临床标本中,UBE2C表达量是癌旁对照组的(3.189±1.900)倍(P=0.033)。G401细胞系中UBE2C表达量是HEK293细胞的(2.092±0.231)倍(P=0.000),KM生存分析显示,高表达UBE2C的患者预后更差(P=0.019),并且UBE2C在4期患者(680.9±167.7)中高于早期患者(560.5±166.9),差异有统计学意义(P=0.021)。采用siRNA成功将UBE2C的表达敲低至(0.446±0.058)倍(P=0.000),并且发现敲低UBE2C抑制了G401细胞增殖、侵袭、迁移以及促进了细胞凋亡(P=0.000)。GSEA富集分析发现UBE2C与Wnt/β-catenin信号通路相关(P=0.000),敲低UBE2C可以抑制Wnt/β-catenin信号通路及上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)(P=0.000)。结论:UBE2C在MRTK中高表达与不良预后相关,参与调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制UBE2C可以抑制MRTK的增殖、迁移、侵袭,EMT,促进其凋亡。

脐带间充质干细胞对骨质疏松大鼠骨密度相关指标及Wnt/β-catenin/Runx2信号通路的影响

目的 探究脐带间充质干细胞基于骨质疏松大鼠骨密度相关指标及Wnt/β-catenin/Runx2信号通路的影响。方法 选取80只SD大鼠,采用随机数字表法分为3组,其中Sham组20只,Model组30只,HUC-MSCs组30只。Sham组切除与大鼠卵巢等重量的脂肪组织,Model组切除大鼠卵巢组织制成骨质疏松大鼠模型,HUC-MSCs组在Model组的基础上采用脐带间充质干细胞干预12 w。完成干预后检测大鼠的雌激素水平、血钙水平、碱性磷酸酶水平、Ⅰ型胶原C端肽水平;检测各组大鼠骨密度相关指标:骨密度(bone mineral density, BMD)、骨小梁数量(trabecular number, Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness, Tb.Th)、骨小梁分离度(rabecular separation, Tb.Sp)、成骨细胞的表面与骨表面积比例(osteoblast surface/bone surface, ObS/BS)和破骨细胞表面积与骨表面积比例(osteoclast surface area/bone surface, OcS/BS);检测各组大鼠Wnt/β-catenin/Runx2信号通路相关蛋白相对表达水平。结果 相比Sham组,Model组和HUC-MSCs组大鼠雌激素水平、血钙水平和ALP水平、BMD、Tb.N值、Tb.Th值、Obs/BS值、β-catenin蛋白和Runx2蛋白相对表达水平均降低(P<0.01),CTX水平、Tb.Sp值、Ocs/BS值显著升高(P<0.01);相比Model组,HUC-MSCs组大鼠血钙水平和ALP水平、BMD、Tb.N值、Tb.Th值、Obs/BS值、β-catenin蛋白和Runx2蛋白相对表达水平均升高(P<0.01),CTX水平、Tb.Sp值、Ocs/BS值显著降低(P<0.01)。结论 脐带间充质干细胞可以有效改善大鼠骨质疏松症,其作用机制可能与促进骨形成、抑制骨吸收及调控Wnt/β-catenin/Runx2信号通路相关。

WNT3A结合并稳定FZD2激活Wnt通路促进成骨细胞增殖和分化的分子机制研究

目的:探讨配体WNT3A通过稳定和激活FZD2(Frizzled2)增加成骨细胞骨形成的活性及其分子机制。方法:24只雌性6~8周龄C57BL/6J小鼠随机分为4组,对照(Control)组,假手术(Sham)组,双侧卵巢摘除术(ovariectomy,OVX)诱导骨质疏松症(Osteoporosis,OP)小鼠模型组(OVX组),OVX+雌二醇治疗组(OVX+E2 Treatment组),每组6只小鼠。建立OVX小鼠模型。Western blot法测定小鼠后肢胫骨组织中WNT3A、FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2以及磷酸化(p-)STAT3、STAT3、p-JAK2和JAK2的表达水平。CCK-8测定小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的增殖能力。腺病毒-shRNA-FZD2介导敲低MC3T3-E1细胞中的FZD2。免疫共沉淀(co-Immunoprecipitation,co-IP)法测定WNT3A处理MC3T3-E1细胞前后FZD2与泛素(ubiquitin,Ub)的直接结合情况。结果:与OVX组相比,OVX+E2 Treatment组小鼠胫骨组织中WNT3A、FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2的表达水平均被上调(P<0.05)。与Control组相比,WNT3A Treatment组MC3T3-E1细胞中FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2的表达水平均升高(P<0.05);细胞增殖能力增强(P<0.05)。与WNT3A Treatment组相比,WNT3A Treatment+Adv-shRNA-FZD2组FZD2、Active-β-Catenin、β-Catenin、ALP和Runx2的表达水平均降低(P<0.05);p-STAT3和p-JAK2的磷酸化水平均降低(P<0.05);增殖能力降低(P<0.05);而2组细胞中STAT3和JAK2的表达水平无统计学差异(P>0.05)。在IP:Ub组中,与WNT3A处理(-)的细胞相比,WNT3A处理(+)的细胞中FZD2的表达水平升高(P<0.05)。结论:WNT3A的促骨合成代谢活性是通过结合并稳定FZD2激活Wnt/β-Catenin信号通路实现的。

姜黄素通过β-Catenin/BCL9信号通路介导的细胞自噬调节肝癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨姜黄素(Cur)调控β-Catenin/BCL9通路对肝癌细胞HepG2自噬反应及生物学行为的影响。方法:将HepG2细胞分为对照组(Control组)、Cur组(20.0μmol/L)、Cur+自噬抑制剂组[Cur(20.0μmol/L)+3-MA(5.0 mmol/L)]、Cur+质粒对照组[Cur(20.0μmol/L)+VEC]、Cur+Bcl9过表达组[Cur(20.0μmol/L)+OE-BCL9]、Cur+shRNA慢病毒载体阴性对照组[Cur(20.0μmol/L)+Sh-NC]、Cur+shRNA BCL9慢病毒载体组[Cur(20.0μmol/L)+Sh-BCL9],分别检测HepG2细胞凋亡、迁移与侵袭,观察自噬体的形成与自噬体水平,Western blotting检测自噬(LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1)、上皮间质转化(Vimentin、E-cadherin)、β-Catenin/BCL9通路(BCL9、β-Catenin)相关蛋白相对表达量。结果:Cur组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin1、E-cadherin蛋白相对表达量显著高于Control组,细胞迁移与侵袭数及Vimentin、BCL9、β-Catenin蛋白相对表达量显著低于Control组(P<0.05);Cur+3-MA组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin1、E-cadherin蛋白相对表达量显著低于Cur组,细胞迁移与侵袭数及Vimentin、BCL9、β-Catenin蛋白相对表达量显著高于Cur组(P<0.05);Cur+OE-BCL9组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin1、E-cadherin蛋白相对表达量显著低于Cur+VEC组,细胞迁移与侵袭数及Vimentin、BCL9、β-Catenin蛋白相对表达量显著高于Cur+VEC组(P<0.05);Cur+Sh-BCL9组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/Ⅰ及Beclin1、E-cadherin蛋白相对表达量显著高于Cur+Sh-NC组,细胞迁移与侵袭数及Vimentin、BCL9、β-Catenin蛋白相对表达量显著低于Cur+Sh-NC组(P<0.05)。结论:姜黄素能通过抑制β-Catenin/BCL9信号通路,诱导细胞自噬,抑制HepG2细胞恶性生物学行为。

COX-2/PGE_2激活Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞VEGF表达

目的探讨环氧化酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法将PGE2或COX-2选择性抑制剂NS-398作用LoVo细胞24h,采用蛋白质印迹法检测COX-2和β-catenin蛋白表达;将PGE2和(或)β-catenin/tcf抑制剂FH-535作用LoVo细胞24h,采用ELISA法检测VEGF表达。以常规培养的LoVo细胞为对照。结果与对照组比较,PGE2能够上调LoVo细胞中COX-2蛋白表达,同时上调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平(分别是对照组的3.8倍、2.7倍和3.0倍,P均<0.01);COX-2抑制剂能够下调COX-2蛋白表达,同时下调β-catenin在细胞总蛋白、细胞浆蛋白和核蛋白中的表达水平(分别是对照组的0.3倍、0.3倍和0.2倍,P均<0.01)。与对照组比较,PGE2能够上调LoVo细胞VEGF表达水平(是对照组的1.6倍,P<0.01);β-catenin/tcf抑制剂能够下调VEGF表达(是对照组的0.68倍,P<0.01);将PGE2和β-catenin/tcf抑制剂同时作用LoVo细胞后VEGF表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 COX-2/PGE2通过上调β-catenin蛋白表达,从而激活Wnt/β-catenin信号通路,上调VEGF表达,这可能是COX-2/PGE2促进大肠癌血管新生的机制之一。

人乳腺癌组织中Wnt/β-catenin信号传导通路的异常表达与Her2阳性表达间的关系

目的观察人乳腺癌组织中Wnt/β-catenin信号传导通路主要组分E-cadherin、β-catenin、Cyclin D1的异常表达及其关键组分β-catenin的异常表达与Her2阳性表达之间的关系。方法采用免疫组织化学Elivision两步法检测了90例人乳腺癌组织中Her2、E-cadherin、β-catenin以及Cyclin D1的表达情况。结果E-cadherin表达正常组中β-catenin的异常表达率(27.3%)显著低于E-cadherin表达缺失组(75.0%);β-catenin异常表达组中Cyclin D1过表达率(83.3%)显著高于β-catenin正常组(40.7%)。Her2阳性组中β-catenin的异常表达率(73.5%)明显高于Her2阴性组(19.6%)。当Her2的阳性表达与β-catenin的异常表达同时存在时腋窝淋巴结转移的阳性率较高。结论在一些人乳腺癌组织中存在Wnt/β-catenin信号传导通路的异常表达,并且其异常表达与Her2的阳性表达有关,二者的异常表达能够协同促进乳腺癌细胞的淋巴结转移。

复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变模型大鼠Wnt信号通路中Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达的影响

本研究采取MNNG综合因素制备GPL模型,分别用复方蜥蜴散80目制剂、100目、80+100目不同微粒等量混合剂、生理盐水、维酶素混悬液治疗,应用免疫组化法检测大鼠胃细胞中增值蛋白Wnt2、β-catenin、CyclinD1的表达,光镜观察胃黏膜病理组织学变化,并通过图像分析系统对免疫组化图像进行光密度的测算。结果显示:复方蜥蜴散80目、100目、80+100目不同微粒组合组细胞增殖基因Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1蛋白的阳性表达率显著低于模型组(P<0.01),复方蜥蜴散80+100目混合组三种蛋白的阳性表达率显著低于维酶素组(P<0.05)。揭示了复方蜥蜴散可以修复损伤胃黏膜,治疗或逆转PLGC的发展,其作用机制可能是通过干预黏膜增生、分化,抑制细胞中Wnt2、β-catenin、Cyclin-D1过度增殖,促进细胞凋亡,恢复细胞增殖与凋亡的平衡,从而阻断胃癌前病变的。

lncRNA CASC2C靶向Wnt/β-catenin信号通路影响口腔鳞癌顺铂敏感性的实验研究

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因2C(lncRNA CASC2C)对Wnt/β-catenin信号通路的负性调控作用,以及对口腔鳞癌细胞株顺铂(DDP)耐药的影响。方法体外培养FaDu细胞和FaDu顺铂耐药细胞(FaDu/DDP),将lncRNA CASC2C序列和无序序列分别转染至FaDu/DDP细胞中作为过表达组和阴性对照(NC)组,另设空白对照组(CTL),并通过实时荧光定量PCR(QPCR)法进行验证。采用MTT法检测不同浓度DDP(3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)对各组细胞增殖的影响。流式细胞术法检测CTL组、NC组、过表达组细胞凋亡情况。采用Western blotting法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Axin1、c-myc、cyclin D1、β-catenin表达情况。结果FaDu/DDP细胞lncRNA CASC2C的表达量为0.67±0.045,明显低于FaDu细胞(P<0.05)。MTT法结果显示,DDP对FaDu细胞和FaDu/DDP细胞的IC50分别为14.471μmol/L和39.886μmol/L。FaDu/DDP的耐药指数为2.756。QPCR结果显示,过表达组FaDu/DDP细胞lncRNA CASC2C的相对表达量为1.47±0.139,明显高于CTL组和NC组(P<0.05)。不同浓度DDP(3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)对过表达组FaDu/DDP细胞增殖抑制率分别为(5.46±1.29)%、(10.31±1.34)%、(22.69±2.15)%、(40.83±3.40)%、(69.71±3.67)%、(73.54±4.10)%,明显高于CTL组和NC组(P<0.05)。过表达组FaDu/DDP细胞FZD8蛋白、c-myc蛋白、cyclin D1蛋白、β-catenin蛋白表达量分别为0.66±0.17、0.84±0.12、0.78±0.15、0.52±0.16,低于CTL组和NC组;而Anxin蛋白表达量为1.12±0.16,高于CTL组和NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论上调lncRNA CASC2C表达可逆转口腔鳞癌顺铂耐药细胞株FaDu/DDP的耐药性,其作用机制可能是通过负性调控FZD8的表达,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活。

PGE_2通过Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞生长的研究

目的:探讨PGE2对子宫内膜癌细胞生长的促进作用及分子机制。方法:免疫组织化学(EnVision)法检测正常子宫内膜与子宫内膜癌组织中β-catenin的表达;用PGE2、EP2受体激动剂Butaprost、EP2受体拮抗剂AH6809处理子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以WST-8细胞增殖实验检测各实验组细胞的增殖率;用Western blot方法分别检测β-catenin、p-β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β在未处理组、PGE2处理组、EP2受体激动剂处理组和EP2受体拮抗剂处理组中的表达;免疫荧光技术检测β-catenin在未处理组和PGE2处理组中表达定位的情况。结果:免疫组织化学法结果显示β-catenin在正常子宫内膜组织中仅存在膜表达,而子宫内膜癌组织中为胞浆和胞核的表达。WST-8实验结果显示:经PGE2、Butaprost和AH6809处理后,细胞的增殖率相对于对照组分别为183.9%、151.9%、72.1%。Western blot实验结果显示:PGE2处理后,β-catenin蛋白表达上升至235.7%而p-β-catenin水平下降至76.8%,p-GSK-3β水平升高至204.3%;EP2受体激动剂+PGE2处理组显示β-catenin蛋白表达上升至279.7%而p-β-catenin水平下降至33.6%,p-GSK-3β水平升高至236.7%;EP2受体拮抗剂+PGE2处理组显示β-catenin蛋白表达上升至185.2%而p-β-catenin水平下降至73.9%,p-GSK-3β水平升高至116.2%。免疫荧光技术探测结果表明:PGE2处理子宫内膜癌细胞后,β-catenin蛋白在癌细胞胞浆中的表达信号明显强于未处理组,并出现明显核内表达信号。结论:PGE2能促进子宫内膜癌细胞的增殖,并伴有β-catenin蛋白的过表达和入核,其机制可能涉及到EP2受体激活和Wnt/β-catenin信号转导通路。

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶2α过表达通过Wnt/β-Catenin信号通路抑制肝癌细胞株BEL7402增殖

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)家族参与调节生长因子和激素的信号转导.为了研究SGK家族成员SGK2α在细胞中的功能,构建了真核表达质粒pEGFP-N1-SGK2α并瞬时转染HEK293细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现融合蛋白SGK2α-GFP主要定位于细胞浆,免疫共沉淀实验发现SGK2α与糖原合成激酶3β(GSK3β)存在相互作用.利用PCDNA6-V5-HisB-SGK2α质粒转染肝癌BEL7402细胞,建立稳定表达SGK2α蛋白的细胞系,通过细胞增殖实验发现,SGK2α的过表达使BEL7402细胞生长速度减慢、细胞倍增时间延长.裸鼠成瘤实验发现,与对照组细胞相比表达SGK2α的BEL7402细胞在裸鼠中的成瘤能力明显降低.免疫印迹实验证实,SGK2α的过表达不影响GSK3β的表达,但却使β-catenin和Cyclin D1的表达下调.提示影响Wnt/β-catenin信号通路关键分子的表达可能是外源性SGK2α蛋白过表达抑制BEL7402细胞增殖的分子机制.

延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。