可溶性环氧化物水解酶抑制剂对压力负荷增加所致小鼠心肌肥厚的影响

目的观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心肌肥厚小鼠心脏及心肌肥厚标志基因的影响,并探讨该类药物影响心肌肥厚的可能机制。方法观察压力负荷增加及用可溶性环氧化物水解酶抑制剂干预后心脏的病理学改变,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测心肌肥厚基因(心房钠尿肽基因、α肌凝蛋白重链基因、β肌凝蛋白重链基因和骨骼肌α肌纤蛋白基因)表达的差异,用Western检测核因子κB的活化情况。结果可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以明显使心脏重与体重的比值、左心室短轴缩短率和左心室收缩期末腔径明显改善,并减少压力负荷增加引起的小鼠心肌肥厚基因的表达,抑制核因子κB的表达。结论可溶性环氧化物水解酶抑制剂能抑制压力负荷增加所致的心肌肥厚,这一作用有可能通过抑制核因子κB途径来实现。

伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞蛋白质合成和肌球蛋白重链表达的影响

目的观察伊贝沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞中蛋白质合成速率及肌球蛋白重链(MHC)基因表达改变的影响。方法以AngⅡ及伊贝沙坦分别或同时作用于培养的细胞。采用放射性同位素[3H]-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率。应用荧光定量PCR方法检测心肌细胞心房利钠肽因子(ANF)以及α-MHC、β-MHC的表达。结果AngⅡ处理使心肌细胞中[3H]-Leu掺入增加(P<0.05),同时ANF mRNA的表达明显高于正常(P<0.05);α-MHC mRNA的表达显著低于正常(P<0.05),而β-MHC mRNA的表达显著高于正常(P<0.05),α-MHC/β-MHC的比值下降(P<0.05)。当伊贝沙坦与AngⅡ共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组比较,[3H]-Leu的掺入明显下降(P<0.05),与正常组比无统计学意义(P>0.05);同时ANF的表达下降,与正常组比无统计学意义(P>0.05);心肌细胞中α-MHC的表达明显增高(P<0.05),而β-MHC mRNA的表达显著降低(P<0.05),α-MHC/β-MHC的比值上升(P<0.05)。结论伊贝沙坦能抑制AngⅡ所致的心肌细胞肥大和细胞中α-MHC向β-MHC表达的转换。

硫酸吲哚酚诱导5/6肾切除慢性肾脏病大鼠心肌肥大及纤维化的作用机制研究

目的探讨硫酸吲哚酚(IS)对5/6肾切除慢性肾脏病(CKD)大鼠模型心肌肥大及纤维化的作用。方法20只SD大鼠按随机数字表法分为正常组和5/6肾切除CKD大鼠组(模型组),每组10只。模型组建立5/6肾切除CKD模型。比较2组大鼠体质量、心脏及左心室质量;观察造模前后2组血液中血肌酐、尿素及IS水平;分析2组大鼠心脏组织中有机阴离子转运蛋白-3(OAT-3)、氧化应激烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-4(Nox-4)、抗氧化蛋白[核因子-E2相关因子-2(Nrf-2)、下游基因血红素加氧酶-1(HO-1)]、心肌肥大指标[心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)]及纤维化指标[转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad-3、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)mRNA]表达水平。结果与正常组比较,模型组体质量降低,心脏和左心室质量显著增加(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠造模12周后血肌酐、尿素及IS水平高于造模前和正常组(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠心脏组织中OAT-3、Nox-4、ANP、BNP、β-MHC、TGF-β1、Smad-3及CollagenⅠmRNA表达水平升高,Nrf-2、HO-1 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论在5/6肾切除CKD大鼠中IS经OAT-3摄取,进而激活氧化应激反应,最终引起心肌肥大及纤维化。

五味子丙素缓解血管紧张素Ⅱ诱导的心脏炎性反应和心肌重构

目的探究五味子丙素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠心肌重构和炎性反应的影响。方法研究时间为2018年7月至2019年1月。皮下注射AngⅡ诱导C57BL/6小鼠心肌重构。将C57BL/6小鼠分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+五味子丙素组(AngⅡ+ShC组),皮下注射AngⅡ前一天开始给药处理,8周后,处死小鼠,收集心脏组织。采用ELISA法检测组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/白介素-6(IL-6)的含量,RT-PCR法检测IL-6、TNF-α、心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、肌球蛋白重链(MYHC)、转化生长因子β(TGF-β)、胶原IV(Collagen IV)和β-肌动蛋白(β-actin)的mRNA表达;生化试剂盒检测血液中的CK-MB。结果与AngⅡ组比较,五味子丙素治疗组心脏损伤被逆转,心重比降低[(6.32±0.99)‰比(4.93±0.17)‰,P<0.05],心功能相关基因ANP[(3.37±0.60)比(1.41±0.37)倍,P<0.05)和BNP[(2.51±0.75)比(0.78±0.55)倍,P<0.05]、促肥大基因MYHC[(2.57±0.74)比(1.18±0.26)倍,P<0.05)、纤维化相关基因TGF-β[(5.25±0.94)比(1.78±0.57)倍,P<0.05)和胶原IV[(3.70±1.47)比(1.68±0.56)倍,P<0.05]的mRNA表达下调,心脏组织TNF-α/IL-6的mRNA[分别为(7.18±2.85)比(2.92±0.86)倍,P<0.05和(12.89±5.40)比(4.29±3.43)倍,P<0.05]和蛋白表达水平[分别为(4.80±0.78)比(2.09±0.41)ng/mg,P<0.05和(2.56±0.73)比(1.23±0.41)ng/mg,P<0.05]均显著降低。结论五味子丙素能有效缓解AngⅡ诱导的小鼠心肌重构,并伴随缓解炎性反应。

人脐带间充质干细胞移植治疗心肌肥厚模型小鼠

背景:左心室肥厚作为高血压病常见的靶器官损害,是心脑血管疾病高发病率和死亡率的独立危险因素。间充质干细胞可以促进组织修复,调节免疫反应,可作为治疗心肌肥厚的种子细胞。目的:观察人脐带间充质干细胞静脉注射治疗小鼠心肌肥厚的疗效。方法:①将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、人脐带间充质干细胞组、PBS组,其中人脐带间充质干细胞组和PBS组采用主动脉弓缩窄术构建C57BL/6J小鼠心肌肥厚模型,人脐带间充质干细胞组小鼠术后第5周开始,尾静脉注射细胞混悬液,每周1次,连续4周,PBS组小鼠尾静脉注射等量PBS,术后6-11周采用超声心动图观察各组小鼠心功能,术后9,10,11周采用苏木精-伊红染色、Western blot检测心肌细胞肥大程度;②体外实验中,通过异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大,然后将人脐带间充质干细胞与肥大的H9c2细胞共培养于Transwell^(TM)小室中,共培养48 h后F-actin染色分析H9c2细胞横截面积,qRT-PCR检测H9c2细胞内心房钠尿肽、脑钠尿肽和β-肌球蛋白重链mRNA表达量。结果与结论:①超声心动图结果证实:人脐带间充质干细胞组小鼠左心室射血分数、左室短轴缩短率明显高于同期PBS组(P<0.05);②苏木精-伊红染色结果发现,相比于PBS组,人脐带间充质干细胞组心肌纤维排列整齐,心肌细胞横截面积明显减小(P<0.05);③Western blot实验结果证明,人脐带间充质干细胞组小鼠心肌组织中心房钠尿肽、脑钠尿肽和β-肌球蛋白重链蛋白水平明显低于同期PBS组(P<0.01);④与异丙肾上腺素组相比,共培养后的H9c2细胞面积明显减小(P<0.01),同时,H9c2细胞中心房钠尿肽、脑钠尿肽和β-肌球蛋白重链mRNA水平明显减少(P<0.05);⑤结果表明,人脐带间充质干细胞可通过抑制细胞内肥大相关基因的表达,在一定程度上缓解压力负荷型心肌肥厚的发生,改善小鼠心功能。

益气活血方对大鼠心肌梗死后心肌肥大的影响及作用机制

目的观察益气活血方对大鼠心肌梗死后心肌肥大的影响,探究其作用机制。方法采取结扎大鼠冠状动脉的方法建立心肌梗死动物模型,将其随机分为模型组、益气活血药组、酒石酸美托洛尔组,另设假手术组,每组9只,术后第二天开始灌胃,干预治疗7天后,采用小动物超声检测大鼠心脏结构和功能的变化,苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察梗死边缘区心肌细胞形态学改变,计算心肌细胞横截面积、直径和周长,免疫组织化学法观察梗死边缘区心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)的表达,蛋白质免疫印迹(western blot,WB)法检测梗死边缘区ANP、β肌球蛋白重链(β-mysion heavy chain,β-MHC)、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylation extracellular signal-regulated kinase1/2,p-ERK1/2)的蛋白表达情况。结果(1)模型组大鼠左心室射血分数(left venteicular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular shortening fraction,LVFS)均低于假手术组,左室收缩末期内径(left ventricular internal dimension systole,LVIDs)、左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)均高于假手术组(P<0.05);两用药组LVEF、LVFS均高于模型组,LVIDs、LVIDd均低于模型组(P<0.05)。(2)与假手术组相比,模型组心肌细胞横截面积、直径和周长显著升高;与模型组相比,两用药组三者均明显降低(P<0.05)。(3)Western Blot结果显示,模型组ANP、β-MHC、p-ERK1/2相较假手术组均显著升高;用药组三者相较模型组均显著降低(P<0.05)。ERK1/2蛋白在各组间无统计学差异(P>0.05)。结论益气活血方能够改善大鼠心肌梗死后心肌肥大的程度,其机制可能与抑制ERK1/2信号通路有关。

piRNA-514对心肌细胞肥大的调控作用及其机制

目的探讨piwi互作RNA-514(piRNA-514)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测8周龄雄性C57小鼠肾、肝、脾、肺和心脏中的piRNA-514相对表达量;采用qPCR检测异丙肾上腺素(ISO)分别诱导乳鼠原代心肌细胞0、8、12、24 h后细胞中piRNA-514以及心肌肥厚标记物心房肽(ANF)的相对表达量;采用qPCR检测piRNA-514的类似物agomir-piR-514转染进原代心肌细胞后,细胞中piRNA-514、ANF和脑利钠肽(BNP)的相对表达量,采用鬼笔环肽(phalloidin)和DAPI对原代心肌细胞染色,测定细胞表面积;采用qPCR检测agomir-piR-514转染进原代心肌细胞,经ISO诱导24 h后细胞中piRNA-514、ANF和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的相对表达量,phalloidin和DAPI对原代心肌细胞染色,激光共聚焦显微镜观察细胞表型变化并测定细胞表面积。结果qPCR方法检测结果显示,与肾、肝、脾、肺相比,piRNA-514在心脏中的表达量最高(F=24.47,P<0.01);qPCR方法检测结果显示,随着ISO诱导时间延长,原代心肌细胞中piRNA-514表达水平逐渐降低(F=12.26,P<0.01),ANF表达水平逐渐升高(F=4.49,P<0.01);qPCR方法检测结果显示,与对照组相比,转染agomir-piR-514组的心肌细胞中piRNA-514的相对表达量显著增高,ANF以及BNP的相对表达量显著降低(F=7.91~14.25,t=14.84~29.43,P<0.05),对细胞的表面积测定结果显示,转染ago-mir-piR-514组的细胞表面积与对照组相比明显减小(F=36.12,t=8.73,P<0.05);qPCR方法检测结果显示,与ISO组相比,agomir-piR-514+ISO组的原代心肌细胞中piRNA-514相对表达量显著增高,ANF和β-MHC的相对表达量显著降低(F=10.89~21.57,t=6.94~12.96,P<0.05),细胞表面积测定结果显示,agomir-piR-514+ISO组的细胞表面积与ISO组相比显著减小(F=23.82,t=16.41,P<0.05)。结论piRNA-514具有调控心肌细胞肥大的功能,过表达piRNA-514可以抑制ISO诱导的心肌细胞肥大。

5-氮胞苷对大鼠骨髓基质细胞心钠素及β-肌球蛋白重链表达的影响

目的 观察5-氮胞苷（5-AZ）诱导后体外培养骨髓基质细胞（BMSCs）心钠素（ANP）、β肌球蛋白重链（β-MHC）表达的变化.方法 分离培养SD大鼠BMSCs及新生乳鼠心室肌细胞.BMSCs的诱导分化采用第8代BMSCs,于传代后第3 d分为4组：正常对照组、上清液组、5-AZ组、5-AZ＋上清液组.反转录聚合酶链反应法测定心肌特异性蛋白ANP、β-MHC基因表达水平的变化.结果 正常培养及心肌细胞上清培养液诱导的BMSCs不表达心肌特异性ANP、β-MHC 5-AZ诱导后的BMSCs表达ANP、β-MHC,分别31.5±5.6、32.1±8.3和33.7±5.6、46.6±8.3.心肌细胞上清培养液增加5-AZ诱导的BMSCs中β-MHC的表达水平,而对ANP表达无影响.结论 体外培养大鼠成体BMSCs在5-AZ诱导下可表达心肌特异性ANP、β-MHC.心肌细胞上清培养液可增加β-MHC表达水平.

针刺腧穴“降压方”对自发性高血压大鼠心肌肥厚的影响

目的探讨针刺腧穴"降压方"对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚的影响及可能作用机制。方法选择雄性WKY大鼠10只作为空白组,另选SHR 30只随机分为模型组、最小化针刺组和降压方组,每组10只。降压方组大鼠针刺双侧"人迎""曲池""足三里"穴,每日1次,连续针刺6天,休息1天;最小化针刺组仅浅刺各穴,不予行针,各组大鼠均干预8周。于干预前及干预第2、4、6、8周末测量大鼠尾动脉收缩压;干预后采用心脏超声检测各组大鼠室间隔舒张末厚度(IVSS)、左室舒张末期内径(LVIDd)、左室后壁舒张期厚度(LVPWd),计算心脏重量指数(HWI),运用WGA染色法观察各组大鼠心肌组织结构,采用RT-qPCR法检测心肌组织心房利钠肽(ANP)mRNA、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达。结果在干预前及干预第2、4、6、8周末,模型组大鼠尾动脉收缩压均显著高于空白组(P<0.05);在第4、6、8周,降压方组大鼠收缩压明显低于模型组和最小化针刺组(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠IVSS、LVPWd、HWI以及心肌组织ANP和β-MHC mRNA表达增加,心肌细胞直径与横截面积均增大,LVIDd降低(P<0.05);与模型组比较,降压方组大鼠上述各指标均改善(P<0.05);而最小化针刺组大鼠各指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论针刺腧穴"降压方"可有效改善SHR血压和心肌肥厚状态,可能是通过抑制心肌组织ANP和β-MHC mRNA表达来实现。

蛋白激酶D2在血管紧张素Ⅱ诱导的病理性心肌肥大中的作用

目的研究蛋白激酶D2(PKD2)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的病理性心肌肥大中的作用。方法通过AngⅡ诱导新生大鼠和成年大鼠病理性心肌肥大,应用siRNA干扰抑制心肌细胞PKD2基因表达,探讨PKD2对AngⅡ诱导的病理性心肌肥大形成过程中的调控作用。结果AngⅡ上调新生大鼠和成年大鼠心肌细胞的PKD2基因表达;沉默PKD2阻断AngⅡ诱导病理性心肌肥大基因心房利尿因子(ANF)和β-肌凝蛋白重链(β-MHC)表达上调和细胞表面积增大。结论PKD2参与AngⅡ诱导的病理性心肌肥大,可能是预防干预和逆转心肌肥大的潜在靶点。

橙皮素对心肌梗死小鼠心室重塑及心肌组织心房钠尿肽和β-肌球蛋白重链表达的影响

目的研究橙皮素对心肌梗死小鼠心室重塑及心肌组织心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达的影响。方法用左冠状动脉前降支近端结扎法构建心肌梗死小鼠模型。将成功建立的60只心肌梗死小鼠随机分为模型组及低、高剂量实验组,各20只;另选择20只正常小鼠作为对照组。低、高剂量实验组小鼠分别给予10,20 mg·kg^-1·d^-1橙皮素,灌胃,对照组与模型组灌胃等量生理盐水,连续干预8周。用心脏多普勒超声检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短分数(LVFS)评价心功能;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡指数;用Masson染色观察小鼠心肌纤维化情况;用蛋白质印迹(WB)法检测心肌组织ANP、β-MHC蛋白表达。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组小鼠LVEDD分别为(3.18±0.12),(5.46±0.06),(4.87±1.14),(3.93±1.36)mm;LVESD分别为(1.93±0.14),(4.63±1.26),(3.52±1.61),(2.46±0.97)mm;LVEF分别为(82.87±3.15)%,(39.54±2.13)%,(56.22±2.95)%,(71.46±3.08)%;LVFS分别为(46.84±1.56)%,(18.43±1.15)%,(27.63±1.27)%,(40.22±1.39)%;各组小鼠心肌组织ANP蛋白相对表达量分别为0.07±0.02,0.76±0.13,0.48±0.11,0.25±0.08;β-MHC蛋白相对表达量分别为0.27±0.06,0.85±0.12,0.45±0.06,0.40±0.09。与对照组相比,模型组小鼠LVEDD、LVESD与心肌细胞凋亡指数及心肌组织ANP、β-MHC蛋白相对表达量均升高,且低、高剂量实验组低于模型组;LVEF与LVFS降低,且低、高剂量实验组高于模型组,均呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论橙皮素可改善心肌梗死小鼠心肌纤维化程度,改善心功能指标,抑制心肌细胞凋亡,同时降低心肌肥厚标记物的表达,进而抑制小鼠心肌梗死后心室重塑并改善心脏功能。