月桂酰精氨酸乙酯胞内抑菌机制及抗消化道蛋白酶水解研究

本文通过对月桂酰精氨酸乙酯(LAE)的抑菌谱、细菌细胞胞内的抑菌机制以及耐受消化道蛋白酶水解的研究发现,LAE对G+菌、G-菌、真菌均有广谱抑菌活性,且对G+菌的抑菌活性普遍高于G-菌和真菌。LAE在凝胶阻滞实验中可以与菌体基因组强烈结合,随浓度增加阻滞现象更明显。LAE能抑制胞内蛋白的合成,使得碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶表达活性降低。LAE对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受能力都很差,胃蛋白酶可部分水解LAE,胰蛋白酶能完全水解LAE,证明LAE可被消化道内蛋白酶水解,不会在肠道内保留。

3株芽孢杆菌抗菌肽抑菌特性与抑菌谱研究

[目的]分离筛选出有抑菌特性的芽孢杆菌,并研究其抑菌谱。[方法]从实验室分离鉴定的71株芽孢杆菌中筛选出对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌性强的新种芽孢杆菌018株、贝莱斯芽孢杆菌F株和解淀粉芽孢杆菌221株,建立比较3株芽孢杆菌的遗传进化树,并应用酸沉淀法提取抗菌肽,比较3种芽孢杆菌抗菌肽提取物对11株动物病原菌的抑菌谱。[结果]3株芽孢杆菌产生的抗菌肽抑菌特性各有不同,其抑菌谱中3种芽孢杆菌抗菌肽提取物对试验菌株中的7株病原菌的抑菌性符合对指示菌的抑菌特性,对维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌略有不同。[结论]芽孢杆菌可为开发应用抗菌肽的生物活性添加剂制剂或生物抗菌性药物提供参考。

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MCCC 1A15695抑菌蛋白分离纯化及应用研究

对虾“玻璃苗”病的暴发,会导致对虾幼苗大批死亡,给水产养殖带来巨大损失。利用本实验室最近鉴定的“玻璃苗”致病菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)vp-HL,从海洋来源芽孢杆菌中筛选拮抗菌,获得一株能够高效抑制vp-HL菌株的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MCCC 1A15695。经分离鉴定与活性测定,其有效抑菌物质为蛋白类,该蛋白抑菌谱较广,对包括多种弧菌病原在内的17种病原微生物有抑制作用。经Q Seharose Fast Flow阴离子柱层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)分离纯化鉴定,确定活性蛋白组分中的有效抑菌物质为枯草杆菌素(subtilisin)、未知蛋白(hypothetical protein)及α-淀粉酶(Alpha-amylase)。蛋白类物质具有高生物安全性,本研究为后续益生菌的开发利用提供了理论基础。

黄连解毒汤联合阿奇霉素对铜绿假单胞菌的体外抑菌效果

目的探讨黄连解毒汤联合阿奇霉素对铜绿假单胞菌的体外抑菌效果。方法以铜绿假单胞菌标准质控菌株ATCC27853及开封市第二中医院临床分离的98株铜绿假单胞菌(包括非黏液型32例、黏液型66例)为研究对象,采用肉汤稀释法测量黄连解毒汤、阿奇霉素的最小抑菌浓度(MIC),并以棋盘法作联合测试,通过计算部分抑菌浓度指数(FICI)明确相互作用关系,应用结晶紫染色法评估生物膜抑制的效果,再采用实时荧光定量PCR测定相关密度感应基因的表达。结果铜绿假单胞菌标准质控菌株ATCC 27853、临床黏液型及非黏液型经阿奇霉素、黄连解毒汤单一及联合处理后,整体MIC值呈下降趋势,且FICI值以0~1之间居多;铜绿假单胞菌标准质控菌株ATCC 27853、临床黏液型及非黏液型经阿奇霉素、黄连解毒汤单一及联合处理后,经F分析显示,4组OD值比较,差异有统计学意义(P<0.05),且阿奇霉素组、黄连解毒汤组及联合组OD值均低于空白对照组,不同处理组别内铜绿假单胞菌非黏液型OD值均高于黏液型(P<0.05);铜绿假单胞菌ATCC 27853临床黏液型及非黏液型于阿奇霉素、黄连解毒汤在抑制浓度下单一及联合处理下,LasB基因的mRNA相对表达水平随浓度升高呈下降趋势,但LasR基因、rhIR基因的mRNA相对表达水平不随浓度升高呈线性变化。结论黄连解毒汤可通过抑制生物膜生长用以增强铜绿假单胞菌体外活性,与阿奇霉素发挥协同或相加作用,且非黏液型强铜绿假单胞菌耐药性高于黏液型。此外,黄连解毒汤联合阿奇霉素可能对铜绿假单胞菌密度感应基因表达产生影响。

乳酸链球菌素(Nisin)抑菌作用及其抑菌机理的研究

通过抑菌试验确定了乳酸链球菌素(Nisin)的高产菌株-乳酸乳球菌乳酸亚种T0625菌株的抑菌谱。结果显示,含有乳酸链球菌素的发酵液对革兰氏阳性细菌有抑制作用,但对革兰氏阴性细菌、酵母菌和霉菌无抑制作用。从T0625菌株发酵液中提取乳酸链球菌素加入金黄色葡萄球菌培养液中进行抑菌试验,结果培养液蛋白质含量提高、电导率增加,未出现对数生长期。透射电镜观察发现,加入乳酸链球菌素后,菌体变形,出现质壁分离现象,进而菌体细胞破裂,细胞内容物大量外泄,菌体成为不规则残片。SDS-PAGE凝胶电泳显示,乳酸链球菌素作用使金黄色葡萄球菌菌体内蛋白质减少,培养液中蛋白质增加。推测乳酸链球菌素的作用位点为细胞膜,具有破坏菌体细胞膜完整性的作用。试验结果支持了"孔道形成"理论的观点。

喹诺酮类抗菌药物研究新进展

本文简述了喹诺酮类药物近几年的研究进展,分为上市药物、临床试验药物和未来发展趋势三部分,对目前处于临床研究阶段的药物做了重点讲述,其中delafloxacin是最有希望的喹诺酮类候选药物,同时介绍了喹诺酮类抗菌药物的未来发展方向,即侧链修饰、喹诺酮类似物、喹诺酮杂合物和TB药物与喹诺酮轭合物。

弧菌拮抗菌的筛选

用平板划线或点种法对 6 0 2株海洋细菌进行筛选 ,得到 4株对海水养殖动物 (鱼、虾、贝 )的病原菌有拮抗作用的细菌。并对拮抗菌 QJ2的拮抗作用进行了研究 ,结果为 :QJ2有广泛的弧菌抗菌谱 ,对 37株弧菌的抗菌阳性率达到 89.2 % (33/ 37) ;用活菌平板计数法和 O.D.60 0 nm研究了QJ2培养物的去细胞上清液 (CFS)与病原菌 W- 1的作用动力学 ,15min时 W- 1的细菌数便开始减少 ,4 h时细菌数最少 ,6 h后开始增加 ,而对照组的细菌数呈逐渐上升趋势 ;QJ2对自身的拮抗物质不敏感 ;QJ2抗性物质的分子量不大于 80 0 0 Da;经常规生理生化方法和 API- 2 0细菌快速鉴定系统鉴定 ,QJ2为气味黄杆菌 (Flavobacterium odoratum)。

少棘蜈蚣水提取物的抗菌活性

用含有大肠杆菌Escherichia coli K12D31／poly IC和昆虫生理盐水注射液诱导3～4d的少棘蜈蚣Scolo—pendra subspinipes mutilans水提取物表现出较高的抗菌活性，经测定发现在设定的不同温度、pH值及离子强度条件下表现出良好的抗菌活性；对不同的蛋白酶表现出不同的敏感程度；除了对Proteus mirobilis未表现出抑菌外，对其它9种革兰氏阳性菌和阴性菌、真菌都有抗菌作用，表明有广谱抗菌活性；在600μg/ml以下，没有表现出溶血和凝集活性；电镜观察表明可损伤大肠杆菌的外壁，内容物外泄，菌体死亡。

杂合抗菌肽CecA_mil的改造及在毕赤酵母中的分泌表达

参照毕赤氏巴斯德酵母 (Pichiapastoris)偏好密码子 ,改造并化学合成杂合抗菌肽CecA_mil基因 ,改造后的CecA_mil基因克隆到pPICZα_A载体中 ,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα_A_CM ,转化Pichiapastoris受体菌X_33。在醇氧化酶 (AOX)启动子调控下 ,分子量约 1 9kD的CecA_mil杂合抗菌肽获得表达 ,经表达条件优化 ,重组酵母菌的摇瓶发酵产率可达到 2 4 5 μg mL。抗菌特性研究表明 ,该表达产物具有广谱抗菌活性 ,对多数G- 菌及G+ 菌均有较好的抑菌活性 ,特别是对氨苄青霉素抗性菌和卡那霉素抗性菌抑杀效果更好 ;具有热稳定性和酸稳定性。这些特点使得重组抗菌肽CecA_mil在食品防腐、疾病防治和动物饲料添加剂等方面显露出很好的应用前景。

13种抗生素对产AmpC酶或同时产ESBLs细菌的体外抗菌活性

目的 了解临床下呼吸道感染常见革兰氏阴性杆菌产 Amp C酶或同时产超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)的情况 ,检测常用 13种抗生素对这些菌株的体外抗菌活性 ,以指导临床合理选择抗生素。方法 采用酶提取物三维试验确证产 Amp C酶或同时产 ESBL s菌株 ,应用琼脂二倍稀释法测定抗生素对这些菌株的最低抑菌浓度 (MICs)。结果 从临床痰标本分离对第一、二代及一种以上第三代头孢菌素耐药的 2 2 6株常见革兰氏阴性杆菌 ,包括阴沟肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌、鲍氏不动杆菌和铜绿假单胞菌 ,其中单产 Amp C酶 34株 ,同时产 Amp C酶和 ESBL s15株 ,总检出率分别为 15 .0 % (34/ 2 2 6 )、6 .6 %(15 / 2 2 6 )。无论单产 Amp C酶还是同时产 Amp C酶和 ESBL s的细菌对第三代头孢菌素、氨曲南及头孢美唑高度耐药 ,敏感率从 0～ 14 .7% ;对含 β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂哌拉西林 /三唑巴坦、阿莫西林 /克拉维酸、头孢哌酮 /舒巴坦耐药情况亦严重 ,敏感率从 0～ 2 9.4 % ;对环丙沙星、左氧氟沙星除大肠埃希氏菌外有较高的敏感性 ,总敏感率均为 71.4 % ;而对亚胺培南高度敏感 ,仅有 1株铜绿假单胞菌耐药。单产 Amp C酶细菌对头孢吡肟、阿米卡星敏感率分别为 97.1%、6 4 .7% ,同时产 Amp C酶?

超广谱β-内酰胺酶的产生与临床抗生素应用的相关性研究

目的 :了解超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的产生与临床抗生素应用的关系。方法 :应用双纸片扩散法对临床分离的革兰氏阴性杆菌进行ESBLs检测 ,并对患者在ESBLs检测前的抗菌药应用情况进行调查。结果 :16 1株革兰氏阴性杆菌中检出ESBLs阳性菌 5 7株 (35 4 % )。感染ESBLs阳性菌患者在检测前使用任何抗菌药及使用第三代头孢菌素的比率 [分别为 96 4 % (5 5 5 7)和 4 2 1% (2 4 5 7) ]明显高于感染ESBLs阴性菌患者在检测前使用任何抗菌药及使用第三代头孢菌素的比率 [分别为 80 6 % (84 10 4 )和 16 3% (17 10 4 ) ],两者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 5 ) ;并且前者使用第三代头孢菌素时间 [(7 5± 5 4 )d]也明显长于后者 [(2 7± 2 .6 )d](P <0 .0 0 5 )。结论 :抗菌药的应用尤其是第三代头孢菌素的应用 ,是ESBLs阳性菌发生的危险因素。

我院310例抗菌药物不良反应相关影响因素分析

目的探讨我院抗菌药物不良反应（ADR）发生规律及特点，为临床用药安全提供参考。方法对我院2012年上报的310例抗菌药物ADR报告进行回顾性研究，登记患者性别、年龄、原患疾病，药品名称、给药途径，ADR名称、级别、转归。结果ADR集中发生在40～50岁年龄段，女性比男性比例高；新的、严重的ADR分别占总数的1．29％和6．45％；静脉滴注引起的ADR175例，占总数的56．45％，口服给药引起的ADR112例，占总数的36．13％；左氧氟沙星及阿奇霉素ADR发生比例高；ADR临床表现分布广泛，以皮肤及附件损害和消化系统损害为主。β-内酰胺类是引起严重ADR的主要抗菌药物。结论抗菌药物引起ADR的原因较为复杂，应加强监测，促进临床合理用药，保障患者用药安全。

头孢类抗生素对临床常见革兰阴性杆菌体外抗菌活性的比较研究

目的 为证实头孢吡肟的抗菌作用。方法 利用临床分离的常见革兰阴性杆菌 ,对头孢吡肟与常用的第三代头孢菌素和氨曲南的体外抗菌活性进行比较。结果 头孢吡肟和头孢他啶对临床常见革兰阴性杆菌的体外抗菌活性总体上比头孢噻肟和氨曲南强 ,尽管头孢吡肟对染色体介导的 类头孢菌素酶的诱导作用弱并能耐受其水解 ,以致耐头孢他啶的产气肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌对头孢吡肟的体外抗菌活性仍敏感 ,但由于超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL)在阴沟肠杆菌中的出现 ,使阴沟肠杆菌对头孢吡肟的耐药率高达 2 7.9%。 3种非发酵菌对头孢吡肟的敏感性也不比其他广谱头孢菌素更高 ,甚至在铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌中 ,头孢吡肟比头孢他啶的耐药率更高。结论 对头孢吡肟而言 ,除非采取了有力的医院感染控制措施防止 ESBL 和多重耐药细菌 (如嗜麦芽窄食单胞菌 )的扩散 ,使用头孢吡肟治疗严重感染的住院患者并不安全有效。

国产阿奇霉素体内外抗菌作用的研究

本研究目的在于评价国产阿奇霉素的体内、外抗菌活性并与进口阿奇霉素及同类药罗红霉素与红霉素进行比较。结果表明，用琼脂二倍稀释法，阿奇霉素对临床分离的７０７株致病菌的体外抗菌谱与抗菌作用国产品与进口品相仿；阿奇霉素对呼吸道常见致病菌中的革兰氏阳性球菌具有强抗菌活性，对金葡菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌、草绿色链球菌、奈瑟氏淋球菌、嗜血流感杆菌等ＭＩＣ≤００６ｍｇ／Ｌ，与罗红霉素、红霉素相似或稍强。革兰氏阴性菌中的大肠杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸杆菌、不动杆菌属及消化链球菌等，阿奇霉素的抗菌作用要强于罗红霉素与红霉素。它们之间有交叉耐药性。体内试验表明，阿奇霉素与红霉素分别经口或皮下注射给药对金葡菌、肺炎链球菌及大肠杆菌感染小鼠的疗效，口服前者要比后者分别强８，２与５倍，皮下给药前者比后者分别强１７，６与６倍。综上，阿奇霉素具有抗菌谱广、抗菌力强，且有独特的药动学特性，是一种治疗院外获得性呼吸道与泌尿生殖道感染的有效药物。

红霉素环11,12-碳酸酯的体外抗菌活性研究

目的 评价红霉素环 11,12 -碳酸酯的体外抗菌活性。方法 采用琼脂平皿二倍稀释法测定国产和进口红霉素环 11,12 -碳酸酯对临床分离致病菌的体外抗菌作用 ,并与红霉素、罗红霉素、克拉霉素、地红霉素、阿奇霉素和乙酰螺旋霉素进行了比较。结果 国产和进口红霉素环 11,12 -碳酸酯对 5 79株临床分离菌的抗菌活性相近 ,对革兰氏阳性菌和厌氧菌的抗菌活性比红霉素强 2～ 8倍 ,优于罗红霉素、克拉霉素、地红霉素、阿奇霉素、乙酰螺旋霉素 ,但对革兰氏阴性菌的抗菌活性稍弱于阿奇霉素。红霉素环 11,12 -碳酸酯对金葡菌显示抑菌作用 ,对化脓链球菌在 2～ 4倍 MIC浓度时显示杀菌作用 ;红霉素环 11,12 -碳酸酯抗金葡菌和化脓链球菌的活性随着 p H的增加而增强 ,接种量和血清浓度对国产红霉素环 11,12 -碳酸酯抗金葡菌和化脓链球菌的活性无明显影响。结论 红霉素环 11,12 -碳酸酯具有较强的体外抗菌活性 ,国产红霉素环 11,12 -碳酸酯抗菌活性与进口相近 ,优于红霉素、罗红霉素、克拉霉素、地红霉素、阿奇霉素和乙酰螺旋霉素。

银系广谱抗菌纸的研究

采用银系抗菌粉与水制成一定浓度的混合液 ,然后将抗菌混合液均匀地喷在纸页的表面上 ,研究结果表明 ,这种银系抗菌纸对抑菌有一定的效果。

东北鹤虱中一个具有抗菌活性的新喹酮类生物碱

目的对东北鹤虱的化学成分进行分离和结构鉴定并进行抗菌活性测定。方法通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等分离方法从东北鹤虱的BuOH提取物中分离得到一个新喹酮类化合物,以有机波谱方法(1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR、HR-MS,UV和IR等)进行结构鉴定,并以纸片琼脂扩散法进行抗菌活性测定。结果从东北鹤虱中分离出一个新喹酮类生物碱,鉴定为8-甲氧基-4-喹酮-2-羧酸,并对铜绿假单胞菌、肠致病性大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及表皮葡萄球菌具有抗菌活性。结论该化合物为一新化合物,并具有抗菌活性。

两种杂合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及活性测定

参照毕赤巴斯德酵母(Pichia pastoris)的偏好密码子,改造克隆杂合抗菌肽CA(1～7)M(4～11)和CB(1～7)M(4～11)基因,将改造后的基因克隆到pPICZ-αA载体中,构建分泌型表达载体pPICZ-αA-CAM和pPICZ-αA-CBM,转化宿主菌Pichia pastorisX-33,在甲醇的诱导下进行表达.实验结果表明,杂合抗菌肽获得表达,两种表达产物具有明显的抗菌活性.此外,本文还比较了二者的抗菌谱,分析了杂合肽的性质,优化了酵母电转化条件.

酪蛋白来源新型抗菌肽(Trpi)抗菌活性的初步研究

本实验对本实验室最近通过胰蛋白酶水解酪蛋白纯化得到了一种新的具有抗菌活性的多肽(Trpi)进行了初步的抗菌试验,实验测定了该肽的抑菌效果,结果表明该肽可抑制多种细菌的生长,尤其是对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抗菌作用,显示出该抗菌肽具有非常大的科研和应用价值。

副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6发酵提取物对鲜虾的保鲜评价

将经过0.5%FX-6发酵提取物浸泡处理的鲜虾于4℃冷藏,隔天测定其p H、TVB-N值、细菌总数等鲜度指标及进行感官评价。同时,以相同浓度的山梨酸钾、乳酸链球菌素为阳性对照组。实验结果表明:随着鲜虾冷藏时间的延长,其p H、TVB-N值、细菌总数等鲜度指标均出现不同程度的上升,以TVB-N值为25 mg/100 g和菌落总数为106 CFU/g作为判断货架期终点的界限,空白对照组冷藏第6 d时其TVB-N值和菌落总数已超过界限,0.5%山梨酸钾、0.5%乳酸链球菌素组第8 d时超过界限,而0.5%FX-6发酵提取物组则在第10 d时才超过界限。因此,综合各项鲜度指标及感官评分可知,经过0.5%山梨酸钾、0.5%乳酸链球菌素处理后的鲜虾的货架期可由4 d延长至6 d,而0.5%FX-6发酵提取物能够延长鲜虾货架期至8 d。说明0.5%FX-6发酵提取物对鲜虾具有较好的保鲜效果,优于0.5%山梨酸钾、0.5%乳酸链球菌素。