茯苓甘草合剂辅助西药对慢性阻塞性肺疾病合并肌肉衰减患者NF-κB信号通路的影响

目的探讨茯苓甘草合剂辅助西药对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肌肉衰减NF-κB信号通路的影响及分子机制。方法选取2020年8月至2022年8月COPD合并肌肉衰减患者104例,作为研究对象随机数字表法分为对照组和观察组,每组52例。对照组给予西药治疗,观察组给予西药+茯苓甘草合剂治疗。统计2组中医疗效、不良反应及治疗前后中医证候积分、NF-κB mRNA、蛋白及因子[白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、营养状况指标[转铁蛋白(Tf)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(ALB)]、肌肉衰减相关指标[握力试验、起立-行走计时测试(TUGT)、5次坐立试验(FTSST)、肌少症筛查问卷(SARC-F)]。结果观察组中医治疗总有效率[86.54%(45/52)]高于对照组[67.31%(35/52)](P<0.05);治疗1个月、3个月后观察组中医证候积分低于对照组(P<0.05);治疗1个月、3个月后观察组NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、IL-8、IL-1、TNF-α低于对照组(P<0.05);治疗3个月后观察组握力高于对照组,FTSST、TUGT、SARC-F评分低于对照组(P<0.05);治疗期间,2组均未出现明显不良反应。结论茯苓甘草合剂辅助西药治疗COPD合并肌肉衰减效果确切,可通过抑制NF-κB信号通路,减轻炎性反应,改善患者营养状态,有效改善临床症状,且安全性高。

Apigenin ameliorates imiquimod-induced psoriasis in C57BL/6J mice by inactivating STAT3 and NF-κB

Psoriasis is a chronic autoimmune disease featured by patches on the skin.It is caused by malfunction of immune cells and keratinocytes with inflammation as one of its key features.Apigenin(API)is a natural flavonoid with anti-inflammatory and immunoregulatory properties.Therefore,we speculated that API can ameliorate psoriasis,and determined its effect on the development of psoriasis by using imiquimod(IMQ)-induced psoriasis mouse model.Our results showed that API attenuated IMQ-induced phenotypic changes,such as erythema,scaling and epidermal thickening,and improved splenic hyperplasia.Abnormal differentiation of immune cells was restored in API-treated mice.Mechanistically,we revealed that API is a key regulator of signal transducer activator of transcription 3(STAT3).API regulated immune responses by reducing interleukin-23(IL-23)/STAT3/IL-17A axis.Moreover,it suppressed IMQ-caused cell hyperproliferation by inactivating STAT3 through regulation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 and nuclear factor-κB(NF-κB)pathway.Furthermore,API reduced expression of inflammatory cytokines through inactivation of NF-κB.Taken together,our study demonstrates that API can ameliorate psoriasis and may be considered as a strategy for psoriasis treatment.

β石竹烯抑制核因子κB(NF-κB)通路下调炎症因子表达减轻小鼠全身炎症

目的研究β石竹烯(BCP)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠全身炎症的抗炎作用机制。方法洁净级C57BL小鼠分为正常组、LPS模型组、地塞米松组、BCP组。通过腹腔注射LPS建立小鼠全身炎症模型12 h后,采用ELISA检测小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6的含量,Western blot法检测脾脏组织核因子κB p65(NF-κB p65)、髓样分化因子88(MyD88)、Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达。结果与正常组相比,LPS组IL-1β、TNF-α和IL-6的含量显著升高,脾脏组织中NF-κB p65、MyD88和TLR4蛋白的表达量也明显升高。与LPS组相比,BCP组的小鼠IL-1β、TNF-α和IL-6表达水平明显降低,脾脏组织中NF-κB p65、MyD88和TLR4蛋白表达显著降低,并且3.5μg/(L·d)BCP组抑制作用明显高于3μg/(L·d)BCP组。结论BCP通过抑制NF-κB信号通路下调炎症因子的表达发挥抗炎作用。

地佐辛靶向TLR4/NF-κB信号通路减轻瑞芬太尼诱导的痛觉过敏机制研究

目的探讨地佐辛对瑞芬太尼诱导的痛觉过敏的影响及机制。方法将40只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组(C组)、切口痛组(I组)、瑞芬太尼输注+切口痛组(R+I组)、瑞芬太尼联合地佐辛输注+切口痛组(R+D+I组),每组10只。其中,C组不做任何处理。R+I组和R+D+I组于造模前静脉输注瑞芬太尼,I组输注等量0.9%氯化钠溶液。随后,基于左后足底切口术对I组、R+I组和R+D+I组大鼠建立切口痛模型。R+D+I组大鼠在瑞芬太尼输注前通过尾静脉注射给予地佐辛预处理。采用痛觉行为学实验评估大鼠在术前和术后不同时间点的机械缩足反应阈(paw withdrawal threshold,PWT)和热缩足反应潜伏期(paw withdrawal latency,PWL);酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测4组大鼠脊髓背角相关炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)及IL-10的表达水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测4组大鼠脊髓背角TLR4、NF-κB和TRPA1的mRNA表达水平;Western blot检测组大鼠脊髓背角TLR4、NF-κB和TRPA1的蛋白表达水平。结果成功构建瑞芬太尼诱导的大鼠术后痛觉过敏模型,与C组比较,I组在术后PWT值和PWL值均显著降低,脊髓背角促炎因子TNF-α、和IL-1β表达升高,而抗炎因子IL-10表达降低,TLR4、NF-κB、TRPA1蛋白和mRNA水平均明显增加(P<0.05);与I组比较,R+I组在术后PWT值和PWL值均明显下降,脊髓背角促炎因子TNF-α、和IL-1β表达升高,而抗炎因子IL-10表达降低以及TLR4、NF-κB、TRPA1蛋白和mRNA水平均明显增加(P<0.05);与R+I组比,R+D+I组在术后PWT值和PWL值均明显升高,脊髓背角促炎因子TNF-α、和IL-1β表达降低,而抗炎因子IL-10表达升高以及TLR4、NF-κB、TRPA1蛋白和mRNA水平均明显降低(P<0.05)。结论地佐辛通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,下调TRPA1蛋白和mRNA表达,减少脊髓背角炎症,达到减轻瑞芬太尼诱导的术后痛觉过敏的效果。

茯苓酸调节PI3K/AKT/NF-κB信号通路对大鼠幽门螺旋杆菌相关性胃炎的治疗作用

目的 探讨茯苓酸(PA)对大鼠幽门螺旋杆菌(Hp)相关性胃炎的治疗效果及作用机制。方法 建立Hp相关性胃炎大鼠模型;所有大鼠分为对照组(CT组)、模型组(M组)、PA低剂量组(PA L组)和PA高剂量组(PA H组)、PA H+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激活剂(740 Y-P)组;评估各组大鼠胃黏膜损伤指数(UI),透射电子显微镜观察胃黏膜细胞形态学,HE染色评价胃黏膜病理学特征,ELISA检测胃组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平,Western blot法检测PI3K、磷酸化-PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子(NF)-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与CT组比较,M组大鼠胃黏膜糜烂,上皮水肿、充血、溃疡严重,上皮细胞固缩,炎性细胞浸润,UI、IL-6、TNF-α、iNOS以及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平升高,IL-10和SOD水平降低(P<0.05);与M组比较,PA L组、PA H组大鼠胃黏膜损伤改善,炎性细胞浸润减少,UI、IL-6、TNF-α、iNOS以及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平降低,IL-10和SOD水平升高(P<0.05);与PA H组比较,PA H+740 Y-P组大鼠胃黏膜病理损伤加重,上皮细胞固缩,UI、IL-6、TNF-α、iNOS以及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平升高,IL-10和SOD水平降低(P<0.05)。结论 PA可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路发挥对大鼠Hp相关性胃炎的治疗作用。

泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响

目的探讨泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响。方法招募2019年1月至2022年6月唐山市妇幼保健院收治的儿童重症肺炎支原体肺炎患者120例,采用随机数字表法将其分为对照组(采用阿奇霉素治疗,60例)和观察组(采用泼尼松联合阿奇霉素治疗,60例)。治疗4周后,比较两组治疗效果、临床肺部感染量表(CIPS)评分、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白以及下游炎性因子的水平。结果观察组患者的体温恢复时间、咳嗽缓解时间、咳痰缓解时间、喘息缓解时间、肺部啰音消失时间较对照组更快,住院时间更短,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的体温、白细胞计数、气道分泌物、氧合情况、胸部X射线、痰培养等CIPS项目评分以及总分均较治疗前降低,且观察组评分较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组TLR4、MyD88、NF-κB、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)水平均降低,且观察组水平较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法对人体血清TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白及下游炎性因子水平有显著下调作用,可提高儿童重症肺炎支原体肺炎患者的临床疗效。

白藜芦醇抑制海马组织NF-κB/JNK通路改善严重烧伤大鼠认知功能

目的探讨白藜芦醇(RSV)对严重烧伤大鼠认知功能的改善作用及其可能的机制。方法将雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组和RSV组,每组6只。建模成功后,RSV组大鼠每日灌胃20 mg/kg的RSV,对照组和模型组每日灌胃等体积的生理盐水溶液。4周后,跳台实验检测大鼠认知功能;ELISA检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量;实时定量PCR和Western blot法分别检测海马组织中TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白的表达;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测海马神经细胞凋亡情况;Western blot法检测海马组织中核因子κB/c-Jun N-氨基末端激酶(NF-κB/JNK)通路相关蛋白表达情况。结果与模型组大鼠相比,RSV组大鼠认知功能提高,大鼠血清TNF-α和IL-6含量明显降低,海马组织中TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达降低,海马神经元凋亡率降低,磷酸化的NF-κB p65/NF-κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、p-JNK/JNK比值降低。结论RSV通过阻断NF-κB/JNK信号通路,抑制炎症反应和海马神经元凋亡,从而改善严重烧伤大鼠认知功能。

蒙药珍宝丸通过激活SIRT1/NF-κB通路抑制氧糖剥夺/复氧小鼠海马神经细胞炎症和凋亡

目的观察蒙药珍宝丸即额尔敦-乌日勒(EU)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)的HT22小鼠海马神经细胞凋亡的影响,并探究其潜在机制。方法采用三气培养箱和无糖无氧培养基构建OGD/R损伤HT22细胞模型;(10、20、40)μg/mL EU处理OGD/R细胞,筛选最适剂量20μg/mL。沉默信号调节因子1(SIRT1)抑制剂尼克酰胺(NAM)联合EU处理OGD/R损伤细胞设为EU联合NAM组,二甲基亚砜(DMSO)联合EU处理的OGD/R损伤细胞设为EU联合DMSO组;CCK-8法检测细胞活性,ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;实时荧光定量PCR检测HT22细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、SIRT1、核因子κB抑制物α(IκBα)、磷酸化的核因子κB(p-NF-κB)的蛋白表达。结果与对照组相比,OGD/R组HT22细胞活性显著降低,LDH漏出率显著升高,而(20、40)μg/mL EU处理后,细胞活性显著升高,LDH漏出率也明显降低,20μg/mL的EU为最适剂量。OGD/R组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA表达及凋亡率均显著高于对照组,SIRT1、IκBα、Bcl2蛋白显著低于对照组,p-NF-κB、BAX蛋白显著高于对照组,EU明显抑制OGD/R引起的HT22细胞TNF-α、IL-6、IL-1β分泌和凋亡。结论EU显著减轻OGD/R小鼠的炎性反应和海马神经细胞凋亡,这与激活SIRT1/NF-κB信号通路有关。

乌司他丁抑制TLR4/NF-κB信号通路对心肺复苏大鼠心功能的改善作用

目的旨在探究乌司他丁对心肺复苏大鼠的影响。方法通过窒息构建心脏骤停大鼠模型,窒息9.5 min后,对大鼠静脉注射肾上腺素,并对大鼠胸部进行按压以实施心肺复苏。Kaplan-Meier存活曲线分析大鼠存活率,神经系统缺损评分(NDS)评估大鼠神经系统缺损,转棒疲劳实验评估大鼠运动协调及平衡能力。ELISA法检测血清炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6水平,western blotting检测大脑皮层TLR4/NF-κB信号通路的表达。结果乌司他丁治疗提高大鼠存活率,改善心脏骤停后的心功能及大鼠神经认知功能、运动协调能力。乌司他丁降低心脏骤停/心肺复苏后促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平,降低TLR4蛋白及p-p65/p65水平。结论乌司他丁抑制TLR4/NF-κB通路活性,对心肺复苏大鼠心功能及运动协调能力具有改善作用。

miR-146调控TLR4/NF-κB通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的探究miR-146通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰(premature ovarian failure,,POF)的机制。方法野生小鼠实验:60只SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=30)和POF组(n=30)。POF组建立卵巢早衰模型,造模后15天qPCR检测2组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40只C57BL/6小鼠和20只miR-146敲除小鼠分为三组:对照组(n=20)、野生型POF组(n=20)和miR-146敲除POF组(n=20),野生型POF组和miR-146敲除POF组建立POF模型,建模后15天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达水平;Western blot检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)和TLR4信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果野生鼠实验表明与对照组相比,POF组小鼠卵泡中miR-146表达水平下调(0.51±0.14 vs 1.52±0.21),差异具有统计学意义(t=7.338,P<0.01);基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF组和miR-146敲除POF组原始卵泡(9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11)、初级卵泡(6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12)、次级卵泡(5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34)均降低,闭锁卵泡(10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64)升高,差异具有统计学意义(F=7.787,8.214,9.726,7.811,均P<0.01)。与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织TLR4(68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml),NF-κB(74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml),TNF-α(72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml)和IL-6(69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml)分泌显著升高,差异均有统计学意义(F=6.281,7.264,8.724,6.817,均P<0.01);与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织Bax蛋白表达水平降低(1.18±0.19.0.61±0.14 vs1.81±0.21),Bcl2蛋白表达升高(0.59±0.05,0.91±0.05 vs 0.58±0.02),TLR4(1.10±0.12,0.41±0.04 vs 1.13±0.11)和NF-κB(0.81±0.02,0.31±0.06 vs 0.87±0.27)降低,差异均有显著性统计学意义(F=7.235,6.714,7.612,7.737,均P<0.01)。结论miR-146具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。

肠黏膜TLR4/NF-κB通路激活与伪无菌IgA肾病小鼠肾损害有关

目的探讨肠黏膜Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路对伪无菌IgA肾病(IgAN)小鼠肾脏损害的影响。方法C57BL/6小鼠随机分为实验组(伪无菌小鼠造模组)、对照组(正常小鼠造模组)、伪无菌小鼠空白组、正常小鼠空白组。采用四联抗生素灌胃,每天1次,连续14 d,构建伪无菌小鼠。在伪无菌小鼠的基础上,采用牛血清白蛋白(BSA)联合葡萄球菌肠毒素(SEB)建立IgAN模型,通过免疫荧光染色及过碘酸希夫(PAS)染色观察肾组织病理形态学变化,ELISA分析肠黏膜屏障损伤指标脂多糖(LPS)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)和右旋乳酸(D-LAC)的含量,生化分析检测24 h尿蛋白、血肌酐及尿素氮,反转录PCR及Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)mRNA及蛋白水平。结果伪无菌IgAN小鼠的肾脏损伤程度较IgAN小鼠更严重,并且伪无菌IgAN小鼠的肠道黏膜LPS、sICAM-1和D-LAC表达显著升高。此外,在IgAN伪无菌小鼠的肠组织中,TLR4、MyD88、NF-κB水平的表达均上调。结论肠道菌群紊乱导致肠黏膜屏障损伤诱导TLR4信号通路的激活介导IgAN的肾脏损伤。

平喘宁调节IRE-1α-XBP-1s信号轴干预哮喘大鼠气道炎症的机制研究

目的:探究平喘宁对哮喘大鼠气道炎症的防治作用及机制。方法:将105只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁高剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁低剂量组,每组15只。以卵清蛋白联合氢氧化铝复制大鼠哮喘模型,造模21 d后,各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组、模型组灌胃给予等体积的生理盐水,1次/d,连续4周。4周后,在进行哮喘激发试验后2 h内解剖大鼠并取出肺组织,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。HE染色观察肺组织中平滑肌厚度、炎症细胞浸润程度等相应病理的改变;ELISA法检测BALF中IL-5、IL-17水平;RT-qPCR法检测肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量;Western blotting法检测肺组织中IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量。结果:HE染色结果显示,与模型组比较,各给药组(平喘宁低剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁高剂量组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组)大鼠肺组织病理情况都有不同程度的缓解。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平均明显降低(P<0.01),且平喘宁具有剂量依赖性;平喘宁低、中剂量组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平均高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01);平喘宁高剂量组大鼠BALF中IL-5水平明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),而IL-17水平与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RT-qPCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显升高(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显降低(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显升高(P<0.05或P<0.01);平喘宁低剂量组大鼠肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01);平喘宁中剂量组大鼠肺组织XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.05或P<0.01),而IRE-1αmRNA相对表达量与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05);平喘宁高剂量组大鼠肺组织IRE-1αmRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),而Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组(P<0.01);平喘宁高剂量组Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相对表达量与桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05),XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Scara3 mRNA与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显降低(P<0.01);平喘宁低剂量组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01);平喘宁中剂量组大鼠肺组织XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.05或P<0.01),IRE-1α蛋白相对表达量明显高于桂龙咳喘宁组(P<0.05),而IRE-1α蛋白相对表达量与地塞米松组比较,差异无统计学意义(P>0.05);平喘宁高剂量组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:平喘宁可通过调节IRE-1α-XBP-1s信号轴改善OVA诱导的哮喘大鼠气道炎症性损伤。

抑制IRE1α/NF-κB通路减轻蛛网膜下腔出血后炎症反应

目的:探讨肌醇激酶-1 (IRE1α)/核因子κB (NF-κB)通路与蛛网膜下腔出血(SAH)炎症反应的关系。方法:通过血管内穿刺法建立SAH模型。所有实验动物随机分为Sham组、SAH组、SAH + DMSO组、SAH + STF-083010 (IRE1α抑制剂)组、SAH + BAY11‐7082 (NF-κB抑制剂)组。使用改良加西亚评分评估神经功能。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IRE1α、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、NF-κB的表达。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的浓度。结果:SAH后改良加西亚评分降低,IRE1α、GRP78、NF-κB蛋白表达和炎症因子(TNF-α, IL-1β, IL-6)表达均增加,抑制IRE1α/NF-κB通路后所有结果正好相反。皮尔森相关分析显示炎症因子表达与改良加西亚评分呈负相关。结论:抑制IRE1α/NF-κB通路可以减轻SAH后炎症,发挥神经保护作用。

中药单体调控NF-κB信号通路治疗宫颈癌的研究进展

宫颈癌是女性生殖系统中发病率较高的恶性肿瘤,人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是导致宫颈癌变的主要因素。NF-κB作为肿瘤相关炎症信号通路,在调节机体炎症反应与免疫应答方面发挥重要作用。HPV感染可激活NF-κB信号通路以促进宫颈慢性炎症,从而参与宫颈癌的发生发展。随着中医药的不断发展,中药在治疗肿瘤方面发挥了独特优势,中药单体能多靶点、多通路干预肿瘤细胞生长。通过多个中英文数据库的检索,发现中药单体可通过调控NF-κB信号通路发挥抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移、促进癌细胞凋亡、诱导癌细胞自噬、增强癌细胞化疗敏感性等作用以干预宫颈癌的发展。因此基于研究现状,本文从分子生物学角度全面论述中药单体调控NF-κB信号通路治疗宫颈癌的研究进展,以期为中医药靶向治疗宫颈癌的研究提供重要方向。

沙棘经PXR/NF-κB通路减缓免疫性肝损伤小鼠肝脏CYP2C下调

目的探讨沙棘(sea-buckthorn)是否通过PXR/NF-κB通路,减缓卡介苗(BCG)诱导的免疫性肝损伤小鼠肝脏细胞色素P4502C(CYP2C)下调。方法采用单次尾静脉注射BCG 125 mg·kg-1复制免疫性肝损伤小鼠模型用于乙型肝炎相关研究,将小鼠随机分为control组、BCG组、BCG+沙棘颗粒(sea-buckthorn granule,SG)(分别灌胃50、100、200 mg·kg-1,每日2次)组和BCG+PCN(腹腔注射100 mg·kg-1,每日1次)组。ELISA法检测血清转氨酶和肝组织中TNF-α、IL-1β的表达,Western blot检测肝脏NF-κB p65核蛋白和孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP2C总蛋白表达,HE染色观察小鼠肝脏的病理变化。结果沙棘抑制TNF-α、IL-1β、NF-κB p65的过表达,且缓解CYP2C、PXR蛋白表达下调,肝脏病理和血清转氨酶均有所改善,且呈剂量依赖性;用PXR的小鼠特异性激动剂PCN干预后与SG高剂量组相似。结论沙棘可以经PXR/NF-κB通路,减缓免疫性肝损伤小鼠CYP2C的下调。

芪明颗粒调控NF-κB/NLRP3通路保护糖尿病大鼠肾损害的分子机制

目的 探讨芪明颗粒调控NF-κB/NLRP3通路保护糖尿病大鼠肾损害的分子机制。方法 高脂高糖饲养联合STZ (35 mg/kg)腹腔注射诱导的DN大鼠随机被分为模型组、芪明颗粒低、中、高剂量组(0.61, 1.215, 2.43 g/kg/d)和二甲双胍组(0.15 g/kg/d),连续干预12周,观察大鼠RBG及肾脏病理变化,ELISA检测UACR、Scr、BUN、IL-1β、IL-18水平;WB检测NF-κB/NLRP3通路关键蛋白。结果 模型组RBG升高,肾功能下降、肾脏损伤明显,炎症因子增多(P<0.01);肾组织NF-κB/NLRP3通路蛋白表达升高(P<0.01);芪明颗粒降低UACR、Scr、BUN水平,减少血清IL-1β、IL-18释放,肾组织Phospho-NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 芪明颗粒可能通过调控NF-κB/NLRP3通路保护DN大鼠肾损害。

柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白抑制NF-κB信号通路的作用机制研究

目的 柯萨奇病毒B组5型(CVB5)是手足口病的重要病原体之一,可导致发热、皮疹或疱疹等临床症状,重症者出现神经系统疾病,甚至死亡。天然免疫应答是机体抗病毒入侵的第一道防线,其中核因子κB (NF-κB)是宿主天然免疫反应中的重要蛋白质,然而关于CVB5感染后调控NF-κB介导信号通路的研究尚鲜有报道。方法 本研究通过检测启动子活性、促炎因子水平以及通路中关键蛋白表达等,阐明CVB5对NF-κB信号通路的调控作用机制。结果 CVB5感染可抑制促炎因子表达和p65的磷酸化。CVB5非结构蛋白(NSP)可抑制促炎因子表达以及重要蛋白p65和IκBα的磷酸化。经STRING11.1数据库预测表明,CVB5 3CD蛋白与宿主多聚胞嘧啶结合蛋白1 (PCBP1)具有相互作用,且PCBP1可促进IκBα和p65的磷酸化,抑制病毒复制。结论 CVB5 NSP可负调控NF-κB信号通路,且与3CD相互作用的PCBP1蛋白可通过调控NF-κB通路抑制CVB5复制。本研究探索病毒与宿主天然免疫应答的调控作用,从而为研制抗CVB5感染的药物提供作用靶点。

IL-33通过激活NF-κB信号通路上调eIF3a的表达介导小鼠肺肌纤维母细胞增殖分化促进肺纤维化

目的 探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立肺纤维化小鼠模型。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原纤维沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。分离培养小鼠原代成纤维细胞,分为对照组、 IL-33组、 IL-33联合二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Transwell^(TM)实验观察细胞迁移能力。实时定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、 Col3和α-SMA mRNA的表达。Western blot法检测IL-33、 Col1、 Col3、 α-SMA、磷酸化核因子κB抑制物α(p-IκBα)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、真核翻译起始因子3a(eIF3a)及核内NF-κB p65的蛋白水平。结果 与对照组相比,BLM组IL-33、 p-IκBα、 p-NF-κB p65、 eIF3a的表达及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高,同时α-SMA、 Col1和Col3的表达明显上调。与BLM组相比,IL-33组p-IκBα、 p-NF-κB p65和eIF3a的表达及NF-κB p65核转移水平进一步增加,肺组织α-SMA、 Col1和Col3的表达进一步上调;而抗IL-33抗体的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验表明IL-33能够明显提高成纤维细胞增殖和迁移的能力、显著上调IκBα、 NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB p65核转移水平及eIF3a的表达,明显促进α-SMA、 Col1和Col3的表达。而IL-33的这些作用能够被PDTC所逆转。结论 IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而上调eIF3a的表达,进而诱导肺MFb增殖分化而促进PF的发生发展。

MYD88过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的探讨MYD88基因过表达对人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用质粒转染法将过表达MYD88 L265P基因的pEGFP-C2-MYD88转染DLBCL细胞;实验分为空白对照组、阴性对照组和MYD88 L265P过表达组。倒置荧光显微镜下观察MYD88 L265P过表达后荧光表达;运用RT-PCR、Western blot法检测MYD88 L265P过表达前后DLBCL细胞的MYD88 L265P、IRAK4、NF-κB和BCL2的mRNA及蛋白表达水平;应用CCK-8法检测DLBCL细胞增殖;采用Hoechst染色法检测DLBCL细胞凋亡情况。结果MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.6704±0.0175)和阴性对照组(0.7153±0.0196)相比,MYD88 L265P过表达组(1.1572±0.0102)的增殖率显著增高,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(0.69±0.04)和阴性对照组(0.81±0.07)相比,MYD88 L265P过表达组(0.48±0.05)的凋亡率明显降低,均有统计学意义(P均<0.05)。MYD88 L265P过表达后,与空白对照组(mRNA:1.0158±0.0115、0.9873±0.0102、1.0076±0.0153;蛋白:0.1834±0.0589、0.0968±0.0157、0.1475±0.0418)和阴性对照组(mRNA:0.9132±0.0098、1.0032±0.0156、0.9327±0.0112;蛋白:0.1879±0.0423、0.0889±0.0513、0.1348±0.0501)相比,MYD88 L265P过表达组IRAK4、NF-κB和抗凋亡蛋白BCL2的mRNA(3.2432±0.0136、2.9766±0.0213、1.5859±0.0198)及蛋白表达(0.4527±0.0524、0.2189±0.0475、0.3014±0.0598)明显增高,均有统计意义(P均<0.05)。结论MYD88 L265P过表达后,DLBCL细胞的凋亡率下降,细胞增殖率上升,其机制可能与MYD88 L265P基因突变激活和放大了NF-κB通路,促进抗凋亡蛋白BCL2的过表达有关。

原花青素通过上调SIRT1表达抑制NF-κB通路减轻脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应

目的探索原花青素(PC)对脂多糖(LPS)诱导下的RAW264.7细胞炎症反应的调控作用及可能机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,分别加入PBS及不同浓度PC处理24 h后,添加1μg/mL LPS继续处理6 h。采用实时定量PCR检测RAW264.7巨噬细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-4、精氨酸酶1(Arg1)的mRNA表达;采用流式细胞术检测PBS组、LPS组及PC联合LPS组对巨噬细胞M1、M2型极化的影响;采用Western blot法检测不同浓度PC处理后沉默信息调节蛋白1(SIRT1)、核因子κB p65(NF-κB p65)与乙酰化的NF-κB p65(Ace-p65)的蛋白表达;采用免疫共沉淀实验检测PC处理巨噬细胞后SIRT1与NF-κB p65的结合效应。结果与PBS组相比,PC组中巨噬细胞促炎因子IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α的mRNA表达降低,抑炎因子IL-4、Arg1的mRNA表达升高。与LPS组相比,PC联合LPS组可显著抑制巨噬细胞M1型极化,促进M2型极化。随着PC浓度的增加,SIRT1表达呈现上调趋势,NF-κB p65蛋白未表现出显著变化,Ace-p65蛋白在高浓度PC处理时表达显著降低。PC处理可显著增强SIRT1与NF-κB p65的结合效应。结论PC可通过上调SIRT1的表达,抑制NF-κB通路,减轻LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应。