丹参多酚酸B对动脉粥样硬化大鼠OX40/OX40L免疫通路研究

目的:研究丹参多酚酸B对动脉粥样硬化大鼠OX40/OX40L免疫通路的影响作用。方法:八周龄雄性SD大鼠60只,随机分成6组(正常组、模型组、丹参多酚酸B低剂量组、中剂量组、高剂量组、辛伐他汀组),并给予相应的处理。结果:各用药组OX40mRNA表达水平明显高于正常组,(P<0.05)与模型组比较,丹参多酚酸B低剂量组、中剂量组以及辛伐他汀组OX40mRNA表达明显下调(P<0.05),各用药组OX40LmRNA表达水平明显高于正常组,(P<0.05);,丹参多酚酸B中剂量组以及辛伐他汀组OX40LmRNA与模型组比较明显下调(P<0.05);模型组以及丹参多酚酸B各剂量组的OX40的蛋白表达水平明显高于正常组(P<0.05);丹参多酚酸B中剂量组以及高剂量组的OX40蛋白水平明显高于模型组(P<0.05)。丹参多酚酸B中剂量和高剂量组的OX40L的蛋白表达水平明显高于正常组(P<0.05)。结论:丹参多酚酸B可以明显下调OX40/OX40LmRNA水平,提示丹参多酚酸B可能通过调节OX40/OX40L信号通路抑制动脉粥样硬化炎症免疫反应。

Ag85B调节小鼠髓样树突状细胞的成熟和TSLP介导下TSLPR和OX40L的表达

目的：研究抗原85B（Ag85B）体外诱导小鼠未成熟的髓样树突状细胞（m DCs）的成熟以及对胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）介导下m DCs表达TSLP受体（TSLPR）和OX40L的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制。方法：应用重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱生C57BL/6小鼠未成熟的m DCs,并运用免疫磁珠分离的方法纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行形态学观察和细胞表型鉴定;分别用0、50、100、200μg/L不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的m DCs,培养24 h,流式细胞术检测细胞表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取最佳的Ag85B或TSLP处理浓度。随后将m DCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B＋TSLP处理组,培养24 h后检测m DCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达。结果：体外诱导培养7 d,倒置相差显微镜下可见细胞表面呈现不规则树突样突起,扫描电镜下见细胞类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟m DCs的形态学特点;纯化后的m DCs表达表面分子CD11c的细胞较表达共刺激分子CD80和CD86的细胞多,符合未成熟m DCs的表型特征。与空白对照组比较,50~200μg/L的Ag85B处理组m DCs表达CD80和CD86的细胞比率显著增高（P〈0.05）,表达TSLPR和OX40L的细胞比率无显著差异。与空白对照组相比较,50、100和200μg/L浓度的TSLP处理组的m DCs表达CD80和CD86的细胞比率均显著增加（P〈0.05）;与空白对照组和50μg/L TSLP处理组相比较,100μg/L和200μg/L TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率均显著升高（P〈0.05）。选取200μg/L作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,结果发现Ag85B处理组和Ag85B＋TSLP处理组的m DCs表达TSLPR和OX40L的细胞比率较TSLP处理组均显著降低（P〈0.05）,与空白对照组比较差异不显著。结论：Ag85B可通过上调m DCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的m DCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的m DCs途径抑制气道炎症。

OX40及Bcl-2在红斑狼疮皮损及外周血淋巴细胞中的表达

目的:测定OX40及Bcl-2在红斑狼疮皮损及外周血淋巴细胞中的表达。方法:采用免疫组化ABC法和半定量RT-PCR法,检测不同亚型红斑狼疮患者的皮损及活动期SLE患者外周血单一核细胞中OX40及Bcl-2的表达水平,并与正常人的皮肤和外周血淋巴细胞进行比较。结果:不同亚型红斑狼疮的皮损及活动期SLE外周血淋巴细胞中OX40及Bcl-2的表达水平均增高,与正常人以上指标差异显著;而不同亚型红斑狼疮组间差异无显著性。结论:OX40及Bcl-2在红斑狼疮发病中可能发挥重要作用,为寻找红斑狼疮诊断与治疗的新靶点提供了新的思路。

程序性死亡配体-1与OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的通过检测程序性死亡配体-1(PD-L1)和OX40L在NK/T细胞淋巴瘤中的表达,分析PD-L1及OX40L的表达与NK/T细胞淋巴瘤的临床分期、LDH水平、β2微球蛋白水平、Ki-67等之间的关系,通过二者表达水平的相关性分析探讨二者在肿瘤局部微环境的表达关系。方法应用Envision法检测35例NK/T细胞淋巴瘤组织(观察组)和17例慢性鼻-鼻窦炎组织(对照组)中PD-L1及OX40L的表达情况,探讨NK/T细胞淋巴瘤的临床病理特征与两种因素之间的相互联系,并分析这两种因素表达水平之间的相关性。利用SPSS 26.0软件对所得数据进行综合统计处理。组间差异的比较采用χ^(2)检验,相关性分析采用非参数Spearman秩相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)PD-L1在NK/T细胞淋巴瘤组织(74.3%)中的表达与在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织(76.5%)中的表达,P>0.05表示差异无统计学意义。NK/T细胞淋巴瘤组织中PD-L1的阳性表达的关联因素常见为临床分期(Ann Arbor分期)、LDH水平、Ki-67(P<0.05),而与患者性别、年龄、临床症状、β2微球蛋白关联不明显;(2)OX40L在NK/T细胞淋巴瘤组织(37.1%)中的表达低于对照组(88.2%),差异有统计学意义。NK/T细胞淋巴瘤组织中OX40L的阳性表达与临床分期有关(P<0.05),与患者性别、年龄、临床症状、β2微球蛋白水平、LDH水平、Ki-67无明显相关性;(3)NK/T细胞淋巴瘤组织中PD-L1、OX40L的表达呈负相关(r=-0.630,P<0.05);(4)PD-L1与NK/T细胞淋巴瘤的临床疗效呈负相关(r=-0.344,P<0.05),而OX40L与NK/T细胞淋巴瘤的临床疗效无相关性。结论PD-L1的高表达及OX40L的低表达可能参与NK/T细胞瘤的发展。PD-L1与临床疗效的相关性,进而说明PD-1/PD-L1信号通路可能成为NK/T细胞淋巴瘤免疫治疗的新靶点。

人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究

目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响。结果构建了GSTsOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性促进T细胞生长、增殖以及IL2的分泌。结论成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础。

OX40L在小鼠B16黑素瘤细胞中表达及对活化淋巴细胞凋亡影响

目的:构建OX40L的真核表达载体,分析其在B16细胞中的表达,研究OX40L对活化T淋巴细胞凋亡的影响。方法:以小鼠C57BL/6脾脏的cDNA为模板,PCR扩增小鼠OX40L基因,构建真核表达载体pVAX1-OX40L,转染B16细胞后,荧光染色检测OX40L的表达;利用AnnexinV-PE凋亡试剂盒,检测B16黑素瘤细胞-淋巴细胞体外混合培养中对活化淋巴细胞凋亡的影响。结果:成功构建OX40L的真核表达载体,并转染B16细胞中,流式细胞术和激光共聚焦显微术均可检测到OX40L表达于B16细胞表面。淋巴细胞体外混合培养显示,表达OX40L的B16细胞组活化淋巴细胞的凋亡率为6.57%,而空质粒转染组为17.24%。结论:OX40L能表达于B16细胞表面,并能显著抑制活化淋巴细胞凋亡。

复方辛夷滴鼻液对变应性鼻炎大鼠外周血中T-betmRNA、GATA-3mRNA、OX40LmRNA表达量的影响

目的:研究复方辛夷滴鼻液对变应性鼻炎大鼠外周血中T-betmRNA、GATA-3mRNA、OX40LmRNA表达量的影响。方法卵清蛋白(致敏原)+氢氧化铝(佐剂),制成OVA混悬液。将60只大鼠随机分为AR组(A组)、AR+复方辛夷滴鼻液治疗组(B组)、健康空白对照组(C组),每组20只。于基础致敏和局部激发后,观察大鼠行为,并记录症状体征积分,应用PCR法检测大鼠外周血中T-betmRNA、GATA-3mRNA、OX40LmRNA的表达。结果观察并记录大鼠症状体征,A组与C组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),表明AR大鼠造模成功。三组大鼠外周血中T-betmRNA的表达量A组(1.01±0.16)、B组(1.32±0.17)、C组(1.79±0.29),三组两两比较,差异有统计学意义(P<0.01);GATA-3mRNA的表达量:A组(1.01±0.16)、B组(0.43±0.05)、C组(0.31±0.04),B组与A、C组比较差异有统计学意义(P<0.01);OX40LmRNA的表达量为A组(1.01±0.17)、B组(0.35±0.04)、C组(0.30±0.05),A组与B组,A组与C组比较,P<0.01,差异有统计学意义。而B组与C组比较,P=0.051>0.05,差异无统计学意义。结论复方辛夷滴鼻液能够明显改善AR大鼠的过敏症状与体征,并且可以降低变应性鼻炎大鼠外周血中GATA-3mRNA和OX40LmRNA的相对表达量、升高外周血中T-betmRNA的表达量。

急性髓性白血病中CD40-CD40L与OX40的表达与Bcl-2和Bcl-x_L表达的相关性分析

目的:探讨在急性髓性白血病(AML)中,CD40、CD40L、OX40抗原的表达与白血病相关基因Bcl-2和Bcl-xL表达的相关性。方法:根据流式细胞仪检测结果将46例未经治疗的初诊急性髓性白血病患者分为四组:仅表达CD40的患者组(①组)、表达CD40+CD40L+OX40-的患者组(②组)、三种抗原全部表达组(③组)和全部不表达组(④组),利用RT-PCR方法检测46例患者骨髓单个核细胞Bcl-2、Bcl-xLmRNA的表达,利用SPSS统计软件分析。结果:①组、④组Bcl-2、Bcl-xL的表达水平低于②、③组的表达水平。结论:在CD40与CD40L同时表达时,可以提高白血病细胞Bcl-2和Bcl-xL的表达。

不同剂量阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者HO-1/HbCO系统、血清sOX40L水平影响及其与炎性因子的相关性分析

目的观察不同剂量阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征(ACS)患者血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/HbCO)系统、血清可溶性OX40L(sOX40L.)水平以及炎性因子的影响,分析HO-1/HbCO系统、sOX40L水平与炎性因子的相关性。方法选择2016年5月—2018年5月武汉科技大学附属普仁医院心内科收治ACS患者96例作为研究对象,按照随机数字法分为对照组和观察组,各48例。在常规治疗基础上,对照组患者给予阿托伐他汀20 mg/d治疗,观察组患者给予阿托伐他汀40 mg/d治疗,比较2组患者治疗前后血清sOX40L、HO-1、HbCO以及相关炎性细胞因子水平变化,采用Pearson法分析CRP、IL-6与HO-1/HbCO系统、sOX40L水平的相关性。结果与治疗前比较,2组患者治疗后sOX40L水平均明显降低,HO-1、HbCO水平均明显升高,且观察组降低/升高较对照组为更显著(t/P=4.537/0.000, 6. 154/0.000,8.236/0.000;CRP、IL-6、TC、LDL-C水平均明显降低(t/P=3.405/0. 000,12. 252/0. 000,6.263/0.000,9.777/0.000)。sOX40L水平与CRP、IL-6水平呈正相关(r/P=0.781/0.005,0. 537/0.014), HO-1、HbCO水平与CRP、IL-6水平呈负相关(r/P=-0.217/0.017,-0.359/0.001,-0.189/0.031,-0.523/0.000)。结论大剂量阿托伐他汀治疗急性冠状动脉综合征患者效果更佳,其血清CRP、IL-6水平与sOX40L水平呈正相关,与HO-1以及HbCO水平呈负相关,具有一定的临床应用价值。

2型糖尿病合并急性脑梗死患者的HbA1c水平与血清sOX40L、IL-17及预后的相关性

目的探讨2型糖尿病(T2DM)合并急性脑梗死(ACI)患者的糖化血红蛋白(HbA1c)水平与人血清可溶性OX40配体(sOX40L)、白细胞介素-17(IL-17)及其预后的相关性。方法回顾性纳入汤阴县人民医院2019年4月至2021年8月收诊的45例T2DM合并ACI患者(A组)和45例单纯T2DM患者(B组),选择同期40例健康体检者纳入C组。按照斑块性质,将A组再分为A1组(29例,不稳定斑块)和A2组(16例,稳定斑块)。比较A、B、C 3组的一般资料、血清sOX40L水平、IL-17水平、斑块指数(Crouse积分)、内-中膜厚度(IMT),比较A1、A2组血清sOX40L、IL-17水平,分析A组血清sOX40L、IL-17与HbA1c、Crouse积分、IMT的相关性。结果A、B、C 3组年龄、饮酒史、吸烟史、舒张压(DBP)水平、体质量指数(BMI)水平、总胆固醇(TC)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组HbA1c水平高于B组,B组HbA1c水平高于C组(P<0.05);A组血清sOX40L及IL-17水平高于B组,B组血清sOX40L及IL-17水平高于C组(P<0.05);A组Crouse积分和IMT高于B组(P<0.05);A组颈动脉斑块数中不稳定斑块率高于B组(P<0.05);A1组血清sOX40L及IL-17水平高于A2组(P<0.05)。经直线相关性分析,A组患者的血清sOX40L水平与HbA1c、Crouse积分、IMT呈正相关(P<0.05),IL-17水平与HbA1c、Crouse积分、IMT也呈正相关(P<0.05)。结论血清sOX40L、IL-17水平能反映T2DM合并ACI患者的血糖水平以及颈动脉粥样斑块性质,具有良好的预后指导意义,临床可基于此做好对症干预工作。

OX40L在C57BL/6与BALB/c小鼠组织的差异性表达及分析

背景:有研究发现C57BL/6小鼠对动脉粥样硬化易感,而BALB/c小鼠却对动脉粥样硬化不易感。OX40L的表达情况与动脉粥样硬化的狭窄程度和心肌梗死的严重度相关,其在两种品系小鼠中是否存在表达差异?目的:分析OX40L在BALB/c和C57BL/6小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织的表达差异。方法:取C57BL/6和BALB/c小鼠心脏、大脑、肾脏、骨骼肌和脾脏组织,以Trizol提取总RNA,RIPABuffer提取组织总蛋白。采用RT-PCR和WesternBlot方法检测两种品系小鼠心脏、脑、肾脏、脾脏和骨骼肌的OX40LmRNA和蛋白的表达。OX40L在两种品系小鼠不同器官间的表达差异。结果与结论:RT-PCR结果显示,C57BL/6小鼠心脏OX40LmRNA表达显著高于BALB/c小鼠(P<0.05),脾脏OX40LmRNA表达明显低于BALB/c小鼠(P<0.05),两种品系小鼠大脑、肾脏及骨骼肌OX40LmRNA表达差异无显著性意义;WesternBlot结果显示,两种品系小鼠OX40L的蛋白表达均在心脏最高;C57BL/6小鼠心、脑及肾OX40L蛋白表达均显著高于BALB/c小鼠(P<0.05),两种品系小鼠骨骼肌和脾脏OX40L蛋白表达差异无显著性意义。两个品系小鼠OX40LmRNA的表达水平与蛋白表达水平不完全一致。C57BL/6小鼠心脏中OX40LmRNA转录水平较BALB/c高,但在脾脏中表达量较后者低;C57BL/6小鼠心脏、大脑和肾脏OX40L蛋白水平均较BALB/c小鼠高;两种品系小鼠之间的表达差异提示OX40L可能与C57BL/6小鼠易感动脉粥样硬化有关。

麻黄碱介导TSLP/OX40L通路调节变应性鼻炎大鼠Th2型免疫反应的作用研究

目的:探讨麻黄碱对卵白蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎大鼠Th2型免疫反应的抑制作用及可能机制。方法:将雌性SD大鼠随机分为4组,对照组、模型组、麻黄碱组(10 mg/kg)和氯雷他定组(2 mg/kg),每组10只。通过OVA诱导变应性鼻炎大鼠模型,并使用药物连续治疗7 d。治疗后,对大鼠进行鼻部症状评分,ELISA法检测大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、IL-4和IL-13水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠鼻腔组织形态,qRT-PCR和Western blot检测大鼠鼻黏膜组织TSLP和OX40L的mRNA和蛋白表达,免疫组织化学分析鼻黏膜组织中环氧合酶2(COX2)的表达。结果:与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组的鼻部症状评分显著降低,鼻腔组织病变明显减轻,COX2阳性细胞率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组大鼠血清中IgE、IL-4和IL-13水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,麻黄碱组和氯雷他定组大鼠鼻黏膜组织中TSLP和OX40L的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:麻黄碱对OVA诱导的变应性鼻炎大鼠具有良好的治疗作用,麻黄碱可能通过TSLP/OX40L通路调节变应性鼻炎大鼠Th2型免疫应答,从而发挥治疗作用。

转染人OX40L细胞株的构建及其对T细胞共刺激作用的研究

为了构建稳定表达人OX4 0L基因的L92 9细胞株 ,初步研究OX4 0L信号通路对T细胞的共刺激效应。TRIzol一步法抽提人成熟DC总RNA ,RT PCR扩增出OX4 0L基因 ,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ Term ,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,用其培养上清感染L92 9细胞 72h后 ,经Zeocin筛选出稳定表达OX4 0L分子的L92 9细胞株 ;采用3 H TdR掺入实验、细胞凋亡、细胞周期等方法研究OX4 0L信号对T细胞体外培养的共刺激作用。结果显示 ,成功地构建了含OX4 0L基因的重组逆转录病毒载体 ;经转染包装细胞 2 93T后 ,筛选获得能稳定高表达人OX4 0L蛋白的L92 9转基因细胞 ;OX4 0L转基因细胞对体外培养的T细胞具有促增殖、活化和抗凋亡的作用 ;同时 ,OX4 0 /OX4 0L信号与CD2

OX40/OX40L信号与自身免疫性疾病

1 OX40/OX40L在免疫应答中的作用 1.1 OX40与OX40L的生物学特征OX40（CD134）是TNFR超家族成员之一,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,相对分子质量约为48～50 kD[1]。人的OX40基因位于第1号染色体上,并与其他TNF受体家族成员如CD30、4—1BB、TNFR-Ⅱ和DR3成簇排列在人染色体lp36的远侧带。

紫草素对特应性皮炎小鼠TSLP/OX40L通路及Th1/Th2平衡的影响

目的探究紫草素对特应性皮炎(AD)小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)/OX40配体(OX40L)通路及辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡的影响。方法采用局部外涂2,4-二硝基氟苯(DNFB)法制备AD小鼠模型。采用随机数字表法将模型小鼠分为模型组,紫草素低(20 mg/kg)、中(30 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组和阳性对照组(泼尼松龙,10 mg/kg),每组15只;另取15只作为正常对照组。各给药组大鼠按10 mL/kg灌胃相应药物,模型组和正常对照组灌胃等体积溶剂,每日1次,连续15 d。分别于给药后第5、10和15天观察小鼠搔抓行为;于给药后第7、15天评价小鼠皮损状况;末次给药结束后,HE染色观察小鼠皮损组织病理学变化;流式细胞术检测小鼠外周血中Th1/Th2比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中TSLP、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-4和干扰素(IFN)-γ水平;Western blot法检测小鼠皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组小鼠搔抓行为增加,皮肤炎性损伤加重;皮损组织中表皮和真皮区域均有密集的炎性细胞浸润,表皮增厚;外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平显著升高(P<0.05),外周血Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平显著下降(P<0.05)。与模型组相比,紫草素低、中、高剂量组小鼠第5、10、15天的搔抓行为减少,第7、15天皮肤炎性损伤依次减轻(P<0.05);小鼠表皮和真皮区域炎性细胞浸润和表皮增厚依次减轻,外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平依次降低(P<0.05),Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平依次升高(P<0.05)。结论紫草素可能通过抑制TSLP/OX40L通路维持AD小鼠外周血中Th1/Th2平衡,改善皮肤炎性损伤。

OX40和OX40L在原发性干燥综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的检测原发性干燥综合征(pSS)患者外周血单个核细胞表面共刺激分子OX40和OX40L的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫荧光标记流式细胞技术检测51例pSS患者及36例健康志愿者外周血T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L分子表达,比较11例初诊pSS患者治疗前后OX40和OX40L表达水平变化,分析其临床意义。结果与健康志愿者相比,pSS患者外周血CD4+T细胞表面OX40表达显著增高(8.65%±3.51%vs 5.68%±1.68%,P<0.01),而CD8+T细胞表面OX40的表达无统计学差异。pSS患者表面OX40L的表达,在外周血中CD14+单核细胞(6.76%±3.60%vs 3.15%±1.89%,P<0.01)和CD19+B细胞(4.69%±2.40%vs 2.76%±1.33%,P<0.01)中均高于健康志愿者。活动期的pSS患者外周血OX40和OX40L的表达高于非活动期患者,伴发多系统损伤pSS患者外周血OX40和OX40L分子的表达显著高于单纯外分泌腺损伤患者。治疗后CD4+T细胞表面OX40的表达及CD14+单核细胞和CD19+B细胞表面OX40L的表达显著下降。结论 pSS患者外周血单个核细胞表面OX40和OX40L异常高表达,且与疾病活动度、组织损伤及治疗密切相关。

甲氧基聚乙二醇衍生物与抗OX40L单抗双诱导移植物免疫耐受

背景:甲氧基聚乙二醇可在淋巴细胞表面形成空间位阻而遮蔽T细胞表面抗原;OX40及其配体OX40L是一对重要的协同刺激信号分子,阻断该信号通路可使T细胞处于无反应性的失能状态,诱导免疫耐受。目的:为获得更为理想的免疫耐受状态,检测甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(methoxy-polyethyleneglycol-succinimidyl-propionicacidester,mPEG-SPA)化学修饰联合抗OX40L单抗对移植物T淋巴细胞增殖、表型及分泌细胞因子的影响。设计、时间及地点:对比观察移植物免疫耐受体外实验,于2006-12/2007-06在徐州医学院附属医院血液病研究室完成。材料:清洁级近交系C57BL/6(H-2b)雄性和BALB/c(H-2d)雌性成年小鼠各12只,制备的脾淋巴细胞分别作为反应细胞和刺激细胞。mPEG-SPA为北京凯正公司产品,大鼠抗小鼠OX40L单抗为eBioscience公司产品。方法:将反应细胞密度调整为4×109L-1,分别加入3,6,12,15,18g/LmPEG-SPA修饰1h,以加入相同体积的磷酸盐缓冲液作空白对照;另向反应细胞中加入15g/LmPEG-SPA分别修饰1h,24h,48h,96h,120h,流式细胞仪检测脾淋巴细胞表面CD3分子的表达。单向混合淋巴细胞培养分4组:细胞对照组,单纯加入刺激细胞+反应细胞;抗OX40L单抗组,向两种细胞中加入10mg/L抗OX40L单抗;mPEG-SPA组,向两种细胞中加入15g/LmPEG-SPA;联合组,向两种细胞中加入抗OX40L单抗和mPEG-SPA。主要观察指标:CD3分子的表达水平,其反映mPEG-SPA遮蔽脾淋巴细胞的效果。淋巴细胞增殖情况与表型分析。培养上清细胞因子含量。结果:①不同浓度mPEG-SPA修饰后淋巴细胞表面CD3分子的表达均明显低于空白对照,且15,18g/LmPEG-SPA降低幅度尤为明显(P<0.05);15g/LmPEG-SPA修饰不同时间后CD3分子的表达无变化(F=1.715,P>0.05)。与细胞对照组比较,抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组对淋巴细胞的增殖抑制率均明显升高,联合组抑制效果最强(P<0.01);抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组T细胞表型CD4+CD25+/CD8+CD25+比值无明显变化(P>0.05),联合组明显降低(P<0.05)。抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组γ-干扰素含量均明显低于细胞对照组,且联合组降低幅度更为显著(P<0.05);联合组白细胞介素4含量明显高于细胞对照组(P<0.05)。结论:甲氧基聚乙二醇衍生物可明显遮蔽淋巴细胞表面抗原,且对抗原的遮蔽作用较持久;其与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,抑制T细胞的增殖活性,使Th0类细胞向Th2类细胞偏离。

滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L免疫调节作用的影响

目的:研究滋水清肝饮加减方对2型糖尿病患者正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用的影响。方法:随机抽取2016年1月—2017年3月本院收治的90例2型糖尿病患者,依据治疗措施差异分作两组,各45例,对照组施予甘精胰岛素治疗,于此基础,观察组施予滋水清肝饮加减方治疗,比较两组正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L。结果:治疗后,(1)在B细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.71±0.04)%,OX40/OX40L(6.05±0.83)%,分别比对照组的(2.11±0.37)%及(11.58±2.10)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)在CD4+T细胞上,观察组ICOS/ICOSL表达(0.61±0.01)%,OX40/OX40L(0.30±0.03)%,分别比对照组的(1.60±0.17)%及(1.13±0.20)%低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)对于合并大血管病变者,观察组B细胞、CD4+T细胞上的ICOS/ICOSL、OX40/OX40L表达均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);(4)观察组血糖及总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、糖化血清蛋白(Glucosylated serum protein,GSP)水平均比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:于2型糖尿病患者中施予滋水清肝饮加减方治疗有助于改善正性共刺激分子ICOS/ICOSL、OX40/OX40L的免疫调节作用,促进合并大血管病变者转归,值得推广。

过敏性紫癜患儿急性期外周血OX40/OX40L的表达及意义

目的探讨共刺激分子OX40/OX40L在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其在过敏性紫癜发病机制中的作用及临床意义。方法选取首次住院的34例HSP患儿作为观察组,另20例健康体检儿童作为对照组。采集分离PBMC,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测OX40、OX40L mRNA的表达,并分析其与24 h尿微量白蛋白(24 h UMA)的相关性。结果 HSP患儿OX40、OX40L mRNA的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01)。24 h UMA增高的HSP患儿OX40、OX40L mRNA的表达均高于24 h UMA正常者,差异均有统计学意义(P均<0.05),且均与24 h UMA呈正相关(P<0.05)。结论过敏性紫癜患儿PBMC的OX40、OX40L mRNA表达有异常增高并与24 h UMA相关。提示OX40、OX40L可能参与了过敏性紫癜的发病,其或许可以作为监测HSP患儿病情及检测早期肾脏损害的免疫学指标。

血清OX40L水平与冠状动脉病变程度的相关性研究

目的探讨血清OX40配体蛋白(OX40L)水平与冠状动脉病变程度的相关性。方法选取冠脉造影检查者共458例作为研究对象,根据冠脉病变支数,分为1支病变组、2支病变组、3支病变组和冠脉造影正常的对照组(0支病变组),冠状动脉病变程度由冠状动脉病变支数和Gensini积分表示,对OX40L水平与冠脉病变程度进行单因素和多因素分析。结果①冠状动脉病变各组OX40L水平显著高于正常对照组(P<0.05或P<0.01),血清OX40L水平与冠状动脉病变程度和Gensini积分呈正相关(P<0.01)。②多元逐步回归分析结果显示在校正了年龄、高血压病史和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)后,血清OX40L水平与冠状动脉病变总积分(r=4.763,P<O.01)仍然独立相关,随着血清OX40L水平的升高,冠脉病变支数增加。结论冠心病(CAD)患者的血浆OX40L水平与冠脉病变程度密切相关,可能对冠心病有预测和诊断意义。