脑缺血时半乳糖凝集素-3对大鼠脑皮质中bcl-2、BAX及caspase-3表达的影响

目的通过脑缺血/再灌注损伤模型,测定脑缺血时半乳糖凝集素-3(Gal-3)对B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达的影响,从而为脑缺血的发病机制提供一定的实验依据。方法雄性SD大鼠18只,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血1.5 h,再灌注至24 h。采用随机分组法分为假手术组(sham)、缺血/再灌注组(I/R)和Gal-3 RNA干扰组(siRNA)。采用real-time PCR及western blot检测大鼠脑皮质中Gal-3、bcl-2、BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达变化。结果大鼠脑缺血/再灌注损伤后,脑皮质中Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.38、0.47和1.310、1.299;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.41、1.55及1.076、1.155。而Gal-3 RNA干扰后,Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.24、0.14及1.014、1.058;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.76、1.88及1.480、1.515。结论 Gal-3可能通过上调bcl-2、下调caspase-3及BAX mRNA及蛋白的表达,参与脑缺血/再灌注损伤的病理过程。

绿原酸通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨绿原酸(CGA)对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及对Bcl-2相关X蛋白(Bax)/B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)信号通路的影响。方法:分别用含有0、250、500、750和1 000μmol/L的CGA培养液处理喉癌Hep-2细胞24、48 h,寻找出最适宜CGA的浓度和处理时间;将喉癌Hep-2细胞分为对照组(正常培养的喉癌Hep-2细胞)、CGA低浓度组(750μmol/L CGA培养液)、CGA高浓度组(1 000μmol/L CGA培养液)和CGA高浓度+通路抑制剂组(1 000μmol/L CGA培养液+50μmol/L Bax/Bcl-2/Caspase-3通路抑制剂Bax inhibitor peptide V5)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定喉癌Hep-2细胞增殖抑制率,通过流式细胞仪检测喉癌Hep-2细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法检测喉癌Hep-2细胞中增殖相关蛋白(ki-67)、凋亡相关蛋白(p53)及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,CGA低、高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著升高,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且CGA高浓度组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平高于CGA低浓度组,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平低于CGA低浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CGA高浓度组相比,CGA高浓度+通路抑制剂组喉癌Hep-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率,p53、Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著降低,ki-67、Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CGA可显著抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并促进其凋亡,可能与Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。

大鼠自发性乳腺肿瘤中Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

通过130只(雌雄对半)Sprague-Dawley(SD)大鼠进行自发性乳腺肿瘤造模,并研究自发产生的乳腺肿瘤组织的病理变化及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)在乳腺肿瘤中的蛋白和m RNA表达变化。造模结果显示共有14只雌性大鼠发生乳腺肿瘤,对总体而言肿瘤的发病率为10.77%(14/130);由于雄性大鼠未见乳腺肿瘤,在雌性大鼠中肿瘤的发病率为21.54%(14/65)。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色病理切片观察确定肿瘤分型分别为乳腺纤维腺瘤7例,乳腺腺癌3例,乳腺乳头状癌2例,乳腺浸润性导管癌2例。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果显示,对照组(n=5)Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达量分别为9.75±0.04、8.13±0.35和6.60±0.04,而这3个因子在良性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为8.16±0.16、9.14±0.22和4.43±0.1。另外,其在恶性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为6.49±0.32、9.24±0.81和3.03±0.10,与对照组相比,Bax和Caspase-3在病变组的表达极显著减少(P<0.01),而Bcl-2在病变组中的表达与对照组相比也显著增加(P<0.05),且正常对照组Bcl-2/Bax比值小于1,而在良性组和恶性组则均大于1。荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)结果通过相对定量计算显示,Bax、Bcl-2和Caspase-3在各组中的m RNA的表达量变化与蛋白表达一致,相比差异有高度统计学意义(P<0.01)。综上所述,自发性乳腺肿瘤在雌性大鼠中的发病率较高,且病变类型多样,而雄性发病率为0;且Bcl-2、Bax和Caspase-3与大鼠自发性乳腺肿瘤的发生有着密切的联系,从而为临床乳腺肿瘤的诊断、治疗和预后提供了新的思考方向。

菟丝子总黄酮对小鼠睾丸间质细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响

背景研究表明睾丸间质细胞的凋亡是造成男性不育的重要因素之一,而菟丝子总黄酮(total flavonoids from semen cuscutae,TFSC)具有抗凋亡、抗炎等药理活性,并在治疗男性不育方面有一定疗效。目的 观察菟丝子总黄酮对小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)凋亡的影响并探究其可能作用机制。方法 体外培养TM3细胞,将其分为对照组(不含药物的完全培养基)、模型组[35μmol/L丙烯醛(acrolein,ACR)]、TFSC低剂量组(100μg/m L)、TFSC中剂量组(200μg/m L)、TFSC高剂量组(400μg/m L)。采用CCK-8法筛选ACR的半数致死量和TFSC的作用剂量。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况、Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果 TFSC浓度为100、200、400、600μg/m L时明显促进TM3细胞增殖(P<0.05);ACR浓度为33.97μmol/L时,达到细胞半数致死量。与模型组比较,TFSC中、高剂量组可提高细胞存活率(P<0.05)。流式结果显示,与模型组相比,TFSC中、高剂量组细胞凋亡明显减少。Western blotting结果显示,与模型组比较,TFSC低、中、高剂量组Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05),TFSC中、高剂量组Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 TFSC能够促进TM3细胞的增殖,抑制TM3细胞的凋亡,其机制可能是通过降低凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达以及升高抗凋亡的蛋白Bcl-2的表达来改善抗凋亡与促凋亡蛋白之间的失衡。

补肾活血方对慢性肾衰竭大鼠氧化应激、PI3K/Akt、Bcl-2/Bax的影响

【目的】探讨补肾活血方对慢性肾衰竭大鼠的治疗作用及机制。【方法】将40只SD大鼠分为正常组(10只)、模型组(9只)、补肾活血方低剂量组(10只)和补肾活血方高剂量组(10只)。除正常组外,其他组别大鼠采用腺嘌呤灌胃法复制慢性肾衰竭模型。造模成功后,补肾活血方低、高剂量组大鼠分别给予0.52、2.08 g/kg补肾活血方药液灌胃,每日1次,连续给药28 d。给药结束后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肾功能指标尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和尿酸(UA)水平及肾组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肾组织病理学变化,Western Blot法检测肾组织磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。【结果】(1)与正常组比较,模型组BUN、SCr、UA水平均上升(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组BUN、SCr、UA水平均显著下降(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组MAD水平上升,SOD水平下降(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组MAD水平下降,SOD水平上升(P<0.05);(3)与正常组比较,模型组肾组织中出现轻度坏死和炎性细胞浸润,肾小管扩张,肾小球变形等病理学变化;与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组肾组织病理情况均有改善。(4)与正常组比较,模型组大鼠肾组织PI3K、Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组大鼠肾组织PI3K、Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。(5)与正常组比较,模型组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平上升(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达水平上升,Bax蛋白表达水平下降(P<0.05)。【结论】补肾活血方能够改善慢性肾衰竭大鼠肾脏损伤,其机制与减轻氧化应激、抑制PI3K/Akt信号通路、调控凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达有关。

丹参酮IIA对神经性痛大鼠脊髓背角Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨丹参酮IIA的镇痛机制,研究其对慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠被分为假手术组和模型组,假手术组仅暴露实验大鼠右侧坐骨神经干不予结扎,模型组结扎实验大鼠右侧坐骨神经干,生理盐水组是在模型组大鼠鞘内注射生理盐水,处理组是在模型组大鼠鞘内注射丹参酮IIA,检测各组大鼠机械痛阈和热痛阈,采用免疫荧光组织化学检测各组大鼠脊髓背角内Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白和Bax蛋白的表达。结果:假手术组大鼠的热痛阈和机械痛阈较高,脊髓背角内仅有少量的Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达;与之比较生理盐水组大鼠的热痛阈和机械痛阈降低,Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表达增多,Bcl-2/Bax比值减小,说明大鼠模型制备成功可以进行后续实验;与生理盐水组比较,处理组脊髓背角内Bcl-2蛋白的表达增多,但Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表达下降,Bcl-2/Bax比值增大,处理组热痛阈和机械痛阈升高。结论:该研究中丹参酮IIA的镇痛作用可能与脊髓背角内Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白的增多以及Bax蛋白的降低有关。

卡马西平片联合苯巴比妥治疗对癫痫患者IL-1β、IL-6、Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察分析卡马西平片联合苯巴比妥治疗对癫痫患者白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、抑制神经元凋亡因子(Bcl-2)、神经元凋亡因子(Bax)表达的影响。方法选取2015年1月至2016年9月于长沙市中心医院就诊的癫痫患者94例,采用随机数表法均分为观察组(n=47)与对照组(n=47),对照组患者给予卡马西平片治疗,观察组患者在此基础上联合苯巴比妥治疗,观察两组患者的临床疗效、焦虑抑郁程度、认知功能、癫痫发作次数、癫痫积分及IL-1β、IL-6、Bax、Bcl-2。结果观察组患者的治疗总有效率(89.36%)、MoCA评分[(26.54±2.21)分]、IL-6[(217.54±15.71)pg/mL]、Bcl-2[(35.78±3.64)pg/mL]明显高于对照组[76.60%、(21.27±2.15)分、(176.651±14.45)pg/mL、(29.97±3.14)pg/mL],差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组的癫痫发作次数[(2.27±0.22)次/月]、癫痫积分[(2.27±0.22)分]、HAD评分[(2.32±0.95)分]、IL-1β(140.72±16.18)pg/mL、Bax(21.52±1.29)pg/mL明显低于对照组[(3.51±0.25)次/月、(6.34±0.83)分、(5.34±1.04)分、(169.67±17.86)pg/mL、(26.49±1.62)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论马西平片联合苯巴比妥治疗能够减少患者神经细胞损伤,改善患者的焦虑、抑郁程度及认知功能,减少癫痫发作次数,临床疗效显著。

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

山慈菇通过PI3K/Akt信号通路影响乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡

目的:研究山慈菇是否通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路影响乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡。方法:将MDA-MB-231细胞分为对照组(C组)、山慈菇组(CAM组)、胰岛素生长因子1组(IGF-1组)、山慈菇+胰岛素生长因子1组(CAM+IGF-1组)。C组不加药物处理,CAM组加入10 mg/ml山慈菇处理,IGF-1组加入100μg/L IGF-1处理,CAM+IGF-1组加入10 mg/ml山慈菇和100μg/L IGF-1共处理。噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖,流式细胞仪和Hoechst 33258染色测定细胞凋亡,Western blot法测定细胞活化的半胱天冬氨酸3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B-细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、p-Akt蛋白水平。结果:山慈菇抑制MDA-MB-231细胞增殖呈剂量和时间依赖性。与C组比较,CAM组MDA-MB-231细胞OD值降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平降低(P<0.05);与CAM组比较,CAM+IGF-1组MDA-MB-231细胞OD值升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白水平升高(P<0.05)。结论:山慈菇抑制乳腺癌细胞增殖、诱导乳腺癌细胞凋亡,其机制可能与山慈菇抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。

清心开窍方有效成分对AD大鼠学习记忆能力及其海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3和βAPP表达的影响

目的探讨清心开窍方中皂苷、挥发油及多糖有效成分对淀粉样蛋白(Aβ)1-40海马注射诱导痴呆(Alzheimer's disease,AD)大鼠海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3及βAPP表达的影响。方法选取112只雄性SD大鼠,随机分为7组,每组16只,分别为正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组、多糖组。采用海马注射Aβ_(1-40)诱导AD大鼠模型。造模后第2天开始灌胃,正常组、假手术组、模型组给予等量双蒸水灌胃,安理申组[盐酸多奈哌齐片,1.67 mg/(kg·d)]、皂苷组[9 m L/(kg·d)]、挥发油组[3.33 m L/(kg·d)]、多糖组[8.33 m L/(kg·d)]灌胃,每天1次,连续2周(上午10:00)。灌胃结束后,采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力;采用TUNEL染色检测海马CA1区细胞凋亡;采用免疫组化、实时定量荧光PCR及WB法检测AD大鼠海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3及βAPP表达。结果造模前各组大鼠同一时间点的逃避潜伏期、穿台次数比较,差异均无统计学意义(P>0.05),且逃避潜伏期随时间推移逐渐缩短。造模后,与模型组比较,除挥发油组、多糖组外,安理申组、皂苷组逃避潜伏期均缩短,穿台次数显著增多(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,皂苷组、挥发油组、多糖组大鼠海马CA1区凋亡细胞数量明显减少(P<0.05,P<0.01);Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、βAPP表达下调,Bcl-2/Bax比值明显提高(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方3种有效成分能不同程度地改善AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与降低海马区Bax、Caspase-3及βAPP表达,提高Bcl-2表达,抑制AD大鼠海马区内细胞凋亡有关。

帕瑞昔布钠对痫性发作大鼠海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的研究帕瑞昔布钠对痫性发作大鼠海马神经元凋亡及B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、caspase-3蛋白表达的影响。方法30只SD大鼠采用数字随机表法分为3组（n=10）：帕瑞昔布钠组和致痫组大鼠分别以4mg／kg帕瑞昔布钠和等体积生理盐水腹腔注射处理3d后，腹腔注射3mmoL／kg新鲜配制的氯化锂，20h后腹腔注射30mg／kg盐酸匹罗卡品；对照组予腹腔注射与4mg／kg帕瑞昔布钠等体积的生理盐水，不造模。观察3组大鼠行为学变化；造模7d后取材，TUNEL染色评价神经元凋亡情况；Western blotting检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平。结果所有致痫大鼠均非常易激惹，帕瑞昔布钠组自发性痫性发作（SRS）次数比致痫组明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，致痫组大鼠海马Bcl-2、Bax、caspase-3表达水平增加，Bcl-2／Bax比值升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。与致痫组比较，帕瑞昔布钠组大鼠海马Bcl-2、Bax、caspase-3表达水平降低，Bcl-2／BaX比值降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较，帕瑞昔布钠组及致痫组大鼠海马TUNEL阳性细胞数均增多，差异有统计学意义（P〈0．05）；与致痫组比较，帕瑞昔布钠组大鼠海马TUNEL阳性细胞数降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论帕瑞昔布钠能减少海马神经元凋亡，抑制Bax、caspase-3蛋白的表达，影响Bcl-2蛋白的表达。其机制可能与帕瑞昔布钠作用于Bcl-2／Bax和caspase-3凋亡通路相关。

对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响。方法:选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L^(-1),另设置仅添加10%胎牛血清作为空白组。采用噻唑蓝(MTT)比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测3种凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3的表达。结果:对叶百部总生物碱可抑制SMMC-7721细胞增殖,与空白组比较,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),作用24,48,72 h的50%细胞抑制浓度(IC_(50))分别为(173.36±8.75),(112.14±16.50),(96.41±2.60)mg·L^(-1),细胞集落形成抑制率显著升高(P<0.01),存在浓度依赖性。与空白组比较,对叶百部总生物碱可促进细胞凋亡,SMMC-7721细胞凋亡数目和凋亡率显著增加(P<0.01),在荧光正置显微镜下可观察到典型细胞凋亡形态,如亮蓝色细胞核染色,细胞质浓缩和细胞核固缩等。与空白组比较,抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调(P<0.01);与空白组比较,对叶百部总生物碱75,112,167,250 mg·L^(-1)促凋亡蛋白Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:对叶百部总生物碱有很好的抑制SMMC-7721细胞增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达和促进Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达有关。

补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2及切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨其抑制骨质破坏的作用机制。方法:将30只BALB/c雌性裸鼠随机分成空白组6只、造模组24只。将乳腺癌细胞株4T1经裸鼠右下肢胫骨注射构建乳腺癌骨转移模型,将成膜裸鼠随机分为模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组,每组6只。补肾活血汤组予以补肾活血汤中药灌胃36.67 g·kg^(-1),每日1次,唑来膦酸组予以皮下注射100μg·kg^(-1),每周2次,联合用药组给予相同剂量补肾活血汤组灌胃联合唑来膦酸皮下注射,正常组和模型组予以等体积蒸馏水灌胃,连续14 d,次日脊柱脱臼法处死,观察裸鼠一般情况及体质量变化,截取每组裸鼠右下肢,称重,X射线扫描及苏木素-伊红(HE)染色观察裸鼠骨组织形态学变化、原位末端标记法(TUNEL)检测裸鼠骨组织凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裸鼠骨组织中Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组第5~15天裸鼠体质量显著减轻(P<0.01),右下肢组织质量显著增加(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组第10~15天裸鼠体质量显著增加(P<0.01),右下肢组织质量显著降低(P<0.01)。HE染色显示与空白组比较,模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠肿瘤细胞异型性明显,核染色深,骨转移明确。X射线扫描示与空白组比较,模型组裸鼠右下肢出现明显溶骨性破坏,胫骨近段、膝关节完整结构基本丧失,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组右下肢溶骨性病变明显减少,部分结构完整,对骨质破坏具有抑制作用。TUNEL染色显示与空白组比较,模型组骨转移瘤细胞凋亡率降低,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠骨转移瘤中细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。Western blot显示,与空白组比较,模型组骨转移瘤中Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组骨转移瘤Bax蛋白含量明显升高(P<0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾活血汤组对乳腺癌骨转移模型裸鼠具有抑制骨质破坏作用,其机制可能和上调Bax,下调Bcl-2,激活cleaved Caspase-3诱导细胞凋亡相关。

壁虎多肽混合物对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨壁虎多肽混合物(GPM)对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖和凋亡的影响。方法实验设正常对照组(等体积基础培养液)和GPM高、低剂量组(20,10 mg/mL),采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法和免疫印迹(Western blot)法检测B-细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)mRNA及蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,GPM高、低剂量组H1299细胞存活率均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01),PI3K和Bax mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论GPM能抑制H1299细胞的增殖,其作用机制可能与调控PI3K,Bax,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达相关。

健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及Caspase-3,Bcl-xL,Bax蛋白表达的影响

目的：观察健脾消癌方及其拆方对肠癌模型裸鼠体质量、瘤体、转移率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-x L（B-cell lymphoma/leukemia-x L,Bcl-x L）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达的影响。方法：建立裸鼠肠癌原位瘤模型,分为模型组,健脾益气组（15 g·kg-1）,化瘀解毒组（15 g·kg-1）,健脾消癌方组（全方组,15 g·kg-1）,5-氟尿嘧啶组（5-Fu,20 mg·kg-1）,共5组。分别予以相应药物干预4周,观察裸鼠体重、瘤体抑制率、转移率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Caspase-3,Bcl-x L,Bax蛋白表达。结果：健脾益气组、全方组体重下降低于模型组（P〈0.05）,化瘀解毒组体重下降高于模型组（P〈0.05）;健脾益气组对瘤体的抑制与模型组比较无统计学差异,与空白组比较,化瘀解毒组、全方组对瘤体均有较好抑制作用（P〈0.05）;各组均出现不同程度地转移,其中模型组、健脾益气组总体转移率达90%,化瘀解毒组、全方组转移率分别为70%,60%,低于模型组（P〈0.05）;与模型组比较,化瘀解毒组及全方组能够上调Bax蛋白表达,下调Caspase-3,Bcl-x L蛋白表达（P〈0.01）。结论：健脾消癌方中健脾益气组优势在于稳定体重,化瘀解毒组优势在于抑制肿瘤,抑制转移;全方组能够稳定体质量,抑制肿瘤,抑制转移,全方配伍疗效最优,其抗肿瘤机制可能是上调凋亡相关蛋白Bax及下调Caspase-3,Bcl-x L,诱导肿瘤细胞凋亡。

甘草酸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及Bcl-2和Bax表达的影响

目的：观察甘草酸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）的保护作用及B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达的影响,探讨其可能机制。方法：50只SD大鼠随机分为假手术组,心肌缺血再灌注损伤组（模型组）,甘草酸预处理低、中、高剂量组。采用结扎左冠状动脉前降支建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组穿线后不结扎;模型组于缺血前30 min腹腔注射2 mg·kg-1生理盐水;甘草酸低、中、高剂量组于缺血前30 min腹腔注射2,4,10 mg·kg-1甘草酸。光镜下观察心肌组织的病理组织学变化;检测肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性,乳酸脱氢酶（LDH）活性,心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）水平,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,白细胞介素-6（IL-6）水平,髓过氧化物酶（MPO）活性,超氧化物歧化酶（SOD）活性,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,丙二醛（MDA）水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡指数;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌Bcl-2和Bax的表达。结果：与模型组比较,甘草酸预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组明显减轻心肌缺血再灌注损伤;与模型组比较,甘草酸预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组显著降低CKMB,LDH,c Tn T,TNF-α,IL-6,MPO,MDA水平,显著升高SOD,GSH-Px活性（P〈0.05,P〈0.01）;与模型组比较,甘草酸预处理低剂量组,中剂量组,高剂量组显著降低心肌细胞凋亡指数（P〈0.01）;与模型组比较,甘草酸预处理低、中、高剂量组显著上调心肌Bcl-2表达,下调Bax表达及上调Bcl-2/Bax（P〈0.05,P〈0.01）。结论：甘草酸预对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,且能上调心肌Bcl-2表达和下调心肌Bax表达,从而抑制细胞心肌凋亡。

红芪多糖对高糖培养下雪旺细胞Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的:通过观察红芪多糖(HPS)对高糖培养下雪旺细胞(SCs)B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)信号通路的影响,探讨HPS在治疗糖尿病周围神经病变(DPN)过程中可能的作用机制。方法:选取出生5~7 d的SD乳鼠4只,随机分为正常组、高糖组、HPS+高糖组、α-硫辛酸(α-LA)+高糖组,从坐骨神经部位提取SCs,放入37℃,5%CO_(2)培养箱中培养,待细胞达整瓶的80%后,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛适宜高糖,HPS及α-LA干预的实验浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与mRNA的表达情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法流式细胞术检测各组SCs的凋亡率。结果:Western blot,Real-time PCR检测结果显示,与正常组比较,高糖组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组比较,HPS+高糖组、α-LA+高糖组的Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。Annexin V/PI法流式细胞术检测结果显示,与正常组比较,高糖组SCs凋亡率明显增加;与高糖组比较,HPS+高糖组和α-LA+高糖组SCs凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HPS可以减轻SCs凋亡反应状态,其作用机制可能与抑制Bcl-2/Caspase-3信号通路激活有关。

非创伤性股骨头坏死患者血清Bax/Bcl-2意义

[目的]探究非创伤性股骨头坏死(non-traumatic osteonecrosis of the femoral head, NONFH)血清Bax/Bcl-2检测的意义。[方法] 2021年3月—2021年7月,75例NONFH患者以及67例正常人纳入本研究。采用酶联免疫吸附法检测血清Bax、Bcl-2水平,计算Bax/Bcl-2值。患者按不同因素分组比较Bax/Bcl-2的差异性。血清检测结果同临床病例资料行相关性分析。Bax/Bcl-2检测结果与是否股骨头坏死行ROC曲线分析。[结果]坏死组患者血清Bax和Bax/Bcl-2显著高于正常人组(P<0.05)。激素、酒精和特发性股骨头坏死间Bax、Bax/Bcl-2水平差异无统计学意义(P>0.05);双侧坏死的病例Bax/Bcl-2显著高于单侧坏死病例(P<0.05);塌陷组Bax、Bax/Bcl-2显著高于未塌陷组(P<0.05)。随着ARCO分期等级越高,血清Bax、Bax/Bcl-2显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析表明:坏死组患者血清Bax和Bax/Bcl-2与ARCO分期呈显著正相关(P<0.05);血清Bax和Bax/Bcl-2水平与VAS评分呈正相关,与Harris评分呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析,Bax/Bcl-2用于诊断NONFH的曲线下面积(area under curve, AUC)值为0.844。[结论]血清Bax/Bcl-2水平与NONFH的病情严重程度相关,其水平变化或可作为临床判断NONFH的潜在指标。

丹酚酸F调控Bax/Caspase-3/GSDME信号通路改善肾小管上皮细胞焦亡作用机制

目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞相对活力的影响及给予丹酚酸F不同干预时间条件下HK-2细胞的相对活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒分别检测细胞培养基上清中LDH和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)和Hoechst 33342/PI染色检测丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞PI阳性率的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)评价丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、GSDME蛋白表达及激活情况的影响。2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)及线粒体膜电位(JC-1)考察丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中活性氧(ROS)产生及线粒体膜电位的影响。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.01),乳酸脱氢酶、炎症因子IL-1β、PI阳性细胞比例均显著升高(P<0.01);Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的降低,ROS产生过量蓄积。与模型组比较,丹酚酸F组有效改善高糖诱导所致HK-2细胞的损伤(P<0.05),明显降低细胞培养基上清中LDH及IL-1β含量(P<0.05,P<0.01),显著减少PI阳性细胞的比例(P<0.01);丹酚酸F组降低Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达,明显升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的升高,ROS的过量蓄积减少。结论:丹酚酸F通过减少ROS的产生,改善线粒体膜电位失衡,抑制Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导的细胞焦亡发挥改善高糖诱导所致HK-2细胞损伤的作用。

生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的机制研究

目的:探讨生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制的作用机制。方法:采用卵巢癌SKVO3细胞株构建裸鼠卵巢癌移植瘤,利用基因转染技术外源性导入重组基因质粒Period2。采用Real-time PCR法和Western bolt法检测移植瘤中Period2表达,治疗期间测量移植瘤体积。治疗后2周处死裸鼠,称取瘤重,采用Real-time PCR和Western blot法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax基因的表达。结果:外源性导入Period2基因在裸鼠移植瘤肿瘤组织中成功稳定表达。与对照组比较,Period2基因过表达组的肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积和重量降低,抑瘤率升高,凋亡基因Bax表达明显升高,凋亡抑制基因Bcl-2表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Period2可能通过下调肿瘤凋亡抑制基因Bcl-2,促进凋亡基因Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制卵巢癌的生长转移,发挥抑瘤作用。