高脂血症大鼠脑缺血/再灌注后p38 MAPK活化及对Bax和Bcl-2表达的影响

目的检测高脂血症大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后大脑皮质内磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、Bax和Bcl-2表达变化,及SB203580对p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2表达的影响,研究在高脂血症脑I/R损伤中p38 MAPK活化对Bax和Bcl-2表达的影响。方法大鼠高脂血症模型建立后,将其随机分为3组,假手术组(sham)、手术组(I/R)、SB203580处理组(SB+I/R),每组10只。线栓法建立左侧大脑中动脉栓塞I/R模型,神经行为学评分观察大鼠神经行为损伤症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色显示脑梗死灶,TUNEL染色观察凋亡细胞,免疫组织化学法分析p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2相对表达水平。结果与sham组比较,I/R组大鼠脑梗死体积百分比、细胞凋亡指数和神经行为学评分均显著升高,且p-p38 MAPK、Bax表达明显增高,Bcl-2表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与I/R组比较,SB+I/R组大鼠脑组织损伤减轻,梗死灶明显缩小,细胞凋亡指数明显降低,p-p38 MAPK表达明显降低,Bax表达减少而Bcl-2表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。SB+I/R组较I/R组神经行为学评分降低,但差异无统计学意义。结论在高脂血症大鼠脑缺血再灌注损伤过程中,p38 MAPK活化可调节Bax和Bcl-2的表达。

聚肌苷酸聚胞苷酸对高血脂大鼠脑缺血/再灌注后Bcl-2和Bax表达的影响及神经保护作用

目的观察聚肌苷酸聚胞苷酸(Poly-IC)处理对高血脂大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后Bcl-2和Bax表达的影响,同时检测脑梗死灶、血脑屏障通透性和行为损伤症状,探讨其对高血脂合并脑I/R损伤是否发挥神经保护作用。方法高血脂大鼠随机分为脑I/R组、Poly-IC预处理组、Poly-IC后处理组和假手术(Sham)组,每组20只。0~4分神经行为评分记录各组大鼠的神经行为表现,伊文思蓝染色法检测各组大鼠血脑屏障通透性,TTC染色法观察各组大鼠脑组织梗死情况,TUNEL染色法测神经细胞的凋亡情况,Western blotting观察Bcl-2和Bax相对表达水平。结果与sham组比较,I/R组神经行为损伤症状严重,评分明显升高(P<0.05)。而Poly-IC预处理和后处理组评分较I/R组均明显降低(P<0.05)。伊文思蓝染色结果显示,I/R组较sham组血脑屏障通透性明显增高(P<0.05),而Poly-IC预处理或后处理可明显改善血脑屏障通透性(P<0.05)。脑梗死体积检测结果显示,sham组未见梗死灶均匀红染,而I/R组脑组织可见白色梗死区。与I/R组比较,Poly-IC预处理和后处理组梗死灶体积均明显缩小(P<0.05)。I/R组大鼠大脑皮质内细胞凋亡指数较sham组显著升高(P<0.05),而Poly-IC预处理和后处理组大鼠大脑皮质内细胞凋亡指数较I/R组均明显降低(P<0.05)。与sham组比较,I/R组Bax表达明显升高(P<0.05),Bcl-2表达明显降低(P<0.05)。与I/R组比较,Poly-IC预处理和后处理组Bax表达均明显降低(P<0.05),Bcl-2表达明显升高(P<0.05)。结论Poly-IC预处理或后处理可改善神经行为损伤症状,减轻血脑屏障损害,缩小脑梗死体积,降低神经细胞凋亡指数,对高血脂大鼠脑I/R损伤起到神经保护作用;该保护作用可能与Bcl-2和Bax表达水平改变有关。

高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax的表达变化及灯盏乙素的影响

目的观察高血脂大鼠缺血侧大脑皮质额叶内B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化,探讨灯盏乙素对高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法大鼠建立高血脂模型后,线栓法阻塞大脑中动脉建立脑缺血再灌注损伤模型,HE染色观察大脑皮质额叶的病理变化,免疫组织化学和免疫印迹法观察Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,同时结合神经行为学评分和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠的神经行为及脑梗死灶体积的变化。结果与假手术组相比,生理盐水组大鼠脑组织损伤加重,Bcl-2的表达明显减少,Bax的表达明显增高,同时大鼠的神经行为学评分和脑组织梗死灶体积明显增加(P<0. 05)。与生理盐水组相比,灯盏乙素治疗组脑组织损伤减轻,Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少,同时大鼠的神经行为学评分和脑组织梗死灶体积明显降低(P<0. 05)。结论灯盏乙素对高血脂大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax的表达实现的。

大鼠自发性乳腺肿瘤中Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

通过130只(雌雄对半)Sprague-Dawley(SD)大鼠进行自发性乳腺肿瘤造模,并研究自发产生的乳腺肿瘤组织的病理变化及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)在乳腺肿瘤中的蛋白和m RNA表达变化。造模结果显示共有14只雌性大鼠发生乳腺肿瘤,对总体而言肿瘤的发病率为10.77%(14/130);由于雄性大鼠未见乳腺肿瘤,在雌性大鼠中肿瘤的发病率为21.54%(14/65)。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色病理切片观察确定肿瘤分型分别为乳腺纤维腺瘤7例,乳腺腺癌3例,乳腺乳头状癌2例,乳腺浸润性导管癌2例。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果显示,对照组(n=5)Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达量分别为9.75±0.04、8.13±0.35和6.60±0.04,而这3个因子在良性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为8.16±0.16、9.14±0.22和4.43±0.1。另外,其在恶性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为6.49±0.32、9.24±0.81和3.03±0.10,与对照组相比,Bax和Caspase-3在病变组的表达极显著减少(P<0.01),而Bcl-2在病变组中的表达与对照组相比也显著增加(P<0.05),且正常对照组Bcl-2/Bax比值小于1,而在良性组和恶性组则均大于1。荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)结果通过相对定量计算显示,Bax、Bcl-2和Caspase-3在各组中的m RNA的表达量变化与蛋白表达一致,相比差异有高度统计学意义(P<0.01)。综上所述,自发性乳腺肿瘤在雌性大鼠中的发病率较高,且病变类型多样,而雄性发病率为0;且Bcl-2、Bax和Caspase-3与大鼠自发性乳腺肿瘤的发生有着密切的联系,从而为临床乳腺肿瘤的诊断、治疗和预后提供了新的思考方向。

远端肢体缺血预处理对氯胺酮致发育期大鼠海马CA1区神经细胞Bcl-2和Bax表达失衡的影响

目的研究远端肢体缺血预处理对氯胺酮麻醉导致的发育期大鼠海马CA1区神经细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和凋亡因子Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达失衡的影响。方法SD新生大鼠48只,5日龄,体重8~12 g,随机分为四组:对照组(C组)于出生第7天腹腔注射生理盐水8 ml/kg,间隔2 h注射一次,共注射6次;远端肢体缺血预处理组(RIPC组)于出生第5天行右后肢缺血5 min,再灌注5 min预处理,4个循环,48 h后腹腔注射生理盐水8 ml/kg,方法同C组;氯胺酮组(K组)于出生第7天腹腔注射氯胺酮20mg/kg,方法同C组;肢体缺血预处理+氯胺酮组(RK组)于出生第5天行远端肢体缺血预处理,48 h后腹腔注射氯胺酮20 mg/kg,方法同C组。四组于腹腔注射完成后12 h经心脏灌注取脑,分别采用免疫组化法和Western blot法观察大鼠海马CA1区凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2阳性细胞数量和蛋白含量。结果与RIPC组比较,K组和RK组海马CA1区神经细胞Bax阳性细胞数量明显增多,蛋白含量明显升高(P<0.05),Bcl-2阳性细胞数量明显减少,蛋白含量明显降低(P<0.05)。C组和RIPC组海马CA1区神经细胞Bcl-2和Bax阳性细胞数量和蛋白含量差异无统计学意义。与K组比较,RK组海马CA1区神经细胞Bax阳性细胞数量明显减少,蛋白含量明显降低(P<0.05),Bcl-2阳性细胞数量明显增多,蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论远端肢体缺血预处理可减轻氯胺酮大剂量、多次注射导致的发育期大鼠海马CA1区神经细胞Bcl-2、Bax表达失衡。

丹参酮IIA对神经性痛大鼠脊髓背角Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨丹参酮IIA的镇痛机制,研究其对慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠被分为假手术组和模型组,假手术组仅暴露实验大鼠右侧坐骨神经干不予结扎,模型组结扎实验大鼠右侧坐骨神经干,生理盐水组是在模型组大鼠鞘内注射生理盐水,处理组是在模型组大鼠鞘内注射丹参酮IIA,检测各组大鼠机械痛阈和热痛阈,采用免疫荧光组织化学检测各组大鼠脊髓背角内Bcl-2蛋白、Caspase-3蛋白和Bax蛋白的表达。结果:假手术组大鼠的热痛阈和机械痛阈较高,脊髓背角内仅有少量的Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达;与之比较生理盐水组大鼠的热痛阈和机械痛阈降低,Bcl-2蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表达增多,Bcl-2/Bax比值减小,说明大鼠模型制备成功可以进行后续实验;与生理盐水组比较,处理组脊髓背角内Bcl-2蛋白的表达增多,但Bax蛋白和Caspase-3蛋白的表达下降,Bcl-2/Bax比值增大,处理组热痛阈和机械痛阈升高。结论:该研究中丹参酮IIA的镇痛作用可能与脊髓背角内Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白的增多以及Bax蛋白的降低有关。

卡马西平片联合苯巴比妥治疗对癫痫患者IL-1β、IL-6、Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察分析卡马西平片联合苯巴比妥治疗对癫痫患者白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、抑制神经元凋亡因子(Bcl-2)、神经元凋亡因子(Bax)表达的影响。方法选取2015年1月至2016年9月于长沙市中心医院就诊的癫痫患者94例,采用随机数表法均分为观察组(n=47)与对照组(n=47),对照组患者给予卡马西平片治疗,观察组患者在此基础上联合苯巴比妥治疗,观察两组患者的临床疗效、焦虑抑郁程度、认知功能、癫痫发作次数、癫痫积分及IL-1β、IL-6、Bax、Bcl-2。结果观察组患者的治疗总有效率(89.36%)、MoCA评分[(26.54±2.21)分]、IL-6[(217.54±15.71)pg/mL]、Bcl-2[(35.78±3.64)pg/mL]明显高于对照组[76.60%、(21.27±2.15)分、(176.651±14.45)pg/mL、(29.97±3.14)pg/mL],差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组的癫痫发作次数[(2.27±0.22)次/月]、癫痫积分[(2.27±0.22)分]、HAD评分[(2.32±0.95)分]、IL-1β(140.72±16.18)pg/mL、Bax(21.52±1.29)pg/mL明显低于对照组[(3.51±0.25)次/月、(6.34±0.83)分、(5.34±1.04)分、(169.67±17.86)pg/mL、(26.49±1.62)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论马西平片联合苯巴比妥治疗能够减少患者神经细胞损伤,改善患者的焦虑、抑郁程度及认知功能,减少癫痫发作次数,临床疗效显著。

甲状腺癌中Bax、Survivin及Livin的表达及意义

目的探讨甲状腺癌中B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、生存素(Survivin)及Livin的表达及意义。方法采用免疫组化法检测82例甲状腺癌组织及相应癌旁正常组织中Bax、Survivin及Livin的阳性表达,分析三者与临床病理参数的关系。结果甲状腺癌组织中Bax的阳性表达率明显低于癌旁正常组织(P﹤0.001),Survivin及Livin的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.001)。Ⅲ~Ⅳ期甲状腺癌患者的Bax阳性表达率明显低于Ⅰ~Ⅱ期患者,有淋巴结转移患者的Bax阳性表达率明显低于无淋巴结转移患者(P﹤0.01)。Ⅲ~Ⅳ期甲状腺癌患者的Survivin及Livin阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,有淋巴结转移患者的Survivin及Livin阳性表达率明显高于无淋巴结转移患者(P﹤0.01)。甲状腺癌组织中Bax与Survivin的表达呈负相关(r=-0.435,P﹤0.01),Bax与Livin的表达也呈负相关(r=-0.551,P﹤0.01),Survivin与Livin的表达呈正相关(r=0.738,P﹤0.01)。结论Bax在甲状腺癌组织中低表达,Survivin及Livin在甲状腺癌组织中高表达,并与TNM分期及淋巴结转移密切相关,三者联合检测可能成为甲状腺癌预后的参考指标。

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

Bax抑制因子1过表达对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨过表达B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)抑制因子1(BI-1)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、空载腺病毒(Ad-NC)组和BI-1腺病毒(Ad-BI-1)组,每组15只。除假手术组外,其他各组大鼠均采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,Ad-NC组和Ad-BI-1组大鼠分别于心肌梗死区域注射腺病毒包装的空载质粒和BI-1过表达质粒。术后72 h,检测各组大鼠心功能参数左室射血分数(LVEF)、左室缩短分数(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD),TTC染色法检测各组大鼠心肌梗死面积百分率,TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,比色法检测各组大鼠心肌组织中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠心肌组织中BI-1 mRNA表达水平,Westernblotting法检测大鼠心肌组织中BI-1、Bcl-2、Bax和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇依赖酶1(IRE1)、磷酸化IRE1(p-IRE1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平,并计算p-IRE1/IRE1和p-JNK/JNK比值。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVEF和LVFS明显降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、心肌梗死面积百分率、心肌组织中Caspase-3活性和心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),心肌组织中BI-1 mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),心肌组织中Bax、GRP78蛋白表达水平和p-IRE1/IRE1及p-JNK/JNK比值明显升高(P<0.05);与模型组比较,Ad-BI-1组大鼠LVEF和LVFS明显升高(P<0.05),LVEDD和LVESD明显降低(P<0.05),心肌梗死面积百分率、心肌细胞凋亡率和心肌组织中Caspase-3活性明显降低(P<0.05),心肌组织中BI-1 mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),心肌组织中Bax、GRP78蛋白表达水平和p-IRE1/IRE1及p-JNK/JNK比值明显降低(P<0.05),Ad-NC组大鼠上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达BI-1通过抑制内质网应激途径降低心肌细胞凋亡水平,从而改善AMI大鼠心功能。

丹酚酸F调控Bax/Caspase-3/GSDME信号通路改善肾小管上皮细胞焦亡作用机制

目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞相对活力的影响及给予丹酚酸F不同干预时间条件下HK-2细胞的相对活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒分别检测细胞培养基上清中LDH和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)和Hoechst 33342/PI染色检测丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞PI阳性率的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)评价丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、GSDME蛋白表达及激活情况的影响。2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)及线粒体膜电位(JC-1)考察丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中活性氧(ROS)产生及线粒体膜电位的影响。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.01),乳酸脱氢酶、炎症因子IL-1β、PI阳性细胞比例均显著升高(P<0.01);Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的降低,ROS产生过量蓄积。与模型组比较,丹酚酸F组有效改善高糖诱导所致HK-2细胞的损伤(P<0.05),明显降低细胞培养基上清中LDH及IL-1β含量(P<0.05,P<0.01),显著减少PI阳性细胞的比例(P<0.01);丹酚酸F组降低Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达,明显升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的升高,ROS的过量蓄积减少。结论:丹酚酸F通过减少ROS的产生,改善线粒体膜电位失衡,抑制Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导的细胞焦亡发挥改善高糖诱导所致HK-2细胞损伤的作用。

补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察补肾活血汤对乳腺癌骨转移模型裸鼠细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2及切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨其抑制骨质破坏的作用机制。方法:将30只BALB/c雌性裸鼠随机分成空白组6只、造模组24只。将乳腺癌细胞株4T1经裸鼠右下肢胫骨注射构建乳腺癌骨转移模型,将成膜裸鼠随机分为模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组,每组6只。补肾活血汤组予以补肾活血汤中药灌胃36.67 g·kg^(-1),每日1次,唑来膦酸组予以皮下注射100μg·kg^(-1),每周2次,联合用药组给予相同剂量补肾活血汤组灌胃联合唑来膦酸皮下注射,正常组和模型组予以等体积蒸馏水灌胃,连续14 d,次日脊柱脱臼法处死,观察裸鼠一般情况及体质量变化,截取每组裸鼠右下肢,称重,X射线扫描及苏木素-伊红(HE)染色观察裸鼠骨组织形态学变化、原位末端标记法(TUNEL)检测裸鼠骨组织凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裸鼠骨组织中Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组第5~15天裸鼠体质量显著减轻(P<0.01),右下肢组织质量显著增加(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组第10~15天裸鼠体质量显著增加(P<0.01),右下肢组织质量显著降低(P<0.01)。HE染色显示与空白组比较,模型组、补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠肿瘤细胞异型性明显,核染色深,骨转移明确。X射线扫描示与空白组比较,模型组裸鼠右下肢出现明显溶骨性破坏,胫骨近段、膝关节完整结构基本丧失,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组右下肢溶骨性病变明显减少,部分结构完整,对骨质破坏具有抑制作用。TUNEL染色显示与空白组比较,模型组骨转移瘤细胞凋亡率降低,与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组裸鼠骨转移瘤中细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。Western blot显示,与空白组比较,模型组骨转移瘤中Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),与模型组比较,补肾活血汤组、唑来膦酸组、联合用药组骨转移瘤Bax蛋白含量明显升高(P<0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾活血汤组对乳腺癌骨转移模型裸鼠具有抑制骨质破坏作用,其机制可能和上调Bax,下调Bcl-2,激活cleaved Caspase-3诱导细胞凋亡相关。

非创伤性股骨头坏死患者血清Bax/Bcl-2意义

[目的]探究非创伤性股骨头坏死(non-traumatic osteonecrosis of the femoral head, NONFH)血清Bax/Bcl-2检测的意义。[方法] 2021年3月—2021年7月,75例NONFH患者以及67例正常人纳入本研究。采用酶联免疫吸附法检测血清Bax、Bcl-2水平,计算Bax/Bcl-2值。患者按不同因素分组比较Bax/Bcl-2的差异性。血清检测结果同临床病例资料行相关性分析。Bax/Bcl-2检测结果与是否股骨头坏死行ROC曲线分析。[结果]坏死组患者血清Bax和Bax/Bcl-2显著高于正常人组(P<0.05)。激素、酒精和特发性股骨头坏死间Bax、Bax/Bcl-2水平差异无统计学意义(P>0.05);双侧坏死的病例Bax/Bcl-2显著高于单侧坏死病例(P<0.05);塌陷组Bax、Bax/Bcl-2显著高于未塌陷组(P<0.05)。随着ARCO分期等级越高,血清Bax、Bax/Bcl-2显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析表明:坏死组患者血清Bax和Bax/Bcl-2与ARCO分期呈显著正相关(P<0.05);血清Bax和Bax/Bcl-2水平与VAS评分呈正相关,与Harris评分呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析,Bax/Bcl-2用于诊断NONFH的曲线下面积(area under curve, AUC)值为0.844。[结论]血清Bax/Bcl-2水平与NONFH的病情严重程度相关,其水平变化或可作为临床判断NONFH的潜在指标。

补肾活血方对慢性肾衰竭大鼠氧化应激、PI3K/Akt、Bcl-2/Bax的影响

【目的】探讨补肾活血方对慢性肾衰竭大鼠的治疗作用及机制。【方法】将40只SD大鼠分为正常组(10只)、模型组(9只)、补肾活血方低剂量组(10只)和补肾活血方高剂量组(10只)。除正常组外,其他组别大鼠采用腺嘌呤灌胃法复制慢性肾衰竭模型。造模成功后,补肾活血方低、高剂量组大鼠分别给予0.52、2.08 g/kg补肾活血方药液灌胃,每日1次,连续给药28 d。给药结束后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肾功能指标尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和尿酸(UA)水平及肾组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肾组织病理学变化,Western Blot法检测肾组织磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。【结果】(1)与正常组比较,模型组BUN、SCr、UA水平均上升(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组BUN、SCr、UA水平均显著下降(P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组MAD水平上升,SOD水平下降(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组MAD水平下降,SOD水平上升(P<0.05);(3)与正常组比较,模型组肾组织中出现轻度坏死和炎性细胞浸润,肾小管扩张,肾小球变形等病理学变化;与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组肾组织病理情况均有改善。(4)与正常组比较,模型组大鼠肾组织PI3K、Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组大鼠肾组织PI3K、Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。(5)与正常组比较,模型组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平上升(P<0.05);与模型组比较,补肾活血方低、高剂量组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达水平上升,Bax蛋白表达水平下降(P<0.05)。【结论】补肾活血方能够改善慢性肾衰竭大鼠肾脏损伤,其机制与减轻氧化应激、抑制PI3K/Akt信号通路、调控凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达有关。

基于Bcl-2/Bax信号通路探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物治疗溃疡性结肠炎作用机制

目目的的:探讨藏族医药湿生扁蕾乙酸乙酯提取物通过B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)介导的凋亡通路防治复发型大鼠大肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用“病证结合”法构建复发型大鼠大肠湿热UC模型,将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、湿生扁蕾乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组(150、75、37.5 mg·kg^(-1))及美沙拉嗪组(135 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药14 d,记录大鼠一般状态,观察大鼠结肠长度及肠黏膜损伤情况,测定结肠湿质量指数,计算肝脏、脾脏、胸腺脏器系数。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测结肠上皮细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白3(Claudin3)、闭合蛋白(Occludin)的表达,免疫组化法(IHC)观察结肠上皮细胞中Bax、Caspase-3的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)、肠上皮凋亡、肝脏、脾脏指数及血清中炎症因子IL-1β和IL-6水平均显著升高(P<0.01),肠黏膜保护蛋白ZO-1、Claudin3、Occludin表达显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9表达显著升高(P<0.01),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,湿生扁蕾乙酸乙酯提取物高、中、低剂量均能够显著改善大鼠的一般状态,减轻结肠病变,降低肠上皮细胞凋亡、肝脏、脾脏指数,上调ZO-1、Claudin3、Occludin及Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,以湿生扁蕾高、中剂量效果明显(P<0.05,P<0.01)。结论:湿生扁蕾乙酸乙酯提取物能够通过调节Bcl-2/Bax信号通路,减轻肠黏膜损伤,发挥治疗UC作用。

芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的影响

目的:探讨芹菜素对大鼠骨肉瘤细胞凋亡及相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Caspase-9及细胞色素C的影响。方法:SD大鼠50只,建立大鼠骨肉瘤模型,随机分为模型组,顺氯氨铂组(10 mg·kg-1),芹菜素低、中、高剂量组(1,2,4 mg·kg-1),每组10只,ig给药,连续给药30 d。模型组ig给等体积的生理盐水。末次给药24 h后,切取骨肉瘤组织,称质量。TUNEL法原位标记凋亡的骨肉瘤细胞;免疫组化法检测骨肉瘤组织中Bax,Bcl-2的蛋白表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测骨肉瘤组织中Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白含量。结果:与模型组比较,芹菜素低、中、高剂量组的骨肉瘤的质量降低,细胞凋亡数量明显增加,明显上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论:芹菜素可通过上调Bax,Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C的蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡,从而对骨肉瘤产生治疗和抑制作用。

生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的机制研究

目的:探讨生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长抑制的作用机制。方法:采用卵巢癌SKVO3细胞株构建裸鼠卵巢癌移植瘤,利用基因转染技术外源性导入重组基因质粒Period2。采用Real-time PCR法和Western bolt法检测移植瘤中Period2表达,治疗期间测量移植瘤体积。治疗后2周处死裸鼠,称取瘤重,采用Real-time PCR和Western blot法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax基因的表达。结果:外源性导入Period2基因在裸鼠移植瘤肿瘤组织中成功稳定表达。与对照组比较,Period2基因过表达组的肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积和重量降低,抑瘤率升高,凋亡基因Bax表达明显升高,凋亡抑制基因Bcl-2表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Period2可能通过下调肿瘤凋亡抑制基因Bcl-2,促进凋亡基因Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制卵巢癌的生长转移,发挥抑瘤作用。

甘草酸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及Bcl-2和Bax表达的影响

目的：观察甘草酸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）的保护作用及B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达的影响,探讨其可能机制。方法：50只SD大鼠随机分为假手术组,心肌缺血再灌注损伤组（模型组）,甘草酸预处理低、中、高剂量组。采用结扎左冠状动脉前降支建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组穿线后不结扎;模型组于缺血前30 min腹腔注射2 mg·kg-1生理盐水;甘草酸低、中、高剂量组于缺血前30 min腹腔注射2,4,10 mg·kg-1甘草酸。光镜下观察心肌组织的病理组织学变化;检测肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性,乳酸脱氢酶（LDH）活性,心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）水平,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,白细胞介素-6（IL-6）水平,髓过氧化物酶（MPO）活性,超氧化物歧化酶（SOD）活性,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,丙二醛（MDA）水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡指数;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌Bcl-2和Bax的表达。结果：与模型组比较,甘草酸预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组明显减轻心肌缺血再灌注损伤;与模型组比较,甘草酸预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组显著降低CKMB,LDH,c Tn T,TNF-α,IL-6,MPO,MDA水平,显著升高SOD,GSH-Px活性（P〈0.05,P〈0.01）;与模型组比较,甘草酸预处理低剂量组,中剂量组,高剂量组显著降低心肌细胞凋亡指数（P〈0.01）;与模型组比较,甘草酸预处理低、中、高剂量组显著上调心肌Bcl-2表达,下调Bax表达及上调Bcl-2/Bax（P〈0.05,P〈0.01）。结论：甘草酸预对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,且能上调心肌Bcl-2表达和下调心肌Bax表达,从而抑制细胞心肌凋亡。

四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织ERK1/2,Akt,Bax表达的影响

目的：观察四君子汤加减对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）,蛋白激酶B（Akt）,细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白（Bax）的影响,探讨其保护神经细胞可能作用机制。方法：将55只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组、四君子汤加减低、中、高剂量组（3.69,7.38,14.76 g·kg-1）。采用线栓法制备大脑中动脉阻塞（MCAO）模型,治疗7 d后处死,取大鼠缺血侧脑组织,运用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）,磷酸化Akt（p-Akt）,Bax蛋白含量。应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）测定脑缺血再灌注后脑组织内ERK1/2,Akt,Bax mRNA的表达变化。结果：与假手术组比较,模型组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达显著下调（P〈0.01）;Bax蛋白及mRNA表达显著上调（P〈0.01）;与模型组比较,四君子汤加减低、中、高剂量组p-ERK1/2,p-Akt蛋白及mRNA表达明显上调,Bax蛋白及mRNA表达明显下调,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：四君子汤加减可能通过上调p-ERK1/2,p-Akt,下调Bax蛋白表达发挥脑保护作用。

miR-214-3p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制

目的探讨miR-214-3 p对缺糖缺氧再灌注诱导PC12细胞凋亡的作用及机制。方法利用数据库TargetScan 7.2预测miR-214-3 p和B淋巴细胞瘤因子2样蛋白2(BCL2L2)之间的结合位点;选取人胚肾293T细胞共转染分为BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+miR-214-3 p mimic(wt+mimic)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR野生型荧光素酶报告载体+mimic negative control(wt+NC)组、BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+miR-214-3 p mimic(mut+mimic)组及BCL2L2 mRNA 3′UTR突变型荧光素酶报告载体+mimic NC(mut+NC组),检测4组293T细胞荧光素酶的发光活性;肾上腺嗜铬神经细胞瘤12(PC12)细胞转染miR-214-3 p mimic(mimic组)、miR-214-3 p mimic NC(mimic NC组)、miR-214-3 p inhibitor(inhibitor组),miR-214-3 p inhibitor NC(inhibitor NC组),采用蛋白免疫印迹法检测BCL2L2蛋白表达;PC12细胞作为对照(Control组),用缺氧缺糖(OGD/R)处理PC12细胞构建缺血再灌注细胞模型(OGD/R组),用miR-214-3 p mimic转染PC12细胞,然后用OGD/R处理PC12细胞(OGD/R+mimic组),采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测Control组和OGD/R组miR-214-3 p及BCL2L2 mRNA表达,采用蛋白免疫印迹法检测Control组、OGD/R组及OGD/R+mimic组裂解胱天蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)及B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)的蛋白表达。结果数据库Targetscan 7.2预测结果表明,miR-214-3 p与BCL2L2的3′UTR区之间存在结合位点;荧光素酶报告基因实验结果表明,wt+mimic组荧光素酶活性低于wt+NC组,mut+mimic组和mut+NC中荧光素酶活性无明显差异;mimic NC组BCL2L2的蛋白表达高于mimic组,inhibitor NC组BCL2L2的蛋白表达低于inhibitor组(P<0.05);与Control组比较,OGD/R组PC12细胞中BCL2L2 mRNA和蛋白表达水平降低、miR-214-3 p mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);OGD/R组Cleaved-caspase-3和Bax表达分别高于Control组、低于OGD/R+mimic组,但Bcl2表达分别低于Control组、高于OGD/R+mimic组(P<0.05)。结论过表达miR-214-3 p可靶向结合并下调BCL2L2的表达,从而加速PC12细胞的凋亡。