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猪瘟病毒E2蛋白部分抗原区基因在原核系统的分泌表达与鉴定
1
作者
周顺
李俊
温建新
《中国动物检疫》
CAS
2010年第8期24-26,44,共4页
基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位B/C抗原区和A/D抗原区,根据GeneBank中猪瘟病毒B/C基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增猪瘟病毒B/C基因。将扩增所得猪瘟病毒B/C基因克隆于PMD18-T载体,...
基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位B/C抗原区和A/D抗原区,根据GeneBank中猪瘟病毒B/C基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增猪瘟病毒B/C基因。将扩增所得猪瘟病毒B/C基因克隆于PMD18-T载体,然后定向亚克隆猪瘟病毒B/C基因至原核表达载体PET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有B/C基因的重组质粒命名为PETB/C。用PETB/C转化受体菌BL21,挑取单个菌落,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品。经SDS-PAGE电泳分析证实B/C基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG,诱导6h其表达达到高峰,经Western-blot分析证实表达的重组B/C蛋白具有反应活性,大小约为9KD。用表达产物作ELISA,结果表明表达产物与猪瘟病毒抗血清可发生明显的反应,而与其它8种疫病阳性血清不发生反应。正常菌体蛋白与猪瘟病毒阳性血清也不发生反应。通过对58份送检血清样品的检测结果显示其与Dot-ELISA的相符率高达95%以上。试验证明利用原核表达系统制备的重组蛋白作为诊断用抗原,为研究亚单位疫苗或诊断抗原打下坚实基础。
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关键词
猪瘟病毒
b/
c
抗原
区
表达
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职称材料
猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测
被引量:
2
2
作者
郑仲华
杨佩
+10 位作者
赵明
丘峰
吴祖庆
张仕云
柳俏凡
何洪洲
洪纯丹
魏楚丹
赵爽
李盼畔
陈金顶
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第10期2541-2546,共6页
为监测猪场猪群中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体水平,本研究利用TGEV冻存液,通过RT-PCR扩增得到S基因的主要抗原片段B/C区约560bp,将其酶切后连接到pET-32a载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。挑取转化成功的部分菌落进行PCR试验,将目的...
为监测猪场猪群中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体水平,本研究利用TGEV冻存液,通过RT-PCR扩增得到S基因的主要抗原片段B/C区约560bp,将其酶切后连接到pET-32a载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。挑取转化成功的部分菌落进行PCR试验,将目的条带正确的菌落添加到LB培养基过夜培养,提取重组质粒并送测序。培养测序正确的菌液,利用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE试验,在约37ku位置有一明显的目的条带。利用自制猪传染性胃肠炎兔血清通过Western blotting试验检测纯化的重组蛋白,在37ku处可见一条带,表明此重组蛋白具有一定的免疫原性。本研究将有助于研究TGEV ELSIA检测试剂盒的组装并进行TGEV抗体水平的监测,为猪场免疫情况提供相应参考。
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关键词
猪传染性胃肠炎病毒
b/c区
截短表达
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职称材料
题名
猪瘟病毒E2蛋白部分抗原区基因在原核系统的分泌表达与鉴定
1
作者
周顺
李俊
温建新
机构
青岛农业大学
山东省农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《中国动物检疫》
CAS
2010年第8期24-26,44,共4页
基金
"十一五"国家支撑计划(2006BAD06A18)
山东省攻关项目(2008GG10009034)
文摘
基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位B/C抗原区和A/D抗原区,根据GeneBank中猪瘟病毒B/C基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增猪瘟病毒B/C基因。将扩增所得猪瘟病毒B/C基因克隆于PMD18-T载体,然后定向亚克隆猪瘟病毒B/C基因至原核表达载体PET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有B/C基因的重组质粒命名为PETB/C。用PETB/C转化受体菌BL21,挑取单个菌落,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品。经SDS-PAGE电泳分析证实B/C基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG,诱导6h其表达达到高峰,经Western-blot分析证实表达的重组B/C蛋白具有反应活性,大小约为9KD。用表达产物作ELISA,结果表明表达产物与猪瘟病毒抗血清可发生明显的反应,而与其它8种疫病阳性血清不发生反应。正常菌体蛋白与猪瘟病毒阳性血清也不发生反应。通过对58份送检血清样品的检测结果显示其与Dot-ELISA的相符率高达95%以上。试验证明利用原核表达系统制备的重组蛋白作为诊断用抗原,为研究亚单位疫苗或诊断抗原打下坚实基础。
关键词
猪瘟病毒
b/
c
抗原
区
表达
Keywords
c
SFV
b/
c
antigeni
c
domain
Expression
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测
被引量:
2
2
作者
郑仲华
杨佩
赵明
丘峰
吴祖庆
张仕云
柳俏凡
何洪洲
洪纯丹
魏楚丹
赵爽
李盼畔
陈金顶
机构
南沙出入境检验检疫局
华南农业大学兽医学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016年第10期2541-2546,共6页
基金
广东省省级科技计划项目(2015B020230009)
文摘
为监测猪场猪群中猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体水平,本研究利用TGEV冻存液,通过RT-PCR扩增得到S基因的主要抗原片段B/C区约560bp,将其酶切后连接到pET-32a载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。挑取转化成功的部分菌落进行PCR试验,将目的条带正确的菌落添加到LB培养基过夜培养,提取重组质粒并送测序。培养测序正确的菌液,利用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE试验,在约37ku位置有一明显的目的条带。利用自制猪传染性胃肠炎兔血清通过Western blotting试验检测纯化的重组蛋白,在37ku处可见一条带,表明此重组蛋白具有一定的免疫原性。本研究将有助于研究TGEV ELSIA检测试剂盒的组装并进行TGEV抗体水平的监测,为猪场免疫情况提供相应参考。
关键词
猪传染性胃肠炎病毒
b/c区
截短表达
Keywords
TGEV
b/
c
zone
trun
c
ated expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪瘟病毒E2蛋白部分抗原区基因在原核系统的分泌表达与鉴定
周顺
李俊
温建新
《中国动物检疫》
CAS
2010
0
下载PDF
职称材料
2
猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测
郑仲华
杨佩
赵明
丘峰
吴祖庆
张仕云
柳俏凡
何洪洲
洪纯丹
魏楚丹
赵爽
李盼畔
陈金顶
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2016
2
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