IL-17A在食管腺癌中的表达及其对NF-κB/COX-2信号轴的调控作用

目的探讨白细胞介素17A(IL-17A)在食管腺癌中的表达情况及其通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对环氧合酶-2(COX-2)的调控作用及机制。方法收集10例食管腺癌组织、癌旁组织和血清,同时收集10例做胃镜检查的健康体检者的食管上皮组织和血清,免疫组化法检测组织中IL-17A和COX-2蛋白的表达,real time-PCR法检测癌组织和癌旁组织中IL-17A mRNA和Th17细胞的特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体c(RORc)mRNA的表达,ELISA法检测食管腺癌患者和健康对照者血清中IL-17A的含量。选取对数生长期的人食管腺癌OE19细胞,分为对照组、IL-17A(100 ng/mL)组和IL-17A(100 ng/mL)+PDTC(100μmol/L,NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵)组,Western blot法检测OE19细胞中p50、p65、p-IκB-α和COX-2蛋白的表达水平。结果食管腺癌组织中IL-17A阳性染色细胞数高于癌旁组织;相较于癌旁组织,食管腺癌组织中IL-17A和RORc mRNA水平增多(P<0.05)。与健康对照者相比,食管腺癌患者血清中IL-17A的含量明显升高(P<0.05)。与正常食管上皮组织比较,食管腺癌组织中COX-2蛋白阳性染色面积更大更深。与对照组相比,IL-17A组OE19细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显增加(P<0.05);与IL-17A组相比较,IL-17A+PDTC组细胞中p-IκB-α和COX-2蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。结论IL-17A表达在食管腺癌患者组织和血清中均增加。在食管腺癌OE19细胞中,IL-17A可能通过激活NF-κB信号通路上调COX-2的表达量。

孤儿核受体NR4A1通过NF-κB/COX-2对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制研究

目的 分析孤儿核受体NR4A1对氧化应激诱导的血栓形成的保护作用及机制。方法 选取健康SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和NR4A1组,每组10只。用FeCl_3构建颈动脉血栓大鼠模型,用NR4A1激动剂促进大鼠NR4A1的表达。称取3组小鼠的血栓重量;采用苏木精-伊红染色观察颈动脉组织切片的血栓形成情况;采用蛋白质印迹法检测核转录因子-κB(NF-κB)/环氧合酶-2(COX-2)信号轴相关蛋白表达水平;采用硝酸还原酶法检测NO水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)水平;采用放射免疫分析法测定血栓素(TX)B2、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平。结果 对照组未形成血栓,NR4A1组大鼠血栓重量明显低于模型组,3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织NR4A1蛋白表达水平均低于对照组,且模型组低于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组与NR4A1组大鼠颈动脉组织p-NF-κB p65及COX-2蛋白表达水平均高于对照组,且模型组高于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组、NR4A1组大鼠血清NO、eNOS、6-keto-PGF1α水平及NO/ET-1均低于对照组,且模型组均低于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、NR4A1组大鼠血清ET-1、PAI-1、TXB2水平及TXB2/6-keto-PGF1α均高于对照组,且模型组均高于NR4A1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NR4A1对NF-κB/COX-2信号通路相关蛋白表达具有负向调控作用,进而减轻大鼠深静脉血栓模型中的血栓和炎症。

基于NF-κB/COX-2炎症通路探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制

目的:探究益气养阴活血方对糖尿病肾病(DN)大鼠的肾脏保护作用机制。方法:50只雄性SD大鼠随机分为正常组8只、模型组42只,模型组采用高脂高糖喂养+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立DN大鼠模型,除去造模过程中死亡及失败大鼠,将造模成功的32只大鼠随机分为模型组、缬沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组8只,正常组予以普通饲料喂养。药物灌胃6周后收集大鼠24 h尿液,腹主动脉取血后处死取材,检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)、血脂(TG、TC)、肾功(BUN、Scr)和24 h尿蛋白总量(24 h-UTP),ELISA法检测血清的环氧合酶-2(COX-2)和核转录因子κB(NF-κB),HE染色观察肾脏病理,Western Blot、PCR法分别检测肾组织中相关指标蛋白和mRNA水平。结果:与模型组相比,中药低剂量组和中药高剂量组大鼠FBG、TG、TC、BUN、Scr、24 h-UTP均明显下降(P<0.01),肾小球及肾小管形态基本恢复正常,血清及肾组织中的NF-κB、COX-2蛋白表达下调(P<0.01),中药高剂量组大鼠肾组织中的NF-κB、COX-2 mRNA表达下调(P<0.05)。结论:益气养阴活血方可能通过抑制NF-κB/COX-2炎症通路而减轻DN大鼠肾脏损伤。

五味子甲素对炎性肠病小鼠结肠NF-κB/COX-2信号通路的影响

目的:考察五味子甲素对三硝基苯磺酸所致炎性肠病小鼠核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/环氧合酶2(cyclooxygenase,COX-2)通路的抑制作用。方法:采用三硝基苯磺酸灌肠诱导小鼠炎性肠病,采用ELISA、免疫组化、WB法测定小鼠体内NF-κB及COX-2表达,采用RT-PCR法测定小鼠结肠组织NF-κB及COX-2 mRNA表达,观察小鼠体质量、腹泻症状和疾病活动指数。结果:炎性肠病小鼠体内NF-κB、COX-2含量、蛋白及其mRNA表达增多,五味子甲素可抑制NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达,抑制炎性肠病小鼠体质量减轻和疾病活动指数,改善小鼠腹泻情况。结论:五味子甲素可通过抑制NF-κB/COX-2通路的激活而抑制炎症反应,对三硝基苯磺酸诱导的炎性肠病小鼠具有治疗作用。

面向水体的HY-1B/COCTS图像条带噪声去除

HY-1B/COCTS是我国自主研发的第2颗海洋卫星HY-1B星搭载的水色水温扫描仪(Chinese ocean color and temperature scanner,COCTS)。由于COCTS的不同探测器对地物光谱响应有差异,其图像的行间存在明暗的条带噪声。针对COCTS图像在水色遥感中的应用特点,在分析可见光-近红外波段地物光谱特征的基础上,使用其第4和第8波段数据构建的归一化差分水体指数(normalized difference water index,NDWI)提取图像的水体信息;采用矩匹配法对COCTS图像水体区域的条带噪声进行去除,并以均值、标准差、信噪比、偏度、峰度、信息熵和平均梯度7个指标对条带噪声去除后的COCTS图像进行质量评价。结果表明,该方法能有效消除图像的条带噪声,使图像质量得到改善。

右美托咪定对缺血再灌注肺损伤大鼠NF-κB/COX2信号通路及细胞凋亡的影响

目的探讨右美托咪定对缺血再灌注肺损伤大鼠NF-κB/COX2信号通路及细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、右美托咪定低剂量(7.5μg/kg)组、右美托咪定中剂量(15μg/kg)组、右美托咪定高剂量(30μg/kg)组、尼莫地平(200 mg/kg)组,每组12只,除假手术组外,其余各组制备缺血再灌注肺损伤模型,分组处理后,苏木精-伊红染色(HE)检测大鼠肺组织病理形态;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况;检测大鼠动脉血中血气指标:氧分压(PaO 2)、二氧化碳分压(PaCO 2)和氧合指数(OI);酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-18、IL-1β水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠肺组织NF-κB/COX2通路相关蛋白及凋亡蛋白Caspase-3表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠肺组织呈现肺泡壁明显增厚,肺泡结构损坏,肺间质充血水肿,炎性细胞大量浸润等病理损伤,凋亡细胞比例、动脉血PaCO 2、BALF中IL-18及IL-1β水平、肺组织COX2、Caspase-3表达水平及p-NF-κB p65明显升高,动脉血PaO 2及OI明显降低,差异有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,右美托咪定低、中、高剂量组及尼莫地平组大鼠肺组织病理损伤减轻,凋亡细胞比例、动脉血PaCO 2、BALF中IL-18及IL-1β水平、肺组织COX2、Caspase-3表达水平及p-NF-κB p65降低,动脉血PaO 2及OI升高,且右美托咪定各组之间呈剂量依赖性,差异有统计学意义(均P<0.05);右美托咪定高剂量组与尼莫地平组相比,各指标差异无统计学意义(均P>0.05)。结论右美托咪定减轻缺血再灌注所致肺组织炎症损伤的作用机制可能是通过抑制NF-κB/COX2信号激活,从而实现降低肺细胞凋亡,修复肺功能。

HY-1B/COCTS热红外波段的交叉辐射定标方法研究

遥感传感器辐射定标是定量遥感应用与分析的基础。该文以具有高辐射精度的TERRA/MODIS传感器热红外第31、32通道为参考,采用了目标跟踪交叉定标法完成了对HY-1B/COCTS传感器热红外第9、10通道的辐射定标。选取2009年4月17、21、22、25、26日的5次双星同步观测太湖的白天数据,通过大气辐射传输模型MODTRAN对两传感器相应热红外通道进行大气透过率和大气热辐射的模拟,从MODIS的入瞳辐亮度等效模拟出COCTS的入瞳辐亮度,再结合COCTS影像上提取对应的DN值,进行多点线性回归,最终获得COCTS第9和第10通道的定标系数分别为:增益0.008 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1)/DN,偏置2.873 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1);增益0.006 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1)/DN,偏置3.913 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1)。将定标结果用于OCTS热红外通道的辐射校正,与MODIS等效计算的辐亮度相比,第9和第10通道的平均偏差分别为-0.070 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1)和-0.008 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1),均方根误差分别为0.532 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1)和0.083 Wm^(-2)sr^(-1)μm^(-1);将经辐射校正后的COCTS图像用于太湖水温反演,所得的平均偏差为1.47K。

秦皮素抑制NF-κB/COX-2信号通路改善PC12细胞损伤

目的研究秦皮素(fraxetin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12细胞)损伤的作用并考察炎症反应中相关蛋白的变化。方法采用MTT法研究秦皮素对PC12细胞活力的作用,筛选合适给药浓度。试验共分为3组即对照组(Control组)、LPS模型组和秦皮素保护组(fraxetin+LPS组)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活性变化;采用倒置显微镜和4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride(DAPI)荧光核染色法观察细胞形态学变化;采用real-time PCR法检测细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA水平;采用western blot法检测COX-2和NF-κB-p65蛋白表达水平。结果与模型组比较秦皮素保护组细胞存活率显著升高(P<0.01)。LPS模型组炎症因子IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平,NF-κB-p65和COX-2蛋白表达水平相对于对照组均明显升高(P<0.01)。与此同时秦皮素治疗组其炎症细胞因子mRNA水平,NF-κB和COX-2蛋白的表达水平均显著下调。结论秦皮素对LPS所致PC12细胞损伤有保护作用,其效应可能与抑制NF-κB/COX-2信号通路,降低炎症反应有关。

TLR4/NF-κB/COX-2致炎信号通路对幽门螺杆菌相关性慢性萎缩性胃炎发生、发展的影响及机制研究

目的探究TLR4/NF-κB/COX-2致炎信号通路对幽门螺杆菌(H.pylori)相关性慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)发生、发展的影响及机制。方法选取2017年6月至2018年7月我院消化内科收治的经临床胃镜和组织病理学活检检查确诊为H.pylori相关性慢性胃炎患者79例为本次研究对象,依据是否发生胃萎缩分为萎缩性胃炎组(40例)和非萎缩性胃炎组(39例)。另选取我院同时期健康体检者39名作为正常组。观察三组受试对象的组织病理学变化与H.pylori感染情况。分别采用qRT-PCR法和Western blotting法检测三组受试对象胃黏膜组织中TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达。分析萎缩性胃炎组患者胃窦、胃体、全胃不同胃黏膜萎缩病变程度与H.pylori感染和TLR4、p-NF-κB p65及COX-2表达的相关性。结果三组受试对象的一般临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,萎缩性胃炎组和非萎缩性胃炎组患者的胃黏膜组织病理损伤显著且H.pylori感染加剧,且萎缩性胃炎组较非萎缩性胃炎组更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR法和Western blotting法检测结果显示,萎缩性胃炎组和非萎缩性胃炎组患者的胃黏膜组织中TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65和COX-2表达较正常组均显著上调,且萎缩性胃炎组较非萎缩性胃炎组上调明显,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,萎缩性胃炎组患者胃窦、胃体、全胃不同胃黏膜萎缩病变程度与H.pylori感染和TLR4、p-NF-κB p65及COX-2的表达呈正相关(P<0.05)。结论 CAG患者胃黏膜组织中TLR4/NF-κB/COX-2致炎信号通路的异常活化与疾病发生、发展显著相关,可用于CGA患者早期筛查及胃黏膜萎缩病变程度的预测指标,对CAG的早期发现和防治具有重要临床意义和价值。

Influence of modulated structure on magnetic properties of NdFeB/Co multilayer thin films

The Nd Fe B/Co multilayer films were prepared by magnetron sputtering. After that, the samples were annealed at 600 ℃ for 20 min. The surface morphology, phase structures and magnetic properties of Mo（50 nm）/[Nd Fe B（100 nm）/Co（y）]×10/Mo（50 nm） thin films were researched by AFM, XRD and VSM, respectively. The results show that the films show stronger perpendicular magnetic anisotropy. When the thickness of Co layers is 10 nm, the coercivity Hc⊥ is the maximum, 295 k A/m. However, for y=10-20, the reduced remanence M/Ms of films has increased. When the thickness of Co layers is 20-30 nm, the Nd Fe B/Co multilayer films obtained more superior magnetic properties with M/Ms =0.95.

刺槐素通过下调NF-κB/COX-2表达抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖

目的:探讨刺槐素对卵巢细胞系SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法:体外培养的SKOV3细胞,用不同浓度刺槐素(浓度0、4、8、16、32μmol/L)分别处理SKOV3细胞24、48、72 h,MTT法测定细胞增殖;刺槐素(浓度分别为0、8、16、32μmol/L)处理SKOV3细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Bcl-2、COX-2、p-NF-κB的表达。结果:刺槐素对SKOV3细胞的活性具有显著抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;SKOV3细胞经刺槐素作用48 h后,细胞凋亡率从16.7%增加到37.5%;促凋亡蛋白Bax表达量上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下调;刺槐素可抑制SKOV3细胞COX-2及其上游调控基因p-NF-κB的表达。结论:刺槐素对SKOV3细胞活力具有抑制作用,并可促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p-NF-κB、下调COX-2表达,继而上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关。

桂枝茯苓丸对原发性痛经大鼠子宫组织NF-κB/COX-2/PGF_(2α)通路的影响

目的观察桂枝茯苓丸对原发性痛经(primary dysmenorrhea,PD)大鼠子宫组织核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)/前列腺素F_(2α)(prostaglandin F_(2α),PGF_(2α))通路的影响,探讨桂枝茯苓丸干预PD的机制。方法SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、桂枝茯苓丸组、布洛芬组,每组10只。采用苯甲酸雌二醇联合缩宫素建立PD大鼠模型。桂枝茯苓丸组、布洛芬组分别灌胃桂枝茯苓丸310 mg/kg、布洛芬1 mg/只;正常组、模型组均灌胃生理盐水10 mL/kg。灌胃10 d后,第11天记录各组大鼠扭体次数和潜伏期;观察子宫形态改变;ELISA法检测子宫组织中PGF_(2α)含量;Western blot检测子宫组织COX-2、NF-κB和磷酸化的NF-κB的水平。结果与正常组相比,模型组大鼠出现扭体反应,扭体次数显著增多(P<0.01),扭体潜伏期显著延长(P<0.01),子宫内膜大范围剥脱并有较严重的水肿,子宫组织PGF_(2α)含量以及COX-2、NF-κB以及磷酸化的NF-κB水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,桂枝茯苓丸组大鼠扭体次数显著减少(P<0.01),扭体潜伏期显著延长(P<0.01),子宫内膜剥脱少见且水肿程度较轻,子宫组织PGF_(2α)含量、COX-2和磷酸化的NF-κB水平显著降低(P<0.01)。结论桂枝茯苓丸能有效干预PD大鼠,其作用机制可能与抑制PD大鼠子宫组织NF-κB/COX-2/PGF;通路有关。

PCKS9通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性

目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是否通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)途径调节单核-内皮细胞黏附性。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVECs,real-time PCR与Western blot法检测PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白孵育或PCSK9 siRNA转染HUVECs,检测TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白与TLR4抑制剂瑞沙托维(TAK-242)或NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)共同孵育HUVECs,检测NF-κB p65与COX-2的mRNA和蛋白表达;COX-2抑制剂(NS398)与人重组PCSK9蛋白先后处理HUVECs后,加入THP-1单核细胞检测单核-内皮细胞黏附性。结果 ox-LDL上调HUVECs的PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均<0.05);人重组PCSK9蛋白在ox-LDL基础上上调TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均<0.05);PCSK9 siRNA转染可抑制ox-LDL对TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均<0.05);TAK-242抑制人重组PCSK9蛋白对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均<0.05);PDTC抑制人重组PCSK9蛋白对NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均<0.05);NS398可抑制人重组PCSK9蛋白的促单核-内皮细胞黏附作用(P均<0.05)。结论 PCSK9可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性。

NF-κB/COX-2信号通路与静脉血栓形成的相关性研究进展

VT是一种常见的血管疾病,多见于创伤或手术后,主要发生在下肢,是外科围手术期致死的主要原因之一。众多研究表明炎症与VT密切相关。而NF-κB/COX-2信号通路参与多种疾病的炎症反应过程,是导致炎症性疾病的重要机制之一,因此NF-κB/COX-2通路在VT中发挥重要作用,明确其作用机制能够为创伤、术后早期预测、诊断提供重要线索。以利于临床医师为患者制定个体化治疗方案,减少患者静脉血栓形成的远期并发症。

五味子乙素对CCl_(4)诱导的肝损伤大鼠NF-κB/COX-2的影响

目的探讨五味子乙素对四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝损伤的作用机制。方法不同浓度五味子乙素处理HepG2细胞,细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞活力,1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)清除活性测量五味子乙素的抗氧化活性。18只Wistar大鼠根据随机数字表法分为对照组、模型组和五味子乙素组,每组6只。模型组和五味子乙素组腹腔注射20%CCl_(4)(2mL/kg),每周3次,持续8周,诱导肝损伤。8周后,五味子乙素组每天以50mg/kg五味子乙素灌胃,对照组和模型组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。连续给药4周后,检测血清碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT),苏木精-伊红(HE)染色进行组织学分析,蛋白质印迹法分别检测肝组织和HepG2细胞核因子-κB(NF-κB)和环氧化酶-2(COX-2)的蛋白表达。结果五味子乙素的抗氧化活性随浓度的增加而增加[50、100、150和200μM:(72.29±0.54)%、(82.81±0.45)%、(91.74±0.98)%、(98.63±1.15)%,P<0.05],40、80μM五味子乙素可降低HepG2细胞活力[(59.23±13.35)%、(27.57±13.94)%,P<0.05],且呈剂量依赖性。与模型组比较,五味子乙素组大鼠体质量[(374.31±15.77)g比(297.89±13.47)g]显著升高,肝脏重量[(12.72±1.18)g比(14.84±1.73)g]和肝指数(0.034±0.002)比(0.050±0.007)显著降低(P<0.05)。五味子乙素组血清ALP[(146.42±6.48)U/L比(630.81±53.71)U/L]、AST[(69.92±8.49)U/L比(143.05±13.60)U/L]和ALT[(47.81±9.97)U/L比(153.82±16.34)U/L]较模型组均显著降低(P<0.05)。五味子乙素处理可明显减轻CCl_(4)引起的肝组织损害,抑制NF-κB和COX-2活化(P<0.05)。结论五味子乙素可能通过抑制NF-κB/COX-2活化来抑制CCl_(4)诱导的肝损伤。

下调HMGB2表达对肝癌LM3细胞上皮-间质转化的抑制作用及其AKT/mTOR信号通路机制

目的:探讨下调肝癌细胞中高迁移率族框蛋白2 (HMGB2)表达对肝癌细胞生物学行为及上皮-间质转化(EMT)进程的影响,并阐明其作用机制。方法:对数生长期的人肝癌LM3细胞分为阴性对照组和HMGB2 RNA干扰组(HMGB2 siRNA组),分别以Lipofectamin 2000为载体转染无关序列的RNA寡核苷酸(RNA oligo)和敲除HMGB2序列的RNA oligo。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平,分别采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力,采用Western blotting法检测2组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、 N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白表达水平。结果:与阴性对照组比较,HMGB2 siRNA组细胞中HMGB2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),HMGB2 siRNA组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.01),细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin、mTOR、AKT和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:下调HMGB2的表达可降低肝癌LM3细胞迁移和侵袭能力并抑制EMT,其作用机制可能与参与调节AKT/mTOR通路相关蛋白表达有关。

基于ERK/NF-κB/COX-2信号通路研究珠子参总皂苷改善对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的作用机制

研究珠子参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠肝损伤的影响及作用机制。将雄性昆明小鼠随机分为空白组、TSPJ组(200 mg·kg^(-1),ig)、模型组、APAP+TSPJ低剂量组(50 mg·kg^(-1),ig)、APAP+TSPJ中剂量组(100 mg·kg^(-1),ig)、APAP+TSPJ高剂量组(200 mg·kg^(-1),ig)和APAP+N-乙酰半胱氨酸组(200 mg·kg^(-1),ip)。给药组每天ig或ip相应的药物,每天1次,连续14 d。末次给药1 h后,除空白组和TSPJ组外,各组小鼠均灌胃给予500 mg·kg^(-1) APAP,24 h后收集小鼠血清与肝脏组织进行血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2、IL-6、IL-4、IL-10及肝组织中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的水平,苏木精-伊红染色观察肝组织形态学改变;实时定量PCR法测定肝组织中淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6G,Ly6G)、半乳糖凝集素3(galectin 3,Mac-2)、TNF-α、IL-1β、COX-2、IL-6、IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot法测定肝组织中Ly6G、Mac-2、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)、COX-2、核因子κB抑制因子α(inhibitor of nuclear factorκB protein α,IκBα)、磷酸化核因子κB抑制因子α(phosphorylated inhibitor of nuclear factorκB protein α,p-IκBα)、胞浆和胞核中核因子κB亚基p65(nuclear factorκB subunit p65,NF-κB p65)蛋白表达。结果显示,TSPJ可显著降低APAP诱导小鼠肝脏系数、血清中ALT、AST、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6、COX-2水平及肝组织LDH、MPO、MDA水平和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高血清中IL-4、IL-10含量及肝组织中GSH、CAT、SOD、T-AOC水平和肝组织中IL-4、IL-10 mRNA表达;改善肝脏病理损伤程度,抑制肝组织中性粒细胞浸润和巨噬细胞募集;降低肝组织中中性粒细胞标记物Ly6G、巨噬细胞标记物Mac-2和COX-2 mRNA和蛋白表达,降低p-ERK、p-IκBα、胞核NF-κB p65蛋白表达和p-ERK/ERK、p-IκBα/IκBα比率,升高胞浆NF-κB p65蛋白表达。以上结果表明,TSPJ对APAP诱导的小鼠肝损伤有显著保护作用、可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制与抑制ERK/NF-κB/COX-2信号通路激活,进而抑制炎性细胞浸润、炎症因子生成和抑制肝细胞损伤密切相关。

钢渣/氮掺杂改性活性炭催化过硫酸盐降解罗丹明B

以提高钢渣资源化利用和深度降解有机污染物为研究目标,通过改变氨气煅烧温度制备了系列钢渣/氮掺杂改性活性炭复合材料,并用于催化过硫酸钠处理罗丹明B(RhB)废水。同时采用N2吸附/脱附、XRD、XPS等手段对复合材料的孔结构和表面性质进行了表征。结果表明:氮元素的引入可改善复合材料中活性金属与活性炭之间的相互作用,从而提高复合材料的催化活性。以最优复合材料60%GZ/AC-N800为研究对象,在反应温度为35℃、PS加量为2 g/L和宽pH(3~11)操作条件下,反应30 min后罗丹明B(100 mg/L)的去除率可达88.7%~92.2%。动力学分析发现,60%GZ/AC-N800复合材料催化PS降解RhB符合准二级动力学。自由基掩蔽实验发现,该降解过程是自由基途径(SO_(4)^(·-)和·OH)和非自由基途径(^(1)O_(2))共同参与反应的氧化过程。

miR-124通过抑制TLR4/NF-κB/CCL2对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miR)-124通过抑制Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB/CC类趋化因子配体(CCL)2对脑梗死(CI)大鼠神经元凋亡的影响。方法通过线栓闭塞大脑中动脉法建立CI大鼠模型60只,以随机数表法平均分为5组:模型组、miR-124激活剂(miR-124 agomir)组、TLR4过表达质粒组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组,另取12只大鼠只分离颈动脉,作为假手术组。分组干预后,评测大鼠神经功能缺损情况,比较各组神经功能缺损评分;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠CI情况,比较各组CI面积;采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况,比较各组海马神经元凋亡率;采用试剂盒测量各组血清活性氧(ROS)及炎症因子环氧合酶(COX)-2、白细胞介素(IL)-17水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验检测各组脑组织miR-124表达;采用Western印迹实验检测各组脑组织凋亡及TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组分别比较,miR-124 agomir组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组相比,miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组各指标水平无显著变化(P>0.05)。结论miR-124可通过下调TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达,抑制炎症,减轻脑组织梗死及海马神经元凋亡,修复CI大鼠神经功能。