BR3胞外区保守结构域附近刚性区域分析

目的:分析BR3胞外区保守结构域附近刚性区域在BR3结合BAFF过程中的作用。方法:将BR3胞外区分成包含Dx L结构域的BR3-1和其C端相邻的BR3-2,构建BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重组质粒。将正确的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重组子转入大肠杆菌BL21中,诱导表达,并用蛋白A凝胶亲和层析柱纯化获得相应蛋白。ELISA检测其结合BAFF,BR3-1/2小肽对BR3-1-Fc与BAFF结合活性的影响。结果:表达纯化出纯度高达90%的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白。融合蛋白可与BAFF结合,且具有剂量依赖性。BR3-2小肽在高浓度条件下对BR3-1-Fc与BAFF的结合起促进作用,300μg/ml时,促进作用达20%。结论:BR3受体胞外区保守Dx L结构域相邻的BR3-2刚性结构区域也可与BAFF结合,在BR3与BAFF的高亲和性能中起作用,为进一步设计高亲和性能BAFF拮抗肽奠定了理论基础。

PRRSV CH-1R疫苗株N蛋白的克隆及原核表达

为了区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原是来自疫苗株还是野毒株,试验采用RTPCR和PCR方法从PRRSV CH-1R株中扩增出ORF7基因,通过T4连接酶将ORF7基因与p ET-28a(+)载体连接,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并以20%IPTG进行诱导表达。结果表明:重组菌可表达分子质量为16.0 ku的融合蛋白,且20%IPTG诱导3 h的表达效果最好;表达产物纯化后可得到纯度较高的目的蛋白,经Western-bolt分析可确认该蛋白为PRRSV CH-1R株N蛋白。说明在原核表达系统中可表达出PRRSV CH-1R株N蛋白,并且能够使其携带上多聚组氨酸(6×His-tag)标签,形成N-His融合蛋白,使该蛋白与其他PRRSV经典株的N蛋白形成差异化。

大跨度轨道交通桥梁抗震性能分析

为了解轨道约束作用和摩擦摆支座对轨道交通桥梁抗震性能的影响,以某大跨轨道交通桥梁[(85+135+85)m预应力混凝土连续梁]为背景,采用MIDAS Civil软件建立考虑轨道约束作用的线桥一体化有限元模型,选取承受惯性力最大的固定墩作为研究对象,研究轨道约束作用对桥梁抗震性能的影响和摩擦摆支座的减隔震效果,分析墩高对摩擦摆支座减隔震效果的影响。结果表明:考虑轨道约束作用后,桥梁的纵向自振频率有所提高,横向自振频率变化很小;考虑轨道约束作用时,固定墩的墩顶位移、墩底弯矩和墩底剪力比不考虑轨道约束作用时均明显增大;采用摩擦摆支座能显著降低固定墩的地震响应,摩擦摆支座具有良好的减隔震性能;摩擦摆支座的隔震效果随墩身高度的增加逐渐减小,摩擦摆支座适合在桥梁固定墩墩身刚度较大时采用。

伞盘结构对大长径比发动机药柱结构完整性的影响

为了提高大长径比发动机药柱结构完整性水平,基于三维黏弹性有限元法,计算某大长径比固体发动机在温度和内压荷载联合作用下的结构响应;研究伞盘结构及其位置对药柱最大Von Mises应变的影响规律;讨论当伞盘位于药柱中部时,伞盘最大Von Mises应变随伞盘宽度、深度以及顶部圆弧半径比的变化规律。结果表明,伞盘位于药柱中部时可以有效地降低大长径比药柱的最大Von Mises应变,增加伞盘宽度、深度或选取合适的半径比均可降低伞盘结构的最大Von Mises应变。所得结论可为固体发动机设计提供参考。

“一带一路”在东北亚拓展的条件、新态势与推进策略

东北亚是“一带一路”合作的重要节点。推动我国与东北亚国家之间的互联互通对于振兴东北老工业基地,促进中国及东北亚国家经济发展,以及加强区内政治互信保证东北亚地区安全稳定具有重要意义。目前地区内国家政治关系缓和,“一带一路”共识增强,制度化合作进程加快,区域合作动力增强。未来我国要抓住机遇,巩固与各国的政治互信,处理好与美国的关系;以冰上丝绸之路、第三方市场合作及对朝经贸合作为抓手打造新的合作增长点;发挥东北各省在对东北亚合作中的排头兵作用;整合多种合作机制,推动三圈融合打造东北亚经济圈。

新型结核病疫苗菌株在小鼠体内的毒性及安全性研究

目的观察由卡介苗(简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra(简称H37Ra菌株)为亲本菌株构建的融合菌株(简称B/R菌株)接种C57BL/6小鼠后在小鼠体内的毒性及其安全性。方法将204只C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组(36只)、BCG组(56只)、B/R组(56只)和H37Ra组(56只);分别皮内接种无菌生理盐水、BCG菌悬液、B/R菌株菌悬液、H37Ra菌株菌悬液0.1ml(含活菌数为1.0×106个),观察各组小鼠生存基本情况并记录接种后第3、6、9、12、15、18周小鼠体重;分别于接种后第2、3、6、9、12周取BCG组、B/R组、H37Ra组小鼠各4只,处死后摘取小鼠完整肺脏和脾脏称重后分别制成脏器组织匀浆,接种于罗氏培养基培养20d,计数各脏器菌落数(CFU);分别于接种后第3、6、9、12、15、18周,四组分别随机各取6只小鼠,脱颈处死后称取体重,摘取小鼠肺脏及脾脏在组织固定液中固定(固定前脾脏称重),48h后制作病理切片,HE染色后观察小鼠肺脏、脾脏的病理变化,并计算各组小鼠各时间点的脾脏系数。结果 (1)4组小鼠接种后一般生存状态良好,接种部位未出现明显溃疡、脓疱等。从接种后第1d^18周各组小鼠均无死亡,生存率为100%。接种后第3周、6周,四组之间小鼠体重相比差异无统计学意义(P>0.05),接种后第9周、15周,H37Ra组小鼠体重低于生理盐水组(P<0.05),接种后第12周,BCG组小鼠体重低于生理盐水组(P<0.05),接种后第18周,H37Ra组小鼠体重分别与生理盐水组、BCG组、B/R组相比均降低(P<0.05);(2)接种后第2周、3周、6周时小鼠脾脏定植细菌数(Log10cfu),H37Ra组、B/R组均较BCG组升高(P<0.05);B/R组与H37Ra组比较差异无统计学意义(P>0.05)。接种后第9周小鼠脾脏定植菌数(Log10cfu),H37Ra组较BCG组升高(P<0.05),B/R组分别与H37Ra组、BCG组相比差异无统计学意义(P>0.05)。接种后第12周小鼠脾脏定植细菌数(Log10cfu),H37Ra组、B/R组均较BCG组升高(P<0.05),B/R组较H37Ra组降低(P<0.05)。(3)在接种后第2周小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu),B/R组较BCG组升高(P<0.05);B/R组、BCG组分别于H37Ra组相比差异无统计学意义(P>0.05)。接种后第3周三组小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu)之间相比差异无统计学意义(P>0.05);接种后第6周小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu),H37Ra组较BCG组升高(P<0.05),B/R组分别与H37Ra组、BCG组相比差异无统计学意义(P>0.05);接种后第9周小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu),H37Ra组较BCG组升高(P<0.05);B/R组较H37Ra组降低(P<0.05),B/R组与BCG组相比差异无统计学意义(P>0.05);接种后第12周小鼠肺脏定植菌数(Log10cfu),B/R组、H37Ra组均较BCG组升高(P<0.05),B/R组与H37Ra组相比差异无统计学意义(P>0.05);(4)各时间点生理盐水组小鼠肺脏、脾脏均呈现正常病理征象。接种后第3~18周BCG组、H37Ra组及B/R组小鼠肺脏均表现出不同程度的炎细胞浸润和气道上皮细胞局部脱失,肺泡间隔增宽,部分肺间质水肿,但肺泡腔无改变,均未出现结核结节,第3~18周BCG组、H37Ra组和B/R组小鼠脾脏均有不同程度白髓比例升高,淋巴小结体积增大,动脉周围淋巴鞘增厚;红髓扩张淤血,巨噬细胞增多等改变;(5)接种后第3周、6周小鼠脾脏系数,BCG组、H37Ra组及B/R组均较生理盐水组明显升高(P<0.05);接种后第9周小鼠脾脏系数,H37Ra组及B/R组均较生理盐水组明显升高(P<0.05),BCG组与生理盐水组相比差异无统计学意义(P>0.05),接种后第12周小鼠脾脏系数,H37Ra组较生理盐水组显著升高(P<0.01),B/R组较生理盐水组升高(P<0.05);BCG组较H37Ra组降低(P<0.05)。接种后第15周、18周四组小鼠脾脏系数之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 B/R菌株的毒性较H37Ra菌株降低,与卡介苗相当,其使用安全性较好。

新型结核病疫苗融合菌株制备及其免疫学特性的研究

目的观察由卡介苗(BCG)与结核分枝杆菌国际标准弱毒株H37Ra(H37Ra菌株)构建的融合菌株(B/R菌株)生长特性及其在免疫小鼠体内的生长情况。方法分别测定用7H9培养基培养3、6、9、12、15、18、21、24、27和30d的B/R菌株、BCG和H37Ra菌液在波长600nm处的A值,以时间为横坐标,A600值为纵坐标,绘制细菌生长曲线。将C57BL/6小鼠随机分为B/R菌株、BCG和H37Ra菌株3组,每组30只,分别皮下接种B/R、BCG和H37Ra菌液0.1ml(含活菌数为1.0×106个),免疫15、30、45、60和75d后无菌条件下取小鼠肝脏、脾脏和肺脏,制成脏器组织匀浆,接种罗氏固体培养基斜面,培养20d后计数各脏器菌落数(Log10cfu)。结果细菌生长曲线显示,B/R菌株的适应调整期较长,6d后进入生长对数期,27d后进入稳定期,生长周期约30d左右。免疫15、30、45、60和75d小鼠肝脏、脾脏、肺脏定植细菌数(Log10cfu)B/R菌株组高于BCG和H37Ra菌株组。小鼠肝脏定植细菌数(Log10cfu)B/R菌株组与BCG和H37Ra菌株组比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫15、60及75d小鼠脾脏定植细菌数(Log 10cfu)B/R菌株组与BCG和H37Ra菌株组比较差异有统计学意义(P<0.05),免疫30和45d小鼠脾脏定植细菌数(Log10cfu)B/R菌株组与BCG组比较差异有统计学意义(P<0.05),与H37Ra菌株组比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫15和45d小鼠肺脏定植的细菌数(Log10cfu)B/R菌株组与BCG和H37Ra菌株组比较差异有统计学意义(P<0.05),免疫30、60和75d小鼠肺脏定植细菌数(Log10cfu)B/R菌株组与BCG组比较差异有统计学意义(P<0.05),与H37Ra菌株组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 B/R菌株的生长周期为30d,在小鼠体内至少存活2个月,定植能力较强。